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1、ICS65.120B 46DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 37/T XXXXXXXXX混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定高效液相色譜法XXXX - XX - XX發(fā)布XXXX - XX - XX實(shí)施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB37/ XXXXXXXXX目次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 原理14 試劑或材料15 儀器設(shè)備16 樣品27 試驗(yàn)步驟27.1 提取27.2 液相色譜參考條件27.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液27.4 測定28 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理28.1 多點(diǎn)校準(zhǔn)28.2 單點(diǎn)校準(zhǔn)39 精密度3附錄A （資料性附錄） 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖4

2、前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并監(jiān)督實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所、青島農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張瑋、李會榮、楊智國、李斌、莫貞峰、李俊玲、郝智慧、黃婷婷。4混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的高效液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的測定。本方法在混合型飼料添加劑中百里香酚、香芹酚、丁香酚檢出限為25 mg/kg，定量限為50 mg/k

3、g；肉桂醛的檢出限為2.5 mg/kg，定量限為5.0 mg/kg。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T 20195動物飼料試樣的制備3 原理試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛經(jīng)甲醇提取、過膜后，供高效液相色譜儀測定，外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。4.1 水：GB/T 6682，一級。4.2 甲醇。4.3 乙腈：色譜純。4.4 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：精密稱取百里香酚（CAS：89

4、-83-8，純度不低于98.0 %）、香芹酚（CAS：499-75-2，純度不低于98.0 %）、丁香酚（CAS：97-53-0，純度不低于98.0 %）和肉桂醛對照品（CAS：104-55-2，純度不低于98.0 %）適量（精確至0.01 mg），分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）溶解并稀釋至刻度，混勻，配成濃度百里香酚、香芹酚、丁香酚為10 mg/mL、肉桂醛為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。2 8 密封保存，有效期為3個月。4.5 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（4.4）各1.0 mL 置于同一10 mL容量瓶中，用甲醇（色譜純）稀釋定

5、容至刻度，混勻。該溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚的濃度為1.0 mg/mL、肉桂醛濃度為100 g/mL。2 8 密封保存，有效期為2周。4.6 微孔濾膜：0.45 m，有機(jī)系。5 儀器設(shè)備5.1 高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。5.2 電子天平：感量為0.1 mg和0.01 mg；5.3 渦旋振蕩器。6 樣品按GB/T 20195制備試樣，至少200 g，粉碎過0.42 mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。7 試驗(yàn)步驟7.1 提取平行做兩份實(shí)驗(yàn)。稱取試樣0.11 g（精確至0.1 mg），置于25 mL棕色容量瓶中，加入15 mL甲醇（4.2），振蕩提取10 mi

6、n，用甲醇（4.2）溶解定容至刻度，混勻。上清液過0.45 m的微孔濾膜，供上機(jī)測定。7.2 液相色譜參考條件色譜柱：C18柱， 長150 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 m，或性能相當(dāng)者。柱溫：30 。波長：280 nm。流動相：乙腈（4.3）+水=42+58。流速：1.0 mL/min。進(jìn)樣量：20 L。7.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液準(zhǔn)確移取百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.5）適量，用甲醇（色譜純）稀釋成百里香酚、香芹酚、丁香酚濃度分別為1.00 g/mL、5.00 g/mL、10.0 g/mL、50.0 g/mL、100 g/mL、500 g/mL，肉桂醛濃度分別為0.10 g/

7、mL、0.50 g/mL、1.00 g/mL、5.00 g/mL、10.0 g/mL、50.0 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 7.4 測定按照7.2給出的色譜參考條件，分別上機(jī)測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的保留時間相對偏差在2.5 %之內(nèi)，百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜參見附錄A。以百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛的濃度為橫坐標(biāo)，以其響應(yīng)值（峰面積）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)不低于0.99。單點(diǎn)校準(zhǔn)時，試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的響應(yīng)值相差不超過30 %。如超出線性范圍，應(yīng)用甲醇稀釋（n倍）后，重新進(jìn)樣分析。

8、8 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理8.1 多點(diǎn)校準(zhǔn)試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)i計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，多點(diǎn)校準(zhǔn)按式(1)計(jì)算：(1)式中：Ci 從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V 提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m 試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；n 稀釋倍數(shù)。平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。8.2 單點(diǎn)校準(zhǔn)試樣中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)i計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，單點(diǎn)校準(zhǔn)按式(2)計(jì)算：(2)式中：Ai 試樣溶液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛色譜

9、峰面積；ASi標(biāo)準(zhǔn)工作液中百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛的峰面積；CSi標(biāo)準(zhǔn)工作液百里香酚、香芹酚、丁香酚或肉桂醛濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V 試樣提取液的定容體積，單位為毫升（mL）；m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）；n 稀釋倍數(shù)。平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。9 精密度在重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測試結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的10 %。AA附錄A （資料性附錄）百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖見圖A.1。說明：百里香酚、香芹酚、丁香酚濃度5.0 g/mL。肉桂醛濃度0.50 g/mL。圖A.1 百里香酚、香芹酚、丁香酚和肉桂醛標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖_