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1、 第37講　微生物技術 [考綱要求]　1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測定。3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。4.利用微生物進行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應用。 考點一　培養(yǎng)基對微生物的選擇作用及微生物的純培養(yǎng) 一、培養(yǎng)基的制備 1.培養(yǎng)基的配制和滅菌 (1)實驗原理 ①培養(yǎng)基 a.含義：人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定和保存各種微生物。 b.成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和無機鹽等。 ②選擇培養(yǎng)基 a.選擇依據(jù)：不同種類微生物的生長繁殖對營養(yǎng)的要求不同。 b.選擇途徑：人為控制培養(yǎng)基的pH

2、、碳源、氮源、滲透壓等條件。 c.選擇結果：使選擇的培養(yǎng)基利于某類或某種微生物的生長，而不利于其他微生物的生存，可以達到分離、培養(yǎng)不同微生物的目的。 ③滅菌 a.滅菌原因：及時殺滅培養(yǎng)基中的微生物，同時防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的改變。 b.常用的滅菌方法：高壓蒸汽滅菌。 (2)方法步驟 培養(yǎng)基的制作流程為：稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→加塞和包扎→滅菌→擺斜面及倒平板。 2.培養(yǎng)基的種類 培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。 二、培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 1.探究不同培養(yǎng)基中生長的優(yōu)勢菌群 探究程序：問題→作出假設→設計實驗→實施實驗→得出結論→表達交

3、流。 2.菌落 (1)含義：將微生物通過某種方法接種到適于生長的固體培養(yǎng)基表面上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間后，單個的菌體或孢子生長繁殖成的一個個肉眼可見的細胞群體。 (2)細菌與酵母菌的菌落特征 細菌菌落的共同特征為：濕潤、黏稠、易用接種環(huán)挑起，菌落各部位顏色一致。酵母菌菌落外形上與細菌極為相似，但比細菌菌落大而厚，顏色也較單調(diào)。霉菌菌落較疏松，常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細菌菌落大幾倍到幾十倍。 (3)優(yōu)勢菌群的培養(yǎng)基 細菌生長需要的氮源高(C/N為4∶1)，pH中性或微堿性(pH7.2～7.6)，因此培養(yǎng)細菌常采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。酵母菌和霉菌生長所需的碳源含量高(C

4、/N為16∶1)，pH偏酸性(pH5～6)，因此分離真菌常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(簡稱PDA)。 三、實驗：微生物的分離與純化 (一)實驗原理 1.分離的依據(jù)：微生物的分離與純化就是將待檢測微生物樣品通過劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品中的每一個細胞或孢子都可以生長繁殖形成單個菌落。 2.純化的依據(jù)：將單個菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個微生物的純種。 (二)方法步驟 1.微生物的分離 (1)稀釋：用1 mL無菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9 mL無菌水的大試管中，充分混勻，然后用無菌吸管從此試管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL無菌水的試管中

5、，混合均勻，依次類推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。 (2)劃線或涂布 ①平板劃線分離法：在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液一環(huán)在平板上劃線，常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，做好標記。 ②涂布分離法：取3個平板，底面分別用記號筆寫上10－4、10－5、10－6三種稀釋度，然后用無菌吸管分別吸取相應稀釋度的稀釋液各0.1 mL，放入已標記好的平板上，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置5～10 min，使菌液吸附進培養(yǎng)基。 (3)培養(yǎng)：將劃線或涂布接種的平板倒

6、置于培養(yǎng)箱或溫室中37 ℃培養(yǎng)16～24 h，即可長出單個菌落。 2.接斜面 分別從培養(yǎng)后長出的單個菌落上挑取少許細胞，接種到斜面培養(yǎng)基上，置培養(yǎng)箱或溫室37 ℃培養(yǎng)24 h，斜面上菌種長好后，4 ℃保存?zhèn)溆谩? (1)培養(yǎng)基一般都含有水分、碳源、氮源和無機鹽等，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)(　√　) (2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(　×　) (3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害(　√　) (4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落(　×　) (5)用涂布分離法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)

