《（通用版）2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 課下達(dá)標(biāo)檢測(cè)（四十）基因工程（含解析）》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《（通用版）2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 課下達(dá)標(biāo)檢測(cè)（四十）基因工程（含解析）（9頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、課下達(dá)標(biāo)檢測(cè)（四十） 基因工程 一、基礎(chǔ)題點(diǎn)練 1．(2019·徐州模擬)已知限制性內(nèi)切酶XmaⅠ和SmaⅠ的識(shí)別序列分別為C↓CCGGG和CCC↓GGG。有關(guān)這兩種酶及應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．這兩種酶作用的底物都是雙鏈DNA B．DNA中出現(xiàn)這兩種酶識(shí)別序列的幾率不同 C．XmaⅠ切割DNA形成的黏性末端是—GGCC D．使用這兩種酶時(shí)需注意控制反應(yīng)溫度、時(shí)間等 解析：選B　限制酶作用的底物是雙鏈DNA分子；這兩種限制酶作用的核苷酸序列相同，所以這兩種識(shí)別序列在DNA中出現(xiàn)的的幾率相同；根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，CCCGGG的互補(bǔ)鏈?zhǔn)荊GGCCC，并根據(jù)XmaⅠ的切割位

2、點(diǎn)可知，切割后的黏性末端是—CCGG；溫度能影響酶的活性，所以使用酶時(shí)需要注意控制反應(yīng)溫度和時(shí)間等。 2．如圖表示的是三種黏性末端，下列說(shuō)法正確的是(　　) A．圖中所示黏性末端是由同種限制酶切割形成 B．若圖甲中的G堿基處發(fā)生突變，限制酶可能無(wú)法識(shí)別該切割位點(diǎn) C．圖中所示黏性末端是限制酶斷開氫鍵形成 D．目前常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒等幾類原核生物 解析：選B　產(chǎn)生甲黏性末端的限制酶的識(shí)別序列為，產(chǎn)生乙黏性末端的限制酶的識(shí)別序列為，產(chǎn)生丙黏性末端的限制酶的識(shí)別序列為，可見甲、乙、丙黏性末端是由3種限制酶作用產(chǎn)生的；限制酶具有專一性，能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某

3、種特定核苷酸序列，如果甲中的G發(fā)生突變，限制酶可能無(wú)法識(shí)別該切割位點(diǎn)；圖中所示黏性末端是限制酶斷開磷酸二酯鍵形成的；質(zhì)粒是環(huán)狀DNA分子，噬菌體和動(dòng)植物病毒都沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，它們都不屬于原核生物。 3．下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．蛋白質(zhì)工程的基礎(chǔ)是基因工程 B．蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中心法則 C．蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作，定向改變分子的結(jié)構(gòu) D．蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過(guò)的新型蛋白質(zhì)分子 解析：選C　蛋白質(zhì)工程是通過(guò)基因修飾或基因合成對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或合成新的蛋白質(zhì)，故蛋白質(zhì)工程的基礎(chǔ)是基因工程；蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中

4、心法則；蛋白質(zhì)工程是通過(guò)改造基因來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)分子的改造的；蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生出自然界中不曾存在過(guò)的新型蛋白質(zhì)分子。 4．(2019·南通模擬)下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取DNA的材料，處理方法有所不同 B．在切碎的菜花中加入一定量的洗滌劑和食鹽，充分研磨，過(guò)濾收集濾液 C．將NaCl溶液濃度調(diào)至2 mol/L，用單層濾紙過(guò)濾獲取析出物 D．利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提純DNA 解析：選C　雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取DNA的材料，處理方法有所不同，動(dòng)物細(xì)胞只要加蒸餾水使細(xì)胞吸

