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1、室內(nèi)空氣中細(xì)菌的測定,——平皿暴露沉降法,,目的：學(xué)習(xí)和掌握平皿暴露沉降法測定公共場所空氣中細(xì)菌的總數(shù)。評價居室的衛(wèi)生狀況,理論依據(jù)和實(shí)際應(yīng)用：室內(nèi)空氣中的微生物主要來源是人們在室內(nèi)的生活和活動，使微生物隨飛沫與懸浮顆粒物飛揚(yáng)于空氣中。所以室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量的多少取決于室內(nèi)衛(wèi)生狀況、居住密度、居民健康情況、人們的活動情況、室內(nèi)通風(fēng)效果等。居住密度大、活動頻繁、通風(fēng)不良時，細(xì)菌總數(shù)就多。所以它可以代表居室一般衛(wèi)生狀況的意義；,理論依據(jù)和實(shí)際應(yīng)用：附著于室內(nèi)懸浮顆粒物和唾液與痰液飛沫的微生物中含有一定數(shù)量的致病微生物（溶血性鏈球菌、結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌、流感病菌等），可

2、對人致病（在空氣濕度大、通風(fēng)不良、陽光不足的情況下，可保持較長的生存時間和致病性），因此，有必要對室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量作出限制。以病原體作為直接的評價指標(biāo)，在技術(shù)上還有一定難度，所以目前仍多用細(xì)菌總數(shù)作為居室空氣細(xì)菌學(xué)的評價指標(biāo)。,三、原理：空氣中附著于塵?；蝻w沫小滴上的細(xì)菌，經(jīng)過一段時間，可自然沉降于培養(yǎng)基的表面上，經(jīng)培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)其生長的菌落數(shù)，再按公式推算出每立方米空氣中的細(xì)菌數(shù)。,四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：（一）儀器與設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器電熱恒溫干燥箱恒溫培養(yǎng)箱電冰箱玻璃平皿及制備培養(yǎng)基用的一般設(shè)備,（二）試劑與材料：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：（1）成份：蛋白胨10克牛肉浸膏3克氯化鈉5克磷酸二氫鈉1克瓊脂

3、15～20克蒸餾水1000毫升,,（二）試劑與材料：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：（2）制法：將上述成分混合后，加熱溶解。調(diào)節(jié)PH值7.8～8.0。過濾除去沉渣，分裝于三角燒瓶中，經(jīng)121℃（103kPa）高壓蒸氣滅菌20分鐘，然后傾注適量（15～20毫升）于已滅菌處理的平皿內(nèi)，制成營養(yǎng)瓊脂平板備用。若當(dāng)天不用，應(yīng)置冰箱內(nèi)保存。,五、操作步驟：（一）制作營養(yǎng)瓊脂平板（無菌操作）操作者面前點(diǎn)燃酒精燈打開已滅菌處理的平皿傾注適量營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（15～20毫升）冷凝（大約15分鐘）,（二）選擇采樣點(diǎn)的要求：1．采樣點(diǎn)的數(shù)量根據(jù)監(jiān)測室內(nèi)面積大小和現(xiàn)場情況而確定，以期能正確反映室內(nèi)空氣污染物的水平。原則上小于50㎡的

4、房間應(yīng)設(shè)（1～3）個點(diǎn)；50㎡～100㎡設(shè)（3～5）個點(diǎn)；100㎡以上至少設(shè)5個點(diǎn)。在對角線上或梅花式均勻分布。2．采樣點(diǎn)應(yīng)避開通風(fēng)口，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m。3．采樣點(diǎn)的高度：原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對高度0.5m～1.5m之間。,（三）采樣方法1.選擇好采樣點(diǎn)后，將營養(yǎng)瓊脂平板置于這些選測的部位，并將皿蓋揭開，使平皿內(nèi)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面暴露于空氣中5分鐘。蓋上皿蓋，將平板倒轉(zhuǎn)，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。2.計(jì)數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面上所生長的菌落數(shù)，并求出全部采樣點(diǎn)的平均菌落數(shù)。,六、結(jié)果與計(jì)算：1、奧梅梁斯基公式：100cm2的培養(yǎng)皿讓空氣沉降5分鐘，培養(yǎng)出的

5、細(xì)菌數(shù)相當(dāng)于10升空氣中的細(xì)菌數(shù)。X=（N100100）/лR2式中：X——每立方米空氣中的細(xì)菌數(shù)N——平板直接計(jì)數(shù)的平均菌落數(shù)R——平皿的底面積半徑（cm）：9cm,2、直接計(jì)數(shù)：CFU（菌落形成單位/皿），注明（沉降法，皿徑9cm）,,3、將五個采樣點(diǎn)的菌落數(shù)平均計(jì)算出室內(nèi)平均的菌落數(shù)。12345平均細(xì)菌數(shù)（CFU/皿）,,,,感應(yīng)式菌落計(jì)數(shù)儀,九、評價：室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)規(guī)定撞擊法≤4000cfu/m3;沉降法≤45cfu/皿。（室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T17093-1997）,,旅店業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB9663-1996,醫(yī)院空氣消毒效果和污染狀況的評價：空氣消毒效果的比較應(yīng)在消毒前

6、后取樣進(jìn)行培養(yǎng)，如消毒后空氣中細(xì)菌數(shù)明顯下降，說明消毒效果好，下面規(guī)定適用GB15982——1995規(guī)定：Ⅰ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3，且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅱ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格。,Ⅰ類環(huán)境包括層流潔凈手術(shù)室和層流潔凈病房只能采用層流通風(fēng)才能空氣中的微生物減到此標(biāo)準(zhǔn)以下。Ⅱ類環(huán)境包括普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、采用循環(huán)風(fēng)紫外線空氣消毒器或靜電吸附式空氣消毒器，這類均為有人房間，必須采用對人無毒無害且可連續(xù)消毒才能使空

7、氣中的微生物減到此標(biāo)準(zhǔn)以下。Ⅲ類環(huán)境包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病房室和房間，采用紫外線消毒，化學(xué)消毒劑熏蒸或噴霧消毒。,十、注意事項(xiàng)：1.若測定空氣中的溶血性鏈球菌及綠色鏈球菌，則用血瓊脂平板，其他操作及計(jì)算方法與細(xì)菌總數(shù)測定方法相同。2.平皿的底面積直徑不宜小于9cm。3.選擇采樣點(diǎn)時，應(yīng)盡量避開空調(diào)、門窗等氣流變化較大處。整個采樣過程中，應(yīng)動作輕緩，避免揚(yáng)起灰塵，并要注意無菌操作。4.采樣中打開皿蓋時，可將皿蓋向下，切忌血蓋向上而暴露于空氣中，影響采樣結(jié)果。暴露5分鐘后，應(yīng)按打開皿蓋的順序，蓋上皿蓋，帶回實(shí)驗(yàn)室置培養(yǎng)箱，37℃、24小時培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落。,補(bǔ)充：1.撞擊式空氣采樣法：用空氣動力泵抽氣進(jìn)入狹縫，使氣流速度加快，撞擊于正在轉(zhuǎn)動的平皿上。并粘附其上，培養(yǎng)。CFU/m32.吸收法：氣流經(jīng)過一定的吸收液，培養(yǎng)。3.暴露法：CFU/皿。缺點(diǎn)：顆粒物質(zhì)運(yùn)動符合stokes定律，由于人流、季節(jié)、白天細(xì)菌數(shù)>晚上，且技術(shù)定量不同等可造成誤差。,