7、基表面形成單個菌落(　√　) 如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請思考： (1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？ 提示　獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為平板劃線分離法。 (2)某同學在純化土壤中的細菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應當怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？ 提示　最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。 (3)接種操作為什么一定要在火焰附近進行？ 提示　火焰附近存在著無菌區(qū)域。 命題點一　培養(yǎng)

8、基及其制備方法分析 1.(2018·天津一中調(diào)研)下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是(　　) 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍 蒸餾水 含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基 B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨 C.該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì) D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用 答案　B 解析　分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分齊全，但存在伊

9、紅、美藍等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項錯誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，B項正確；該培養(yǎng)基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是生長因子，C項錯誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進行滅菌等操作后才能使用，D項錯誤。 2.(2017·濟寧模擬)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請據(jù)圖回答： (1)Ⅰ號培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時要加入 作為凝固劑，從用途來看屬于選擇培養(yǎng)基，應以 作為唯一碳源。 (2)配制

10、固體培養(yǎng)基的基本步驟是(　　) A.計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌 B.計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 C.計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板 D.計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板 (3)溶化時，燒杯中加入瓊脂后要不停地 ，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對培養(yǎng)基滅菌的方法一般為 。 (4)①過程是 ，②過程所使用的接種方法是 法。 (5)部分嗜熱菌在Ⅰ號培養(yǎng)基上生長時可釋放 分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基進一步分離純化后，再對菌種進行

11、 培養(yǎng)。 答案　(1)瓊脂　淀粉　(2)C　(3)攪拌　高壓蒸汽滅菌 (4)稀釋　涂布分離　(5)淀粉酶　擴大 解析　固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實驗的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養(yǎng)基加熱溶化時，要注意加入瓊脂后需不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細觀察題圖可知過程，①是菌液稀釋過程，②是采用涂布分離法接種。能產(chǎn)生淀粉酶的部分細菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應菌種，以后可以擴大培養(yǎng)用于生

12、產(chǎn)。 1.培養(yǎng)基的配制原則 (1)目的要明確：配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。 (2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 (3)pH要適宜：細菌為7.2～7.6，酵母菌和霉菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。 2.微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點 (1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。 (2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。 命題點二　大腸桿菌的純化方法及過程分析 3.下圖

13、中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線分離法的操作結果。 下列敘述中錯誤的是(　　) A.甲中涂布前要將玻璃涂棒灼燒，冷卻后才能取菌液 B.對于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不一定是由單一的細胞或孢子繁殖而成 C.乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求 D.乙中的連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端 答案　C 解析　灼燒后的玻璃涂棒如果沒有冷卻就接觸菌種，會將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過低會導致多個菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線分離法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯誤；連續(xù)劃線中，除

14、了第一次劃線外，每一次劃線的起點是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細胞或孢子繁殖而成，D正確。 4.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細菌，請回答有關檢測飲用水中大腸桿菌的問題： (1)檢測飲用水中大腸桿菌的含量時，通常將樣品進行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用玻璃涂棒分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為 。 判斷下面所示的4個菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是 。 (2)用上述方法統(tǒng)計樣本中菌落數(shù)時是否需要設置對照組

15、？ (填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判斷培養(yǎng)基 ，對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是將 的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。 (3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行 (填“消毒”或“滅菌”)處理；操作者的雙手需要進行清洗和 ；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性，還能損傷它的 的結構。 (4)檢測大腸桿菌實驗結束后，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過

16、 處理才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。 答案　(1)涂布分離法　D　(2)需要　是否被雜菌污染(滅菌是否合格)　未接種　(3)滅菌　消毒　DNA (4)滅菌 解析　D中菌落分布情況為平板劃線分離法所得。為判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格，本實驗需要設置對照。要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時間，若發(fā)現(xiàn)有菌落說明培養(yǎng)基已被污染。消毒是指使用較溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行滅菌處理，對操作者的雙手需要進行清洗和用