5、水破裂，植物細(xì)胞需要加洗滌劑和食鹽研磨；在切碎的菜花中加入一定量的洗滌劑和食鹽，充分研磨，過(guò)濾收集濾液；將NaCl溶液濃度調(diào)至2 mol/L，用多層紗布過(guò)濾獲取濾液；利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提純DNA。 5．下列是利用肝臟細(xì)胞粗提取DNA實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)關(guān)鍵操作步驟，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) 步驟1：向8 g豬肝中加入25 mL 0.1 mol/L NaCl、0.05 mol/L檸檬酸鈉緩沖液→冰浴、研磨、離心 步驟2：取沉淀，加入40 mL緩沖液、20 mL異戊醇，振勻后，緩慢加固體NaCl使溶液濃度達(dá)到2 mol/L，再離心 A．步驟1中，

6、加入檸檬酸鈉緩沖液的目的是維持pH的穩(wěn)定 B．步驟1中，冰浴處理的主要原理是低溫下DNA水解酶容易變性 C．步驟2中，異戊醇的作用可能是使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)因變性而沉淀 D．步驟2中，離心后應(yīng)取上清液，因?yàn)镈NA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比較大 解析：選B　步驟1中，加入檸檬酸鈉緩沖液的目的是維持pH的穩(wěn)定；低溫不會(huì)使酶變性失活，只能降低酶的活性；步驟2中，DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比較大，因此異戊醇的作用可能是使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)因變性而沉淀；步驟2中，離心后應(yīng)取上清液，因?yàn)镈NA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比較大。 6．限制酶MunⅠ和

7、限制酶EcoRⅠ的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)分別如下： —C↓AATTG—和—G↓AATTC— 如圖表示某一目的基因片段與質(zhì)粒拼接形成重組質(zhì)粒的過(guò)程，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．用限制酶EcoRⅠ切割目的基因，同時(shí)用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒 B．兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì) C．限制酶能使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 D．將重組質(zhì)粒同時(shí)用2種限制酶切割則會(huì)形成2種DNA片段 解析：選D　由圖可知，目的基因兩側(cè)都是限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，因此應(yīng)選用限制酶EcoRⅠ切割含有目的基因的外源DNA分子，質(zhì)粒中含有限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)

8、，但EcoRⅠ的切割位點(diǎn)位于標(biāo)記基因中，用其切割會(huì)破壞標(biāo)記基因，因此為保證重組質(zhì)粒表達(dá)載體的準(zhǔn)確構(gòu)建，應(yīng)選用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒；圖中兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì)；限制酶的作用是使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開；將重組質(zhì)粒同時(shí)用2種限制酶切割則會(huì)形成3種DNA片段。 二、高考題型練 7．(2019·成都模擬)如圖1所示為用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因及其上DNA片段示意圖；圖2所示為三種質(zhì)粒示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。EcoRⅠ、PvuⅠ等為限制酶及其切割的位點(diǎn)。復(fù)制原點(diǎn)是在基因組上復(fù)制起始的一段序列，是指質(zhì)粒在受體細(xì)胞中復(fù)

9、制時(shí)的起點(diǎn)。 (1)組成片段D的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元素是____________。 (2)圖2中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C能否作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒？________(填“能”或“否”)，請(qǐng)說(shuō)明理由________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅為10－7，用質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒，為了篩

10、選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在導(dǎo)入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況不可能的是__________________________________________________，可能性最大的是________________________________________________。 (4)若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入至山羊的________(細(xì)胞)中。 解析：(1)脫氧核糖和磷酸交替連接構(gòu)成DNA片段D的基本骨架，脫氧核糖由C、H、O三種元素組成，組成磷酸的元素是H、P、O；磷脂

11、雙分子層構(gòu)成細(xì)胞膜的基本骨架，磷脂分子是由C、H、O、N、P組成，可見組成片段D的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元素是C、H、O、P。(2)分析圖2可知：質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，進(jìn)而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制，所以質(zhì)粒A、質(zhì)粒C均不能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒。(3)用質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒，當(dāng)用和目的基因相同的限制酶(PvuⅠ)切割時(shí)，Tc(四環(huán)素抗性基因)遭到破壞，而Ap(氨芐青霉素抗性基因)結(jié)構(gòu)完好，因此在重組質(zhì)粒導(dǎo)入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長(zhǎng)狀況不可能的是在含四環(huán)

