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1、第4課時 實驗:生物組織中可溶性
還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定
知識精華
一、可溶性還原糖的鑒定原理:
生物組織中普遍存在的可溶性糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具有還原性的半縮醛基,因此叫還原性糖;蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛基,因此叫非還原性糖,不具有還原性。實際上本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中可溶性的還原糖存在與否,而不能鑒定可溶性的非還原性糖。
可溶性還原糖與斐林試劑(質(zhì)量濃度為0.1g/ml的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g/ml的硫酸銅溶液配制而成)混合后,可以生成磚紅色沉淀。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時,溶液的
2、顏色變化過程為:淺藍色 棕色 磚紅色
二、脂肪的鑒定原理:
鑒定生物組織中是否含有脂肪時,可用蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ,蘇丹Ⅲ染液遇脂肪的染色反應(yīng)為橘黃色,蘇丹Ⅳ染液遇脂肪的染色反應(yīng)為紅色。
三、蛋白質(zhì)的鑒定原理:
鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1g/ml的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.01g/ml的硫酸銅溶液。在堿性溶液NaOH中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)能與Cu2+ 作用,形成紫色或紫色的絡(luò)合物,這個反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵,因此,蛋白質(zhì)都
3、可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng),從而用來鑒定蛋白質(zhì)的存在。
題例領(lǐng)悟
例1:用斐林試劑鑒定可溶還原糖時,溶液的顏色變化過程為:
A、淺藍色 棕色 磚紅色 B、無色 淺藍色 棕色
C、磚紅色 淺藍色 棕色 D、棕色 綠色 無色
解析:斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后,立即生成淺藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此,答案為A
例2:將面團包在紗布中在清水中搓洗,鑒定黏留在紗布上的黏稠物質(zhì)和洗出的白漿用的試劑分別是:
4、A、碘液、蘇丹Ⅲ溶液 B、雙縮脲試劑、碘液
C、雙縮脲試劑、蘇丹Ⅳ染液 D、碘液 、斐林試劑
解析:白漿為淀粉,淀粉遇碘變藍,黏稠物質(zhì)為蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應(yīng)。因此,答案為B
自我評價
一、選擇題:
1、徒手切片時的刀口方向應(yīng)是 ( )
A、向前 B、向內(nèi) C、向左 D、向右
2、在鑒定蛋白質(zhì)樣品時,加雙縮脲試劑的正確操作方法是 ( )
A、先加A液,混合后再加B液 B、先加B液,混合后再加A液
C
5、、A、B液混合后立即加入 D、上述方法都可以采用
3、在生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實驗中,對實驗材料的選擇敘述中,錯誤的是 ( )
A、甘蔗莖的薄壁組織、甜菜的塊根等,都含有較多的糖且近于白色,因此可以用于進行可溶性還原糖的鑒定
B、花生種子含脂肪多且肥厚,是用于脂肪鑒定的理想材料
C、大豆種子蛋白質(zhì)含量高,是進行蛋白質(zhì)鑒定的理想的植物組織材料
D、雞蛋清蛋白質(zhì)多,是進行蛋白質(zhì)鑒定的動物材料
4、下列關(guān)于實驗一操作步驟的敘述中,正確的是
6、 ( )
A、用于鑒定可溶性還原糖的斐林試劑甲液和乙液,可直接用于蛋白質(zhì)的鑒定
B、脂肪的鑒定實驗中需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色的脂肪滴
C、鑒定可溶性還原糖時,要加入斐林試劑甲液搖勻后,再加入乙液
D、用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑A液與B液要混合均勻后,再加入含樣品的試管中,且必須現(xiàn)混現(xiàn)用
5、某學(xué)生在顯微鏡下觀察落花生子葉的切片,當(dāng)轉(zhuǎn)動細準(zhǔn)焦螺旋時,有一部分細胞較清晰,另一部分較模糊,這是由于 ( )
A、反光鏡末調(diào)好 B、標(biāo)本切得厚薄不均
C、細準(zhǔn)
7、焦螺旋末調(diào)好 D、顯微鏡物鏡損壞
6、在可溶性還原糖及蛋白質(zhì)鑒定時,事先留出一些組織樣液的目的是 ( )
A、與反應(yīng)后混合液的顏色做對比 B、失敗后再重做一次
C、下次實驗再用 D、組織樣液過多顏色反應(yīng)不明顯
二、非選擇題
在用花生種子做脂肪鑒定實驗時,基本步驟是:取一粒浸泡過 h的花生種子,去掉種皮;取花生的 ,進行徒手切片;選取 材料放在載玻片中央;用滴管在材料上滴2~3滴 染液,染色1min;用吸水紙吸去多余的染液,在材料上滴1~2滴體積分?jǐn)?shù)為 溶液,洗去浮色;再
8、用吸水紙吸去多余的洗液,在材料上滴1~2滴蒸餾水,蓋上蓋玻片,制成臨時裝片;在低倍顯微鏡下觀察,會發(fā)現(xiàn)材料細胞中存在大量被染成 色的圓形小顆粒。說明材料中存在 。要想進一步看清楚視野右上方的細胞時,應(yīng)將裝片向 移動,使細胞位于視野中央,再轉(zhuǎn)動 換上 ,再調(diào)節(jié) 就可以看清楚。
自我評價答案:
1、B 2、A 3、A 4、B 5、B 6、A
非選擇題
1、3~4 子葉 最薄的一片 蘇丹Ⅵ 50%的灑精 脂肪 右上方
轉(zhuǎn)換器 高倍物鏡 細準(zhǔn)焦螺旋