17、酒精消毒。 考點二　微生物的利用 一、從土壤中分離有益微生物 實驗：從土壤中分離纖維素分解菌 1.實驗原理 (1)反應依據(jù)：土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶，分解和利用纖維素和半纖維素。 (2)檢測依據(jù)：因此在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能很好地生長，并產(chǎn)生黃色或棕綠色色素，其他微生物則不能生長。 2.方法步驟 方法一：(1)制備培養(yǎng)基：依據(jù)小辭典，配制依姆歇涅茨基液體培養(yǎng)基。 (2)分裝：按每試管5 mL分裝，然后加入7 cm×1 cm濾紙條，濾紙條緊貼內(nèi)壁，且一半浸入培養(yǎng)基中，121 ℃滅菌20 min。 (

18、3)制備土壤稀釋液：制備10－1、10－2、10－3、10－4、10－5的土壤稀釋液。 (4)接種培養(yǎng)：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液1 mL接種到濾紙條上，每個稀釋度重復4次，置培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)14 d。 (5)觀察：檢查各試管中濾紙條上出現(xiàn)的菌落和濾紙顏色變化情況。 方法二：(1)制備培養(yǎng)基：制備依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板，在平板上鋪一張直徑略小于平板的濾紙，用少量上述液體培養(yǎng)基潤濕。 (2)接種培養(yǎng)：在濾紙上等距放8個直徑約10 mm的土粒，蓋上培養(yǎng)皿蓋以保持濕度，置恒溫培養(yǎng)箱中28～30 ℃培養(yǎng)。 (3)觀察：每隔2 d觀察土粒周圍濾紙變色情況，直到濾紙顏色變化，長成菌落，于4

19、 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩? 二、微生物對有機物質(zhì)的分解 1.探究纖維素分解菌是否只能分解纖維素 (1)問題：分解纖維素的微生物能否分解其他物質(zhì)呢？ (2)作出假設：假設分解纖維素的微生物還能分解其他物質(zhì)，包括淀粉、木質(zhì)素、果膠等大分子含碳有機物。 (3)設計實驗：分組設計實驗方案，用同一種分解纖維素的微生物分解不同的其他物質(zhì)(淀粉、果膠和木質(zhì)素等)，或者用不同分解纖維素的微生物分解同一種物質(zhì)，在實驗設計中注意設置對照實驗和實驗重復等。 (4)實施實驗：根據(jù)實驗設計，認真進行實驗，記錄觀察到的實驗結果。 (5)得出結論：根據(jù)實驗過程分析實驗結果，得出結論。 (6)表達交流。 2.分解

20、纖維素的微生物的意義與作用 (1)在自然界碳素循環(huán)中具有重要意義。 (2)微生物的種類繁多、分布廣、數(shù)量大，而且所起的作用也多種多樣。 三、利用微生物制作食品 實驗：利用微生物制作豆豉 1.實驗原理 (1)豆豉是用煮熟的大豆經(jīng)過納豆菌發(fā)酵制成的。納豆菌分泌的蛋白酶能夠分解大豆中的蛋白質(zhì)，產(chǎn)生小分子多肽及多種氨基酸，制成風味獨特的發(fā)酵食品。 (2)在制備過程中，根據(jù)納豆菌的芽孢對熱不敏感的特性，可采用高溫控制雜菌污染。 2.方法步驟 (1)制備豆豉菌懸液：在錐形瓶中倒入30～40 mL開水，加入新鮮的豆豉5～6粒，搖勻，備用。 (2)浸泡：將黃豆裝入杯中加水浸泡15 h左右。

21、 (3)煮豆：將浸泡過的黃豆煮20～30 min，直到黃豆用手輕輕一掐就破即可。 (4)接種：在容器內(nèi)鋪上一塊雙層紗布，將煮好的黃豆趁熱撈入容器內(nèi)，將豆豉菌懸液灑在豆子表面，用消過毒的玻璃棒快速攪拌均勻。 (5)發(fā)酵：用另一塊雙層紗布蓋在豆子表面，40 ℃發(fā)酵15 h左右。當黃豆表面長出一層菌膜時，根據(jù)口味加入鹽或醬密封保存。 (1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(　×　) (2)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源(　√　) (3)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(　×　) (4)纖維素是構成植物細胞壁的主要成分，

