畢業(yè)論文PPT格式建議如下： 一、研究目的 二、技術(shù)路線 三、研究材料 四、研究方法 五、研究結(jié)果 六、主要結(jié)論 七、創(chuàng)新點(diǎn)及今后努力方向 八、致謝,香樟籽乙醇提取物成分及其抑菌活性研究 Chemical composition and Antibacterial activity of the Ethanol extracts of Cinnamomum camphora seed,系所：生物科學(xué)系 專業(yè)：生物科學(xué) 學(xué)號(hào)：05124006 作者姓名：楊 順 指導(dǎo)老師：余海忠,一、研究目的 隨著社會(huì)的發(fā)展和我國(guó)綜合國(guó)力的提高,人們對(duì)生活質(zhì)量的要求日益提高,對(duì)生態(tài)農(nóng)業(yè)、綠色食品、持續(xù)農(nóng)業(yè)、生物多樣性保護(hù)及環(huán)境保護(hù)的呼聲越來越高。為了與我國(guó)可持續(xù)發(fā)展策略相適應(yīng),研制開發(fā)的新農(nóng)藥必須具有安全性高、殘留低、無公害、生物活性高、選擇性高、使用費(fèi)用低等特性。植物性農(nóng)藥由于其原材料取自于天然植物, 自然界有其順暢的降解途徑, 具有無殘留、無公害、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn), 可廣泛用于農(nóng)作物病蟲害防治。,香樟樹系樟樹屬的常綠喬木植物,是我國(guó)亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一,具有驅(qū)蟲、防腐耐蛀的功能,樟樹籽可提取色素、香料或樟油等物質(zhì)制成植物農(nóng)藥，樟樹籽為可再生資源, 其應(yīng)用前景廣闊。我國(guó)很早就將樟樹籽作為藥物用于治病,并認(rèn)為樟樹籽有驅(qū)風(fēng)散寒、行氣止痛之功效，主要含有癸酸(C10)的樟樹籽脂肪油已被試制成碳酸甘油脂,用于治療脂肪代謝紊亂病癥,并能降血脂及膽固醇。,那么，這種對(duì)人體起作用的香樟籽,它的乙醇提取物對(duì)綠色木霉，酵母菌，黑曲霉，木質(zhì)層孔菌，枯草芽孢桿菌等微生物會(huì)不會(huì)有抑制作用呢？其作用方式又如何？因此，本研究擬就,香樟籽乙醇提取物成分和抑菌活性展開探討。在實(shí)驗(yàn)中以香樟籽提取物為抑菌劑，對(duì)上述微生物生長(zhǎng)及孢子萌發(fā)的影響進(jìn)行試驗(yàn)，以研究其抑菌作用。,香樟樹籽,二、技術(shù)路線,三、實(shí)驗(yàn)材料,1、供試植物 香樟籽（Cinnamomum camphora seeds）采自湖北襄樊學(xué)院校內(nèi)。 2、供試微生物 真菌：綠色木霉Trichoderma viride 啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 黑曲霉Aspergillus niger 木質(zhì)層孔菌Fomes ligneus 細(xì)菌：枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis 以上五個(gè)菌株由襄樊學(xué)院化學(xué)工程與食品科學(xué)院廖雪義老師提供，實(shí)驗(yàn)室置冰箱中待用。,1、香樟籽的粗提方法 本實(shí)驗(yàn)利用醇浸法提取，具體步驟如下： （1）將采摘的紫色香樟籽盛在白瓷盤，置于鼓風(fēng)干燥箱中烘烤（50），使其干燥。然后用微型植物粉碎機(jī)粉碎（或用研缽研碎），得到粉末。（2）將上述粉末分裝到250ml磨口三角瓶中（0.25倍體積），然后加無水乙醇浸泡，間隔24h收集初提液，并在原瓶中加新的無水乙醇浸泡，收集所有初提液，并抽濾得過濾液。（3）用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮上述過濾液,得膏狀物。,四、實(shí)驗(yàn)方法,2、氣相色譜及質(zhì)譜條件 香樟籽無水乙醇提取物組分的測(cè)定在襄樊市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所進(jìn)行，所用儀器為氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。氣相色譜條件：DB-5ms彈性石英毛細(xì)管色譜柱(0.25 mm30m，0.25m)。升溫程序：初始溫度600C保持10min，以10Cmin-1至800C，保持15min，以20Cmin-1至2000C，以200Cmin-1至2200C，保持5 min。載氣為氦氣，流速0.8 mlmin-1；進(jìn)樣口溫度2200C。質(zhì)譜條件：離子源為EI，電離電壓70eV，離子源溫度2000C，溶劑延遲時(shí)間，7 min，質(zhì)譜掃描范圍m/z 40400；掃描周期0.5 S 。,3、生長(zhǎng)速率測(cè)定法 1）從試管中挑取原種接種與液體培養(yǎng)基中，在250C，光照條件下?lián)u床培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間，不同的菌培養(yǎng)時(shí)間不同，以錐形瓶中有渾濁為宜（細(xì)小顆粒懸浮）。 