《《蛋白質(zhì)化學(xué)》PPT課件》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《蛋白質(zhì)化學(xué)》PPT課件（110頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 氨 基 酸 是 蛋 白 質(zhì) 水 解 的 最 終 產(chǎn) 物 ， 是組 成 蛋 白 質(zhì) 的 基 本 單 位 （ 構(gòu) 件 分 子 ） 。 從各 種 生 物 體 內(nèi) 發(fā) 現(xiàn) 的 氨 基 酸 已 有 180多 種 ，但 參 與 蛋 白 質(zhì) 組 成 的 常 見 氨 基 酸 只 有 20種 ，這 20種 氨 基 酸 稱 為 常 見 氨 基 酸 或 基 本 氨 基酸 。 amino acid, aa 或 AA 氨 基 酸 的 結(jié) 構(gòu)氨 基 酸 的 結(jié) 構(gòu) 通 式 H3N C H COO R - + H 2N C H COOH R 或氨 基 酸 是 含 有 氨 基 的 羧 酸 ， 不 同 氨 基 酸 的 R基

2、不 同 ，（ 除 脯 氨 酸 外 ） 都 為 L- -氨 基 酸 。 H 甘 氨 酸CH3 丙 氨 酸L-氨 基 酸 的 通 式R C +NH3COO-H 據(jù) R基 團(tuán)化 學(xué) 結(jié) 構(gòu)分 類 脂 肪 族 A（ 16種 ）芳 香 族 A (Phe、 Tyr、 Trp)雜 環(huán) (His、 Pro)據(jù) R基 團(tuán)極 性 分 類 極 性 R基 團(tuán) AA非 極 性 R基 團(tuán) AA 不 帶 電 荷帶 電 荷 帶 正 電 荷 （ 種 ）帶 負(fù) 電 荷 （ 種 ）據(jù) 酸 堿 性 質(zhì)分 類 中 性 （ 一 氨 基 一 羧 基 ）酸 性 (一 氨 基 二 羧 基 ) Glu、 Asp堿 性 ()（ 二 氨 基 一 羧

3、 基 ） Lys、 His、 Arg 據(jù) 營(yíng) 養(yǎng)學(xué) 分 類 必 需 非 必 需 人 的 必 需 氨 基 酸Met Trp Lys Val Ile Leu Phe Thr假 設(shè) 來 借 一 兩 本 書 Arg、 His Trp、 Cys 甘 氨 酸 （ Gly, G） 丙 氨 酸 （ Ala, A） 纈 氨 酸 （ Val, V） 亮 氨 酸 （ Lue, L） 異 亮 氨 酸 （ Ile, I）1. 側(cè) 鏈 只 是 烴 鏈 （ 5種 ） 脂 肪 族 氨 基 酸 2. 側(cè) 鏈 含 有 羥 基 （ 2種 ）絲 氨 酸 （ Ser, S） 蘇 氨 酸 （ Thr, T） 3. 側(cè) 鏈 含 硫 原 子

4、 （ 2種 ） 半 胱 氨 酸 （ Cys, C） 甲 硫 氨 酸 （ Met, M） 4. 側(cè) 鏈 含 有 羧 基 或 酰 胺 基 （ 4種 ） 天 冬 氨 酸 （ Asp, D） 谷 氨 酸 （ Glu, E） 天 冬 酰 胺（ Asn, N） 谷 氨 酰 胺 （ Gln, Q） 5. 側(cè) 鏈 含 有 堿 性 基 團(tuán) （ 3種 ） 賴 氨 酸 （ Lys, K） 精 氨 酸 （ Arg, R） 組 氨 酸 （ His, H） 苯 丙 氨 酸 （ Phe, F） 酪 氨 酸 （ Tyr, Y） 色 氨 酸 （ Trp, W） 組 氨 酸 （ His,H） 脯 氨 酸 （ Pro,P） 非極性