22、在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖(　√　) (5)在篩選能分解纖維素的細菌的實驗中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌株的濃度(　√　) (6)制作豆豉要避免雜菌污染，要對原料進行高壓蒸汽滅菌(　×　) 研究人員在依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有棕綠色色素圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同的溫度和pH條件下進行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結果見圖2，請分析： 圖1 圖2 (1)圖中棕綠色色素圈大小代表什么？降解纖維素能力最強的菌株是哪種？ 提示　棕綠色色素圈大小與纖維素酶的量和活性有關，降解纖維素能力最強的是菌株①。 (2

23、)結合圖2推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？ 提示　J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。 命題點一　選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析 1.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學抗性而設計的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細菌，應選用的培養(yǎng)基分別為(　　) A.伊紅美藍培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基 B.含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無機培養(yǎng)基 C.含氨的無機培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基 D.含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基 答案　B 解析　酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐?/p>

24、培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，因為青霉素抑制細菌生長，但不能抑制真菌生長。硝化細菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用土壤中氨氧化成亞硝酸，進而將亞硝酸氧化成硝酸所釋放的能量，把無機物轉變?yōu)橛袡C物以維持自身生命活動，利用含氨的無機培養(yǎng)基可進行選擇培養(yǎng)。 2.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請據(jù)圖回答下列問題： (1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入 作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基 (填“影

25、響”或“不影響”)細菌的數(shù)量，如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用 法。 (2)④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于 ；使用 法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時進行倒置培養(yǎng)的原因是 。 (3)實驗過程中如何防止其他微生物的

26、污染？ 。 答案　(1)苯酚　影響　涂布分離　(2)④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源　涂布分離法或平板劃線分離　防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基　(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程進行無菌操作 解析　(1)選擇降解利用苯酚的細菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當苯酚消耗盡時，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以②中不同濃度的碳源會影響細菌數(shù)量；一般采用涂布分離法來測定②中活菌數(shù)

27、目。 (2)④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源；使用涂布分離法或平板劃線分離法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。 (3)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程要無菌操作：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵：a.實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；c.為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；d.實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌

28、處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 選擇培養(yǎng)基的制作方法 (1)在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。 (2)通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空

29、氣中的CO2制造有機物生存。 (3)利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特定微生物：如當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。 (4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。 命題點二　微生物的分離與計數(shù) 3.下表是某同學列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，據(jù)此回答下列問題： 培養(yǎng)基配方 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g

30、葡萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 瓊脂 15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)從作用上看，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基，提供氮源的物質(zhì)是 ，細菌能利用該氮源是由于體內(nèi)能合成 酶。 (2)在對分離的能分解尿素的細菌進行鑒定時，還需在培養(yǎng)基中加入 指示劑，若指示劑變 ，說明有目的菌株存在。 (3)為了測定微生物的數(shù)量，接種時應采用 法，某同學在4個培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、

31、129個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為 個，測定的活菌數(shù)比實際活菌數(shù) (填“低”“高”或“基本一致”)。 答案　(1)選擇　尿素　脲(催化尿素分解的) (2)酚紅　紅 (3)涂布分離　1.6×109　低 解析　(1)題干指出表中是分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，其中尿素是唯一氮源，能生長的菌落說明能利用尿素中的氮源，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇尿素分解菌，所以從用途上屬于選擇培養(yǎng)基。(2)在對分離的能分解尿素的細菌進行鑒定時，還需在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說明有目的菌株存在。(3)純化微生物可以用涂布分離法和平板劃線分離法，其中涂布

32、分離法能用于微生物的計數(shù)。1 mL原土壤樣液中上述微生物數(shù)量＝(180＋155＋176＋129)÷4×106×10＝1.6×109個；涂布分離法計數(shù)，統(tǒng)計的數(shù)量比實際數(shù)量會偏少，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。 4.(2018·天水一中期末)某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出高效降解脂肪的菌株。請回答： (1)在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。 (2)為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈 狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進行