12、素的培養(yǎng)基上能正常生長(zhǎng)，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)。因重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅為10－7，所以可能性最大的是在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長(zhǎng)。(4)若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入山羊的受精卵中。 答案：(1)C、H、O、P　(2)否　質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制　(3)在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長(zhǎng)，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)　在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長(zhǎng)　(4)受精卵 8．水稻是一種重要的糧

13、食作物，選育高抗性良種是有效防治病蟲危害、增加水稻單位面積產(chǎn)量的關(guān)鍵措施。轉(zhuǎn)基因技術(shù)為得到抗病蟲水稻種子開辟了一條新路。下面是水稻某抗性基因獲得的過(guò)程。據(jù)圖回答下面的問(wèn)題： (1)cDNA文庫(kù)中的基因在基因組文庫(kù)中____________。(填“都有”“都沒(méi)有”或“有一部分”)。 (2)B過(guò)程需要的酶________(填“存在”或“不存在”)于正常真核生物體內(nèi)，圖示中含目的基因的細(xì)胞群________(填“是”或“不是”)水稻的體細(xì)胞。 (3)如果不建基因文庫(kù)，但需要大量的目的基因Ⅰ和Ⅱ，可分別利用圖中________和________為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所使用酶的顯

14、著特點(diǎn)是__________。 (4)抗性基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，僅一條染色體含抗性基因，該基因的傳遞________(填“遵循”或“不遵循”)孟德爾分離定律，試說(shuō)明判斷依據(jù)：________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)cDNA文庫(kù)是部分基因文庫(kù)，基因組文庫(kù)是全部基因文庫(kù)，所以cDNA文庫(kù)中的基因在基因組文庫(kù)中都有。(2)B過(guò)程是由m

15、RNA獲取cDNA的過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，逆轉(zhuǎn)錄酶在正常真核細(xì)胞中不存在，圖示中含目的基因的細(xì)胞群不是水稻的體細(xì)胞。(3)如果不建基因文庫(kù)，但需要大量的目的基因Ⅰ和Ⅱ，可分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所使用酶的顯著特點(diǎn)是耐高溫。(4)抗性基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，僅一條染色體含抗性基因，該基因的傳遞遵循孟德爾分離定律，因?yàn)閮H一條染色體含抗性基因，另一條沒(méi)有其等位基因，相當(dāng)于雜合子。 答案：(1)都有　(2)不存在　不是　(3)DNA　cDNA　耐高溫　(4)遵循　僅一條染色體含抗性基因，另一條沒(méi)有其等位基因 9．(2019·太原模擬)為增加菊花的花色類型，研

16、究者從其他植物的cDNA文庫(kù)中提取出花色基因C(圖1)，擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花細(xì)胞中。圖3表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)。請(qǐng)分析回答： (1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因C的原理是__________。 (2)圖2所示質(zhì)粒被________________切割獲得的產(chǎn)物可與圖1所示基因C連接，理由是________________________________________________。 (3)經(jīng)BamHⅠ處理后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后，基因C不能表達(dá)，原因是質(zhì)粒酶切部位的兩端無(wú)________________

17、，導(dǎo)致基因C不能________。 (4)在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，________(填“能”或“不能”)篩選出含有插入基因C的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因C的原理是DNA雙鏈復(fù)制。(2)據(jù)圖3可知，由于BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同

18、的黏性末端，因此圖2所示質(zhì)粒被BamHⅠ和Sau3AⅠ切割獲得的產(chǎn)物可與圖1所示基因C連接。(3)據(jù)圖可知，經(jīng)BamHⅠ處理后構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入菊花細(xì)胞后，基因C不能表達(dá)，原因是質(zhì)粒酶切部位的兩端無(wú)啟動(dòng)子和終止子，導(dǎo)致基因C不能轉(zhuǎn)錄。(4)由于含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌均含有抗四環(huán)素基因，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，所以在添加四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上，不能篩選出含有插入基因C的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌單菌落。 答案：(1)DNA雙鏈復(fù)制　(2)BamHⅠ和Sau3AⅠ　兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端　(3)啟動(dòng)子和終止子　轉(zhuǎn)錄　(4)不能　含質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌均含有抗四