5、氨基酸 極性中性氨基酸 帶 正 電 荷 的 氨 基 酸帶 負(fù) 電 荷 的 氨 基 酸 在 少 數(shù) 蛋 白 質(zhì) 中 分 離 出 一 些 不 常 見 的 氨 基 酸 ， 通常 稱 為 不 常 見 蛋 白 質(zhì) 氨 基 酸 。 這 些 氨 基 酸 都 是 在 蛋 白質(zhì) 合 成 后 由 相 應(yīng) 的 基 本 氨 基 酸 衍 生 而 來 的 。 NHHO COOH4-羥基脯氨酸 H2NCH2CHCH2CH2CHCOOHOH NH25-羥基賴氨酸NH 2CH3NHCH2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基賴氨酸 HO II CH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 非 蛋 白 質(zhì) 氨 基 酸 ： 存 在

6、 于 生 物 體 內(nèi) ， 但 不 組 成 蛋 白 質(zhì) 的 呈 游 離 或 結(jié) 合 態(tài) 的 氨 基 酸 ， 約 150種 ， 具 有 多 種 生理 功 能 。（ 1） L-氨 基 酸 的 衍 生 物 L-瓜 氨 酸 和 L-鳥 氨 酸 是 合 成 精 氨 酸 的 中 間 產(chǎn) 物 。（ 2） D-氨 基 酸 D-Ala存 在 于 肽 聚 糖 中 ， D-Phe是 短 桿 菌 肽 S的 組 分 。（ 3） 、 、 -氨 基 酸 -Ala是 泛 酸 的 前 體 ， -氨 基 丁 酸 是 傳 遞 神 經(jīng) 沖 動(dòng) 的 化 學(xué) 介 質(zhì) 。 氨 基 酸 的 構(gòu) 型 、 旋 光 性 和 光 吸 收 構(gòu) 型 ：

7、組 成 蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 除 Gly以 外 都 有 手 性 碳 原 子 ，在 三 維 空 間 上 就 有 兩 種 不 同 的 排 列 方 式 ， 它 們 互 為 鏡 影 ，這 兩 種 不 同 的 構(gòu) 型 分 別 稱 為 D-型 和 L-型 。 以 丙 氨 酸 為 例 ： 如 含 兩 個(gè) 手 性 碳 原 子 ， 則 有 種 立 體 異 構(gòu) 體 ， 分 別 稱 為 -, -， 別 -和 別 -氨 基 酸 。 H2N C HCOOHC CH3OHH H C NH2COOHC CH3OHH H C NH2COOHC CH3HHO H2N C HCOOHC CH3HHO L-蘇 氨 酸 (L-

8、threonine) D-蘇 氨 酸 (D-threonine) L-別 -蘇 氨 酸 (L-allo-threonine) D-別 -蘇 氨 酸 (D-allo-threonine) 自 然 界 中 組 成 蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 都 是 L-型 。 (Gly除 外 ) 旋 光 性 ： 組 成 蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 除 Gly以 外 ， 都 有 手 性 碳 原 子 ， 所 以 都 有 旋 光 性 ， 能 使 偏 振 光 的 偏 振 面 的 向 左 或 向 右 旋轉(zhuǎn) ， 向 左 旋 轉(zhuǎn) 的 稱 左 旋 ， 用 “ 一 ” 號(hào) 表 示 ， 向 右 旋 轉(zhuǎn) 的稱 右 旋 ， 用 “ ”

9、號(hào) 表 示 。 是 AA的 物 理 常 數(shù) ， 與 結(jié) 構(gòu) 、PH值 有 關(guān) 。 消 旋 外 消 旋內(nèi) 消 旋 光 吸 收 ：組 成 蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 中 ，Trp、 Tyr和 Phe對(duì) 紫 外 光有 一 定 的 吸 收 ， 這 是 因 為它 們 分 子 中 含 有 苯 環(huán) ， 是苯 環(huán) 的 共 軛 雙 鍵 造 成 的 ，這 三 個(gè) 氨 基 酸 的 光 吸 收 都在 280nm附 近 。 pH=pI +OH- pHpI+H+OH-+H+pH中 性AA酸 性 AA 逐 步 提 高 洗脫 液 pH和 離子 強(qiáng) 度 二 、 電 泳 氨 基 酸 在 pH高 于 或 低 于 其 pI的 溶 液

