《湖南省新田縣高三生物二輪復習 專題8 第2講 微生物的培養(yǎng)與應用學案》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《湖南省新田縣高三生物二輪復習 專題8 第2講 微生物的培養(yǎng)與應用學案（5頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、 第2講 微生物的培養(yǎng)與應用 考點一 微生物的實驗室培養(yǎng) 一、基礎知識 1、培養(yǎng)基 （1）營養(yǎng)組成：一般都含有 碳源 、 氮源 、 水 和 無機鹽 。 （2）種類：按物理狀態(tài)分有 固體 培養(yǎng)基（瓊脂的作用:作 凝固劑 ）和 液體 培養(yǎng)基； 按功能或用途分有 選擇 培養(yǎng)基和 鑒別 培養(yǎng)基。 （3）培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加 維生素 ，培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基pH調為 酸性 ； 培養(yǎng)細菌時需要將pH調為 中性或微堿性 ，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供 無氧 條件。 2、無菌技術： （1）無菌技術的目的是 獲得純凈培養(yǎng)物 ，此外還可以防止 感染實驗操作者 。

2、 獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是 防止外來雜菌的入侵 ；使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要 滅菌 處理。 （2）無菌技術主要通過 消毒 和 滅菌 來避免雜菌的污染。 常用的消毒方法有：煮沸消毒、巴氏消毒、紫外線消毒、化學藥劑消毒 。 滅菌的方法：（1）接種環(huán)、接種針等接種用具用 灼燒 滅菌，所用器具是 酒精燈 ； （2）玻璃器皿、金屬用具可使用 干熱 滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱 ； （3）培養(yǎng)基、無菌水等使用 高壓蒸汽 滅菌法，所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 ； 二、大腸桿菌的純化培養(yǎng)：可分成 制備培養(yǎng)基 和 純化大腸桿菌 兩個階段。 1、制備牛

3、肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 （1）操作步驟： 計算 → 稱量 → 溶化 → 滅菌 → 倒平板 。 〖思考1〗在稱量操作中，動作要迅速，主要是為了防止 防止牛肉膏吸收空氣中水分 。 〖思考2〗溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是防止 瓊脂糊底而導致燒杯破裂 。 （2）倒平板操作：待培養(yǎng)基冷卻至 50 ℃左右時在 酒精燈火焰 附近進行操作。 2、純化大腸桿菌 接種微生物常用的方法有 平板劃線法 和 稀釋涂布平板法，接種工具分別是 接種環(huán) 和 涂布器。接種前接種工具都應先 燃燒 滅菌，且待冷卻后才接種操作的目的是 以免溫度太高，殺死菌種 。 整個接種過程都應

4、在 酒精燈火焰 附近進行。 三、菌種保藏的方法 1、臨時保藏法：放在 4℃ 的冰箱中保藏，主要用于 頻繁使用 的菌種。 2、甘油管藏法：放在 -20℃ 的冷凍箱中保存，主要用于 長期使用 的菌種。 四、簡答題 〖思考3〗平板冷凝后，要將平板倒置的作用是 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防 止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染 。 〖思考4〗每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)的目的是 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次 劃線的菌種只來源于上次劃線的末端 。 〖思考5〗劃線操作結束時仍需灼燒接種環(huán)的目的是 避免接種環(huán)上的細菌污染環(huán)境和感

5、染操作者 。 〖思考6〗從第二次劃線操作開始，總是從上一次劃線的末端開始劃線的目的是 使細菌的數目隨著 劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落 。 考點二 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數 一、基礎知識： 1、尿素細菌能合成脲酶 將尿素CO(NH2)2]分解為CO2和 NH3 。 2、篩選微生物的原理：人為提供有利于 目的菌株 生長的條件，同時 抑制或阻止 其他微生物生長。 例如：培養(yǎng)基中不加入有機物可以篩選 自養(yǎng)型 微生物； 培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以篩 選 固氮 的微生物； 加入

6、高濃度的食鹽可篩選出 耐鹽 的金黃色葡萄球菌。 3、統(tǒng)計菌落數目常用方法是 稀釋涂布平板法 ?！敬送膺€可用 顯微鏡直接計數 方法測定】 這種方法統(tǒng)計的菌落數往往活菌的實際數目 低 。為了保證結果準確，選擇菌落數在 30～300 的平板進行計數，且每個稀釋濃度涂布 3 個平板，再取平均值。 4、排除培養(yǎng)基是否被污染的方法：相同條件下培養(yǎng)沒有接種微生物的空白培養(yǎng)基看是否有菌落生成。 二、實驗設計 1、土壤取樣時一般要先鏟去 表層土 ，取樣用的器具使用前都需要 滅菌 。 2、樣品的稀釋：不同微生物的稀釋倍數 不同 。 3、微生物的培養(yǎng)與觀察：放在 恒溫箱 中培養(yǎng)，選取菌落數目

7、 穩(wěn)定 時的記錄作為結果。 4、鑒定：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加酚紅 指示劑變 紅 色。 ※ 統(tǒng)計細菌數目的其它方法: 濾膜法 ，將大腸桿菌接種到 伊紅美藍 培養(yǎng)基中菌落呈 黑 色。 考點三 分解纖維素微生物的分離 一、基礎知識： 1、纖維素酶是一種 復合酶 ，它至少包括三種組分：C1酶、CX酶 和 葡萄糖苷酶 。 2、纖維素分解菌的篩選 （1）方法： 剛果紅 染色法。 （2）原理：剛果紅（CR）可以與纖維素形成 紅色復合物 ，但并不與被 纖維素酶 分解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當培養(yǎng)基中的纖維素被分解后，會出現(xiàn)以 纖維素分解菌 為中心的 透明圈 ，我們可以