19、環(huán)素基因，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng) 10.人胰島素基因的克隆操作過(guò)程如圖所示，其中mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成的DNA稱為cDNA?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)提取分離組織細(xì)胞中的人胰島素mRNA時(shí)，最應(yīng)選擇________細(xì)胞，過(guò)程①②需要原料是__________________。 (2)通過(guò)將所有的cDNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，去感染細(xì)菌，可以建立包括目的基因在內(nèi)的________，若使用質(zhì)粒載體，其上存在________________基因，有助于質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞中。此過(guò)程還可以使用________作為載體。(A.動(dòng)物病毒　B．植物病毒　C．噬菌體)。 (3)除了上述方法外，還可以使用____

20、________方法擴(kuò)增目的基因。不同的是，后者的目的基因若為人胰島素原基因，需要導(dǎo)入________(填“真核”或“原核”)受體細(xì)胞中。 解析：(1)人體細(xì)胞中只有胰島B細(xì)胞可表達(dá)胰島素基因，提取人胰島素mRNA時(shí)，最應(yīng)選擇胰島B細(xì)胞，過(guò)程①②為合成DNA的過(guò)程，需要(四種)脫氧核糖核苷酸為原料。(2)通過(guò)將所有的cDNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，去感染細(xì)菌，可以建立包括目的基因在內(nèi)的基因(cDNA)文庫(kù)；若使用質(zhì)粒載體，其上應(yīng)存在控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因，有助于質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞中。噬菌體可侵染細(xì)菌，動(dòng)物病毒、植物病毒不能侵染細(xì)菌，此過(guò)程還可以使用噬菌體作為載體。(3)用PCR技術(shù)可擴(kuò)增目的基因。

21、PCR擴(kuò)增的人胰島素原基因含有內(nèi)含子序列，原核細(xì)胞中缺少轉(zhuǎn)錄后切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)序列的機(jī)制，因此應(yīng)將人胰島素原基因，導(dǎo)入真核受體細(xì)胞中。 答案：(1)胰島B　(四種)脫氧核糖核苷酸　(2)基因文庫(kù)　控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的　C　(3)PCR　真核 11．如圖表示生物實(shí)驗(yàn)中通過(guò)研磨提取有關(guān)物質(zhì)的操作過(guò)程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)若圖示為“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)操作： ①圖中實(shí)驗(yàn)材料A可以是下面的________(填字母)。 a．花菜　b．香蕉　c．豬肝　d．豬血 ②若選用植物組織，研磨前加入的B一般為________和洗滌劑，前者的作用是____________。 ③實(shí)驗(yàn)中，將含

22、有一定雜質(zhì)的DNA絲狀物分別放入2 mL如表所示的3種溶液中，經(jīng)攪拌后過(guò)濾，獲得相應(yīng)的3種濾液，含DNA最少的是濾液________。 溶液種類 濾液 1 2 mol/L的NaCl溶液 D 2 0.14 mol/L的NaCl溶液 E 3 體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液 F (2)若圖示為“葉綠體色素的提取和分離”的實(shí)驗(yàn)操作： ①研磨前加入的B應(yīng)包括________________________________________。 ②將研磨液進(jìn)行過(guò)濾時(shí)，需要在漏斗基部放上________。 解析：(1)①DNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中，原則上只要含有DNA的生物材料都