10、 中 為 帶 電的 顆 粒 ， 在 電 場(chǎng) 中 能 向 正 極 或 負(fù) 極 移 動(dòng) 。 這 種 通 過氨 基 酸 在 電 場(chǎng) 中 泳 動(dòng) 而 達(dá) 到 分 離 各 種 氨 基 酸 的 技 術(shù) , 稱 為 電 泳 (elctrophoresis) 。 分 離 氨 基 酸 混 合 物 常 用 紙 電 泳 。 一 、 蛋 白 質(zhì) 的 定 義 蛋 白 質(zhì) (Protein， pr) ： 是 一 切 生物 體 中 普 遍 存 在 的 ， 由 天 然 氨 基 酸按 照 一 定 的 順 序 ， 通 過 肽 鍵 連 接 而成 的 一 條 或 多 條 肽 鏈 構(gòu) 成 的 生 物 大分 子 ； 其 種 類 繁 多

11、， 各 具 有 一 定 的相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 ， 復(fù) 雜 的 分 子 結(jié) 構(gòu) 和特 定 的 生 物 功 能 ； 是 表 達(dá) 生 物 遺 傳性 狀 的 一 類 主 要 物 質(zhì) 。 各 種 蛋 白 質(zhì) 的 含 氮 量 很 接 近 ， 平 均 為 16 ， 這 是 凱 氏 定 氮 法測(cè) 蛋 白 質(zhì) 含 量 的 理 論 依 據(jù) ： 蛋 白 質(zhì) 含 量 蛋 白 質(zhì) 含 N量 6.25 蛋 白 質(zhì) 的 外 形 分 類球 狀 蛋 白 質(zhì) 外 形 接 近 球 形 或 橢 圓 形 ， 溶 解 性 較 好 ， 能 形 成 結(jié) 晶 ， 大 多數(shù) 蛋 白 質(zhì) 屬 于 這 一 類 。 但 肌 動(dòng) 蛋 白 屬 于 球

12、 狀 蛋 白 卻 不 溶 于 水 。纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) 分 子 類 似 纖 維 或 細(xì) 棒 。 它 又 可 分 為 可 溶 性 纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) 和 不 溶 性 纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) 。 不 溶 性 纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) ： 大 多 數(shù) 纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) 屬 此 類 ， 如 膠 原 蛋 白 、 彈 性 蛋 白 、 角 蛋 白 、 絲 蛋 白 等 。 可 溶 性 纖 維 狀 蛋 白 質(zhì) ： 肌 球 蛋 白 和 血 纖 蛋 白 原 可 溶 于 水 。 多 肽 鏈 條 數(shù) 分 類單 體 蛋 白 質(zhì) 僅 含 一 條 多 肽 鏈 。多 聚 蛋 白 質(zhì) 含 兩 條 或 多 條 多 肽

13、鏈 。 例 如 ： 牛 核 糖 核 酸 酶 ： 一 條 多 肽 鏈 胰 島 素 ： 兩 條 （ 兩 種 ） 多 肽 鏈 血 紅 蛋 白 ： 四 條 （ 兩 種 ） 多 肽 鏈 胰 島 素牛 核 糖 核 酸 酶 血 紅 蛋 白 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) (primary structure)二 級(jí) 結(jié) 構(gòu) (secondary structure)三 級(jí) 結(jié) 構(gòu) (tertiary structure)四 級(jí) 結(jié) 構(gòu) (quaternary structure) 高 級(jí)結(jié) 構(gòu)蛋 白 質(zhì) 的 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 決 定 高 級(jí) 結(jié) 構(gòu) ！ 肽 是 由 一 個(gè) 氨 基 酸 的 -羧 基 與 另 一 個(gè) 氨 基 酸