33、 處理。為了排除 ，需設置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照。 (3)為了篩選出菌株，可將適量的 試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是 ，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。 (4)純化菌種時，為了得到菌落，可采用 法接種于新的培養(yǎng)基平板上。 (5)實驗操作應在酒精燈火焰附近進行的原因是 。 答案　(1)豆油　選擇 (2)倒置　梯度稀釋　實驗組中非測試因素對實驗結果的影響(培養(yǎng)基被污染) (3)蘇丹

34、Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　出現(xiàn)透明圈(不出現(xiàn)橘黃色圈或紅色圈) (4)平板劃線分離 (5)避免周圍環(huán)境中微生物的污染 矯正易錯　強記長句 1.無菌操作技術包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學藥物消毒和紫外線消毒等；滅菌包括火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。 2.培養(yǎng)基的制備包括稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞和包扎、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。 3.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。 下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題

35、： 1.圖甲是利用平板劃線分離法進行微生物接種，圖乙是利用涂布分離法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和玻璃涂棒；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消毒。 2.接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)？ 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。 3.下圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是圖乙(填“圖甲”或“圖乙”)。 重溫高考　演練模擬 1.漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，在環(huán)境修復、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關敘述正確的是(多選)(　　) A.生活污水中含有大量

36、微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品 B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落 C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化 D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在常溫下長期保存菌株 答案　BC 解析　漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時可通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長出的菌落可能還有其他雜菌，可再通過平板劃線法進一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在低溫下長期保存菌株，D錯

37、誤。 2.(2017·全國Ⅰ，37)某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}： (1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生 。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是 (答出兩點即可)。 (

38、2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應選擇 (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是 。 (3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有

39、 (答出兩點即可)。 答案　(1)脲酶　分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來合成有機物　為細胞生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料　(2) 尿素　其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用　(3)為細菌生長提供無機鹽離子，作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定 解析　(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細菌是一種分解者，

40、屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源。能分解尿素的細菌可以用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細胞生命活動提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可為多種有機物的合成提供原料。 (2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，而其他兩組都含有含氮物質(zhì)NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3不能起到篩選作用。 (3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4構成緩沖液，可維持培養(yǎng)基的pH相對穩(wěn)定；KH2PO4和Na2HPO4能為微

41、生物生長提供無機鹽。 3.(2016·全國乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)； ②制作無菌平板； ③設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于 。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是 。 (2)步驟③中，

42、實驗組的操作是 。 (3)若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了 現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法 (填“正確”或“不正確”)。 答案　(1)牛肉膏、蛋白

43、胨　瓊脂 (2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間 (3)污染　不正確 解析　(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實驗探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實驗可靠性，需要設置多個平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對照組中不應出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過程中存在雜菌污染，屬于實驗失誤，所有實驗數(shù)據(jù)均不應采用。 4.(2016·四川，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶

44、細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應以 為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加 作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成 色。 (2)在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。 該過程采取的接種方法是 ，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為 ×108個；與血球計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較 。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突

45、變而失活，突變后基因轉錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉錄的mRNA中，終止密碼為 ，突變基因表達的蛋白質(zhì)含 個氨基酸。 答案　(1)尿素　酚紅　紅　(2)涂布分離法　1.75　少 (3)UGA　115 解析　(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計數(shù)細菌菌落數(shù)的接種方法是涂布分離法，統(tǒng)計的菌落數(shù)應介于30～300之間，故選擇細菌菌落數(shù)為156、17

46、8和191的平板計數(shù)，每克土壤樣品中的細菌數(shù)為(156＋178＋191)÷3÷0.1×105＝1.75×108。由于兩個或多個細菌連接在一起時，往往統(tǒng)計的是一個菌落，故用此方法測得的細菌數(shù)偏少。(3)密碼子由三個相鄰的堿基組成，271個堿基和后面2個堿基一起共構成91個密碼子，箭頭處插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構成24個密碼子，緊隨其后是UGA，應為終止密碼，因此表達的蛋白質(zhì)含115個氨基酸。 1.(2018·張家口檢測)下列有關微生物培養(yǎng)與應用的說法，正確的是(　　) A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基 B.接種前需對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手