8、通過是否產生 透明圈 來篩選纖維素分解菌。 ※ 方法一：先培養(yǎng)微生物，再用剛果紅染色；【加入NaCl溶液的作用是將結合不牢固的剛果紅洗去】 方法二：在倒平板時就加剛果紅染色。 二、實驗設計 〖思考1〗選擇培養(yǎng)的目的 增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需的微生物 。 〖思考2〗選擇培養(yǎng)的操作是：將培養(yǎng)瓶固定在搖床上 振蕩培養(yǎng) ，直至培養(yǎng)液變 混濁 。 〖思考3〗為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？ 答：因為只有能適應這種營養(yǎng)條件的微生物才能繁殖，而其它微生物的繁殖被抑制。 ※ 課題延伸：為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進行 發(fā)酵產纖維素酶 的實驗，

9、纖維素酶的發(fā)酵方法有 液體 發(fā)酵和 固體 發(fā)酵。 單元檢測 1、某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出能高效降解脂肪的菌株。請回答： （1）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。 （2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈 狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行 處理。為了排除 ，需設置接種等量 的培養(yǎng)基作為空白對照。 （3）為了篩選出

10、菌株，可將適量的 試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是 ，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。 （4）通過純化培養(yǎng)得到的菌種應放在 中保存，以便長期使用。 2、每生物興趣小組為了探究土壤中的微生物對尿素是否有分解作用，設計了以下實驗，并成功篩選到能高效降解尿素的細菌（目的菌）．培養(yǎng)基成分如下表所示，實驗步驟表格所示．請分析回答問題： KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4?7H2O 0.2g 葡萄糖 1g 尿素 10g 瓊脂 15g 將上述物質溶

11、解后，用蒸餾水定容到1 000mL （1）土壤中分解尿素的細菌的鑒定方法及原理：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 指示劑，細菌合成的 將尿素分解為 ，導致pH升高，使指示劑變?yōu)榧t色． （2）培養(yǎng)基中加入瓊脂的作用是 。加入尿素的目的是篩選目的菌，從這個角度分析這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。 （3）“目的菌”生長所需的碳源來自培養(yǎng)基中的 ，實驗中需要振蕩培養(yǎng)，原因是 。 （4）圖1是利用 法進行微生物接種，所用的接種工具是

12、 。關于圖1的操作方法和結果，敘述正確的是 ． A．除第一次外，每次劃線都要從上次劃線的末端開始 B．每次次劃線前后都要對接種工具滅菌，且目的相同 C．整個接種劃線操作都要在酒精燈火焰旁進行 D．接種完成后需放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，且皿蓋在上 3、某實驗小組為了研究pH對纖維素分解菌產生的纖維素酶活性的影響，將纖維素分解菌分別接種在pH不同的剛果紅纖維素培養(yǎng)基中，通過觀察出現(xiàn)透明圈的最早時間和24 h后透明圈直徑的大小來判斷纖維素酶活性的高低，實驗流程如圖乙所示： 土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→接種至不同pH剛果紅－纖維素培養(yǎng)基中 （1）纖維素酶是一種

13、復合酶，其中______________能將纖維二糖分解為葡萄糖。從土壤中篩選出分解纖維素的微生物的方法叫____________染色法。 （2）實驗流程中，選擇培養(yǎng)的目的是___________________________。選擇培養(yǎng)基中應該加入 ____________作為唯一的碳源，另外還要加入的基本營養(yǎng)物質有_____________________。 （3）為了說明選擇培養(yǎng)基對纖維素分解菌起到了選擇的作用，應怎樣設置對照實驗？ __________________________________________________________。 （4）根據流程圖可

14、知，將纖維素分解菌接種到培養(yǎng)基上所用的方法為_____________________。本實驗中該接種方法所用的培養(yǎng)基從物理狀態(tài)看，屬于_________培養(yǎng)基。 （5）該實驗小組設置了pH分別為6、7、8的三組實驗進行觀察，得到了如下的實驗結果： pH 出現(xiàn)透明圈的最早時間(h) 24h后透明圈的直徑(cm) 6 6 4.42 7 10 3.66 8 24 1.33 通過上述結果可知，該實驗的自變量是___________，纖維素分解菌更適合在偏________ (填“酸”、“堿”或“中”)性環(huán)境下生長。 參考答案： 1、（1）豆油 選擇 （2）倒置 系列稀釋（或“梯度稀釋”） 無菌水 實驗組中非測試因素對實驗結果的影響（培養(yǎng)基被污染） （3）蘇丹Ⅳ（或“蘇丹Ⅲ”） 出現(xiàn)透明圈（不出現(xiàn)紅色圈或橘黃色圈） （4）-20℃的冷凍箱 2、（1）酚紅 脲酶 氨 （2）作凝固劑 選擇 （3）尿素 葡萄糖 為目的菌提供氧氣 （4）平板劃線 接種環(huán) AC 3、（1）葡萄糖苷酶 剛果紅 （2）增加纖維素分解菌的數量? 纖維素? 氮源、水和無機鹽 （3）將培養(yǎng)基中的纖維素改為葡萄糖，其他條件相同 （4）稀釋涂布平板法?固體 （5）pH? 酸 5