2）固體培養(yǎng)基融化后倒平板，待培養(yǎng)基凝固后吸取1ml菌液涂布，然后在250C，光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。倒平板時(shí)，倒一半即可，搖均形成一薄層，以利于打菌餅。 3）取45ml土豆濾液于100ml錐形瓶中，加入0.9g瓊脂粉。同樣做15瓶；取75ml土豆濾液于100ml錐形瓶中，加入1.5g瓊脂粉。同樣做3瓶。然后于1210C滅菌30min。,4）PDA固體培養(yǎng)基加熱融化后，在恒溫水浴鍋中降溫至500C左右。用10ml量筒（也可用移液槍）量取5ml香樟籽無水乙醇提取液，倒入裝有45ml PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中；用10ml量筒量取8.33ml對(duì)照液，倒入裝有75ml PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中，即比例為9：1。倒平板時(shí)，倒一半即可，搖均形成一薄層，以利于能平均倒3份平板。注：倒平板時(shí)，應(yīng)在無菌環(huán)境中操作，但實(shí)驗(yàn)在酒精燈旁進(jìn)行時(shí)，由于對(duì)照液（如乙醇）易揮發(fā)燃燒，靠的太近會(huì)燒著。 5）在酒精燈旁進(jìn)行，打孔器沾酒精后燒著滅菌，待降溫至室溫后再打菌餅。 6）接種環(huán)滅菌后挑取菌塊于倒平板的培養(yǎng)皿中，每皿2塊，菌餅反向置于培養(yǎng)基上，光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。各菌培養(yǎng)條件見表1。,7）觀測(cè)時(shí)應(yīng)在同一地方，同一人，同一把米尺測(cè)量，以盡量減少誤差。 72h后觀測(cè)； 8）重復(fù)以上步驟，對(duì)五種供試菌種分別定時(shí)進(jìn)行測(cè)定。 9）生長(zhǎng)抑制率的計(jì)算方法：,4、孢子萌發(fā)法 本實(shí)驗(yàn)采用懸浮液測(cè)定法，具體步驟如下： 1）取17ml土豆濾液于100ml錐形瓶中，每種香樟籽無水乙醇提取液做6瓶，然后于1210C滅菌30min。 2）用無菌生理鹽水沖洗長(zhǎng)滿孢子的培養(yǎng)基，將孢子沖進(jìn)錐形瓶中，用紗布濾去雜質(zhì)。在每個(gè)裝有液體培養(yǎng)基的錐形瓶中加入1ml孢子懸浮液，其中5瓶再加入2ml香樟籽無水乙醇提取液，另1瓶加對(duì)照液2ml，達(dá)到9：1比例，然后在搖床中培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度比表1中的最高溫度高10C（孢子培養(yǎng)比病原菌溫度高有利于萌發(fā)）。 3）孢子萌發(fā)(以孢子芽管長(zhǎng)度大于孢子短半徑者為萌發(fā))后，用無菌水稀釋到適當(dāng)濃度 (以1010 低倍鏡下, 每個(gè)視野3040個(gè)孢子為宜) 7，加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在10*10倍顯微鏡下觀測(cè)。 4）孢子抑制率的計(jì)算方法：,1、香樟籽無水乙醇提取物組分 在前述色譜條件下分析，經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索(質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫 N IST147,N IST27)及人工解析質(zhì)譜并與標(biāo)準(zhǔn)圖核對(duì)，用峰面積歸一化法定量測(cè)出它們的相對(duì)含量，結(jié)果見表2。,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,2、香樟籽無水乙醇提取物對(duì)供試菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性 由表3可知，在5種供試菌中，香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016 g/ml時(shí)對(duì)黑曲霉的抑制率最高，為49.42%，對(duì)木質(zhì)層孔菌的抑制率最小為7.14%；在濃度為0.008 g/ml時(shí)對(duì)黑曲霉的抑制率最高，為4.65%，對(duì)啤酒酵母，木質(zhì)層孔菌，枯草桿菌的抑制率最小，都為0；且對(duì)5種供試菌的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。,培養(yǎng)72h后的黑曲霉（藥液濃度0.008g/ml）,菌餅接入到含不同濃度藥液的培養(yǎng)基中培養(yǎng),3、香樟籽無水乙醇提取物對(duì)供試菌孢子萌發(fā)的抑制活性 由表4可知，在5種供試菌孢子中，香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016g/ml時(shí)對(duì)黑曲霉孢子的抑制率最高，為60.00%，對(duì)木質(zhì)層孔菌孢子的抑制率最小為12.00%；在濃度為0.008 g/ml時(shí)，對(duì)綠色木霉孢子的抑制率最高，為12.50%，對(duì)啤酒酵母孢子的抑制率最小，為0；且對(duì)5種供試菌孢子的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。