47、等進行嚴格的滅菌處理 C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個階段 D.分離分解尿素的細菌時，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源 答案　C 解析　天然培養(yǎng)基是指用天然物質(zhì)制成的培養(yǎng)基，但也需要加工；實驗操作者的雙手應消毒，不能滅菌；分離分解尿素的細菌時，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機物(如葡萄糖)作為碳源。 2.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列敘述正確的是(　　) A.高壓蒸汽滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應

48、趁熱快速挑取菌落 D.用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應標記在皿底上 答案　D 解析　A項，高壓蒸汽滅菌過程中加熱結束后，讓其自然冷卻，待壓力表的壓力降到零時，再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項，倒平板時左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項，灼燒接種環(huán)之后，要在火焰旁冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號筆做標記。 3.(2018·鄭州測試)下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是(　　) A.在五個區(qū)域中劃

49、線前后都要對接種環(huán)和培養(yǎng)基進行滅菌 B.劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上 C.接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達到分離單菌落的目的 D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù) 答案　C 解析　在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌；進行劃線操作時，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。 4.(2017·濟南模擬)某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是(　　) A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌 B

50、.轉換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線 C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D.培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次 答案　B 解析　培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再從上次劃線的末端開始進行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進行培養(yǎng)；培養(yǎng)過程中一般每隔12 h或24 h觀察一次。 5.(2015·全國Ⅰ，39)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P問題： (1)顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通常可用 染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用 (填“溶劑浸提

51、法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以 為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用 法進行計數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內(nèi)，在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個溫度中， ℃條件下該酶活力最小

52、。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞 ℃設計后續(xù)實驗。 答案　(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　溶劑浸提法　(2)油脂　(3)血球計數(shù)板　涂布分離　(4)45　40 解析　(1)生物組織中的油脂能被蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)染成橘黃色(或紅色)。(2)為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應選用只能讓該菌落生長的選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中只能選用油脂作為唯一碳源。 (3)血球計數(shù)板可用于直接計數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計數(shù)活菌數(shù)量可采用涂布分離法。 (4)溫度影響酶的活性，在三個溫度中，45 ℃需酶量最高，說明酶活性最低；在三個溫度實驗中，40 ℃所需酶量最少，低于

53、35 ℃和45 ℃所用酶量，說明酶的最適溫度介于35 ℃和45 ℃之間，因此應圍繞40 ℃設計不同溫度梯度，進行后續(xù)實驗。 6.(2017·重慶質(zhì)檢)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進行微生物的分離和計數(shù)。 (1)下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方： A組 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g B組 纖維素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O KH2PO4 MgSO4·7H2O KCl 酵母膏 水解酪素 5 g 1 g 1.2 g 0.

54、9 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質(zhì)溶解后，均用蒸餾水定容至1 000 mL。 ①從功能上來看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于 培養(yǎng)基。 ②如果要對土壤中分解尿素的細菌進行分離，則需要選擇 培養(yǎng)基(填“A”或“B”)，該培養(yǎng)基中的碳源是 。 ③在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入 指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細菌能否分解尿素，若有分解尿素的細菌，培養(yǎng)基將會呈現(xiàn) 。 (2)下圖是某同學采用的接種微生物的方法，請回答下列問題： ①本

55、實驗采用的接種微生物的方法是 法，把聚集的菌種逐步 分散到培養(yǎng)基的表面，為達到這一目的，操作上應注意： (至少答2項)。 ②三位同學用涂布分離法測定同一土壤樣品中細菌數(shù)量，在對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)計結果： 甲同學涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260，取平均值248； 乙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是210、240和25

56、0，取平均值233； 丙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163； 在三位同學的統(tǒng)計中， 同學的統(tǒng)計是正確的。 答案　(1)①選擇?、贏　葡萄糖?、鄯蛹t　 紅色 (2)①平板劃線分離　稀釋　每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線?、谝? 解析　(1)①據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析，A組中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。②對土壤中分解尿素的細菌進行分離時，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，應當選擇A組培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是葡萄糖。③尿素分解菌可以用酚紅指示