23、可以作為實(shí)驗(yàn)材料，花菜、香蕉、豬肝都含有DNA，都可以作為該實(shí)驗(yàn)的材料，而豬為哺乳動(dòng)物，其成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核和細(xì)胞器，即不含DNA，因此不能作為該實(shí)驗(yàn)的材料。②若選用植物組織，研磨前需加入食鹽和洗滌劑，其中食鹽能溶解DNA，洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜。③DNA能溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，濾液D中含較多的DNA，在0.14 mol/L的NaCl溶液中大部分DNA析出，濾液E中DNA較少，DNA不溶于體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液，濾液F中含DNA最少。(2)①葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，研磨前需加入無(wú)水乙醇(溶解色素)、二氧化硅(使研磨更充分)和碳酸鈣(防止色素被破壞)。②將研磨液進(jìn)

24、行過(guò)濾時(shí)，需要在漏斗基部放上尼龍布。 答案：(1)①abc?、谑雏}　溶解DNA　③F　(2)二氧化硅、碳酸鈣和無(wú)水乙醇(或丙酮)　(一層)尼龍布 12.L-肉堿具有參與脂肪氧化、抗疲勞、延遲患阿爾茨海默綜合征等功能。據(jù)報(bào)道大腸桿菌能將巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿，但效率較低?？蒲腥藛T通過(guò)基因工程將BCD基因、F基因以及T基因?qū)氲酱竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)以提高L-肉堿的轉(zhuǎn)化率。實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果如圖所示，分析并回答下列問(wèn)題： (1)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用PCR技術(shù)獲得目的基因，PCR反應(yīng)體系需要加入的有機(jī)物有DNA模板、dNTP、耐高溫DNA聚合酶和________。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不能將BCD基因、F基因以及T基

25、因直接導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌，原因是____________________________________________，并能遺傳給下一代。圖中兩個(gè)重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動(dòng)子T7，T7是______________識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。 (2)將重組質(zhì)粒1和重組質(zhì)粒2導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，應(yīng)用________處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于______________________的感受態(tài)。 (3)為了篩選出同時(shí)含有BCD基因、F基因以及T基因的大腸桿菌，實(shí)驗(yàn)的思路是_________________________________________

26、_________________。 (4)研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿是一個(gè)可逆反應(yīng)過(guò)程，得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時(shí)后，L-肉堿的含量基本穩(wěn)定，此時(shí)可以________________________________，以提高產(chǎn)量。 解析：(1)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。它可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。PCR反應(yīng)體系需要加入的有機(jī)物有DNA模板、dNTP、耐高溫DNA聚合酶和(兩種)引物。由于目的基因無(wú)法直接在受體細(xì)胞中表達(dá)，因此為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并能夠表達(dá)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

27、不能將BCD基因、F基因以及T基因直接導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌，使其能遺傳給下一代。圖中兩個(gè)重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動(dòng)子T7，T7是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。(2)使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。一般將受體大腸桿菌用Ca2＋處理，使細(xì)胞處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)，有利于含有目的基因的重組質(zhì)粒容易進(jìn)入受體細(xì)胞。(3)重組質(zhì)粒1上含有BCD基因、卡那霉素抗性基因，重組質(zhì)粒2上含有F基因、T基因及氯霉素抗性基因，因此在同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌，就是同時(shí)含有BCD基

28、因、F基因以及T基因的大腸桿菌。(4)研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿是一個(gè)可逆反應(yīng)過(guò)程，在可逆反應(yīng)中，減少生成物濃度，可使反應(yīng)向正方向進(jìn)行。因此得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時(shí)后，L-肉堿的含量基本穩(wěn)定，此時(shí)可以及時(shí)移除產(chǎn)物(更換培養(yǎng)液)，使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進(jìn)行，以提高產(chǎn)量。 答案：(1)(兩種)引物　使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能夠表達(dá)(使目的基因在受體細(xì)胞中完成轉(zhuǎn)化)　RNA聚合酶　(2)Ca2＋(CaCl2)　易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子　(3)在同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌　(4)及時(shí)移除產(chǎn)物(更換培養(yǎng)液)，使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進(jìn)行 9