,六、主要結(jié)論 采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析香樟籽無水乙醇提取物的主要組分為：癸酸(18.44%)、月桂酸(14.87%)、肉豆蔻酸(10.88%)、2-莰酮(10.46%)、a-松油醇(8.69%)、黃樟油素(8.51%)、辛酸(7.90%)、-蒎烯(3.57%)、檸檬烯(2.52%)、莰烯(2.48%) 等37種化合物。 (2)以提取物對(duì)供試菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率為考察指標(biāo)，在5種供試菌中，香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016 g/ml時(shí)對(duì)黑曲霉的抑制率最高，為49.42%，對(duì)木質(zhì)層孔菌的抑制率最小為7.14%；在濃度為 0.008 g/ml 時(shí)對(duì)黑曲霉的抑制率最高，為4.65%，對(duì)啤酒酵母，木質(zhì)層孔菌，枯草桿菌的抑制率最小，都為0；且對(duì)5種供試菌的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。 (3)以孢子萌發(fā)抑制率為考察指標(biāo)，在5種供試菌孢子中，香樟籽無水乙醇提取液在濃度為0.016g/ml時(shí)對(duì)黑曲霉孢子的抑制率最高，為60.00%，對(duì)木質(zhì)層孔菌孢子的抑制率最小為12.00%；在濃度為0.008 g/ml時(shí)，對(duì)綠色木霉孢子的抑制率最高，為12.50%，對(duì)啤酒酵母孢子的抑制率最小，為0；且對(duì)5種供試菌孢子的抑制作用都隨提取液濃度的升高而增強(qiáng)。,七、創(chuàng)新之處 （1）香樟樹具有速生性、觀賞性、長(zhǎng)壽性等特性,故種植極為普遍.自然落下香樟籽,數(shù)量很大，已經(jīng)成為城市環(huán)境整治的一大負(fù)擔(dān)。本實(shí)驗(yàn)的研究目的是科學(xué)地利用這些“廢物”，對(duì)城市環(huán)境的保護(hù)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展將會(huì)有重要的意義。 （2）目前，香樟籽極少數(shù)被采集入藥，對(duì)其研究主要集中在油脂產(chǎn)品的開發(fā)上，但對(duì)其活性物質(zhì)參與農(nóng)業(yè)用藥劑這方面的研究為數(shù)不多，鮮見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過對(duì)香樟籽活性物質(zhì)對(duì)供試真菌和細(xì)菌控制展開深入研究，以期發(fā)現(xiàn)一種新型天然抗菌劑，為保護(hù)環(huán)境、維護(hù)生態(tài)平衡、恢復(fù)和改善人類生存環(huán)境提供技術(shù)支持和保障。 需改進(jìn)的地方 （1）醇浸法對(duì)香樟籽活性成分的提取有較高的產(chǎn)量,但處理過程比較麻煩、復(fù)雜,且所需溶劑數(shù)量較多，故需要對(duì)此提取方式進(jìn)行優(yōu)化。另外，也可以采用水蒸汽蒸餾法進(jìn)行提取，方法簡(jiǎn)便。 （2）本實(shí)驗(yàn)只局限于小試范圍,建議在中試時(shí)對(duì)提取的加工工藝、設(shè)備技術(shù)等方面作進(jìn)一步的研究。 （3）應(yīng)該多選幾種代表性的細(xì)菌做抑制實(shí)驗(yàn)，使研究結(jié)果更準(zhǔn)確。同時(shí)需要測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度（MBC），為最佳用藥量提供一定依據(jù)。,八、致 謝,本文是在余海忠老師悉心指導(dǎo)下完的，從論文選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到實(shí)驗(yàn)材料的采集、實(shí)驗(yàn)的實(shí)施、論文的撰寫，導(dǎo)師都傾注大量的心血，導(dǎo)師學(xué)術(shù)上嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)格要求以及對(duì)科學(xué)真理的執(zhí)著追求的精神，一直鞭策著我努力奮進(jìn)，并將使我受益終身，在此向?qū)煴硎居芍缘母兄x！ 在論文期間襄樊學(xué)院化學(xué)工程與食品科學(xué)院張火云、廖雪義、肖作安等老師都給予我熱情的指導(dǎo)，并幫我解決實(shí)驗(yàn)過程中遇到的困難；另外在實(shí)驗(yàn)過程中還得到本實(shí)驗(yàn)室劉遠(yuǎn)琳等同學(xué)的熱情支持和幫助以及班上同學(xué)吳飛鴿、邱川、胡光文給予的幫助，在此一并向他們表示衷心的感謝！ 感謝化學(xué)工程與食品科學(xué)院各位領(lǐng)導(dǎo)、老師在大學(xué)四年里對(duì)我的諄諄教導(dǎo)、關(guān)心支持！,