57、劑進行鑒定。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘倍筽H升高，使酚紅指示劑呈紅色。(2)①據(jù)圖分析，圖示表示平板劃線分離法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上應注意每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。②在進行平板菌落計數(shù)時，應選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板，同時為避免誤差應選擇至少3個或3個以上的平板進行計數(shù)并取平均值。 7.2015年與我國女科學家屠呦呦平分諾貝爾生理學或醫(yī)學獎的是愛爾蘭科學家威廉·坎貝爾和日本藥物科學博士大村智，他們二人的貢獻是發(fā)現(xiàn)了一種新的藥物，名為阿維菌素，其衍生產(chǎn)品降低了河盲癥和淋巴絲蟲病的發(fā)病率，同時還能有效對抗其他寄生蟲

58、病，治療效果顯著。大村智從土壤樣品中分離鏈霉菌的新菌株，在實驗室內(nèi)通過成千上萬鏈霉菌培養(yǎng)物篩選出一些較有發(fā)展前途的菌株，這就是阿維菌素的來源。請回答下列問題： (1)制備鏈霉菌培養(yǎng)基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進行的是 和滅菌，對培養(yǎng)基進行滅菌的常用方法是 。倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是

59、 。 (2)圖①的接種方法是將聚集的菌種進行 后，分散到培養(yǎng)基的表面。在培養(yǎng)基上接種時接種環(huán)需通過灼燒滅菌，完成圖中劃線操作，共需要灼燒接種環(huán) 次。圖②表示的是用 法接種培養(yǎng)后得到的結果。 (3)在純化過程中，在固體培養(yǎng)基上劃線分離后，經(jīng)培養(yǎng)，在劃線的末端出現(xiàn) ，表明目的菌已分離純化。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的

60、 的含量，同時可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高 的利用率。 答案　(1)調(diào)節(jié)pH　高壓蒸汽滅菌法　防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基造成污染，并防止培養(yǎng)基水分過快地揮發(fā) (2)逐步稀釋　4　涂布分離 (3)不連續(xù)單個菌落 (4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 8.(2017·云南名校統(tǒng)考)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請根據(jù)表格和所學知識回答下列相關問題： 成分 含量 成分 含量 蛋白胨 10.0 g 乳糖 5.0 g 蔗糖 5.0 g K2HPO4 2.0 g 顯色劑(伊紅美藍) 0.2 g 瓊脂 12.0 g 將上述

61、物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL (1)大腸桿菌的同化類型為 ，從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于 。 (2)在微生物的實驗室培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是 ，因此需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行 (填“消毒”或“滅菌”)，操作者的雙手需要進行清洗和 。空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使 ，還能破壞DNA的結構。 (3)根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于 (填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細菌，需將培養(yǎng)基中 換成

62、，若要鑒定分解尿素的細菌，還需將伊紅美藍換成 。 (4)培養(yǎng)大腸桿菌時，常用的接種方法是 和 。通過上述方法可以分離得到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，稱為 。 (5)使用以下微生物發(fā)酵生產(chǎn)特定產(chǎn)物時，所利用的主要微生物的細胞結構與大腸桿菌相同的是 (多選)。 A.制作果酒 B.由果酒制作果醋 C.制作泡菜 D.制作腐乳 答案　(1)異養(yǎng)型　分解者　(2)防止外來雜菌的入侵　滅菌　消毒　蛋白質(zhì)變性　(3)鑒別　蛋白胨　尿素　酚紅指示劑　(4)平板劃線分離法　涂布分離法　菌落 (5)BC 解析　該培養(yǎng)基含有顯色劑(伊紅美藍)屬于鑒別培養(yǎng)基。若要分離能分解尿素的細菌，應以尿素為唯一氮源，因此應將蛋白胨換成尿素。若要鑒別尿素分解菌，應在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。制作果酒、果醋、泡菜和腐乳利用的微生物分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌和毛霉，其中醋酸菌、乳酸菌與大腸桿菌都屬于原核生物，酵母菌和毛霉屬于真核生物。 20