14、 的 -氨 基 脫 水 縮 合 而 形 成 的 無 分 支 線 形 聚 合 物 。 其 中 的 氨基 酸 單 位 稱 氨 基 酸 殘 基 。 氨 基 酸 間 縮 水 形 成 的 共 價(jià) 鍵 稱 肽 鍵 (peptide bond)。 NH2-CH-CH O OH甘 氨 酸甘 氨 酸 +-HOH 甘 氨 酰 甘 氨 酸肽 鍵NH2-CH-C-N-CH-COOHHHH ONH-CH-CH OHOH 甘 氨 酸 甘 氨 酰 甘 氨 酸 *兩 分 子 氨 基 酸 縮 合 形 成 二 肽 ， 三 分 子 氨 基 酸 縮 合 則 形 成 三 肽 *由 十 個(gè) 以 內(nèi) 氨 基 酸 相 連 而 成 的 肽 稱

15、 為 寡 肽 (oligopeptide)， 由 更 多 的 氨 基 酸 相 連 形 成 的 肽 稱 多 肽 (polypeptide)。* 多 肽 鏈 (polypeptide chain)是 指 許 多 氨 基 酸 之 間 以 肽 鍵 連 接 而成 的 一 種 結(jié) 構(gòu) 。 N 末 端 ： 多 肽 鏈 中 有 自 由 氨 基 的 一 端C 末 端 ： 多 肽 鏈 中 有 自 由 羧 基 的 一 端多 肽 鏈 有 兩 端氨 基 酸 的 順 序 是 N 端 C 端 的 排 列 順 序 。 如 上 述 五 肽 可 表 示 為 ： Ser-Val-Tyr-Asp-Gly 絲 氨 酰 纈 氨 酰 酪

16、氨 酰 天 冬 氨 酰 谷 氨 酸 COOH 氮 原 子 上 的 孤 對(duì) 電 子 與 羰 基 具 有 明 顯 的 共 軛 作 用 ， 肽 鍵 中 的 C-N鍵 具 有 部 分 雙 鍵 性 質(zhì) ， 不 能 自 由 旋 轉(zhuǎn) 。 所以 連 接 在 肽 鍵 兩 端 的 基 團(tuán) 處 于 一 個(gè) 平 面 上 ， 這 個(gè) 平 面稱 為 肽 平 面 。 在 大 多 數(shù) 情 況 下 ， 相 鄰 肽 平 面 以 反 式 結(jié)構(gòu) 存 在 。 酰 胺 平 面 由 肽 鍵 周 圍 的 6個(gè) 原 子 組 成 的 剛 性 平 面鍵 長(zhǎng) 介 于 單雙 鍵 之 間 + 類 似 于 氨 基 酸 性 質(zhì) 雙 縮 脲 反 應(yīng) ： 含

17、有 兩 個(gè) 或 兩 個(gè) 以 上 肽 鍵 的 化 合 物 與 堿性 硫 酸 銅 作 用 ， 生 成 藍(lán) 紫 色 的 復(fù) 合 物 ， 肽 鍵 越 多 顏 色越 深 ， 受 蛋 白 質(zhì) 特 異 性 影 響 小 ， 可 用 于 肽 和 蛋 白 質(zhì) 定量 測(cè) 定 及 測(cè) 定 蛋 白 質(zhì) 水 解 程 度 。 - GSH過 氧化 物 酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還 原 酶NADPH+H+ NADP+ 谷 胱 甘 肽 在 體 內(nèi) 參 與 氧 化 還 原 過 程 ， 作 為 某 些 氧 化 還原 酶 的 輔 因 子 ， 作 用 是 保 護(hù) 巰 基 酶 ， 或 防 止 過 氧 化 物積 累 。

18、 抗 生 素 類 多 肽 短 桿 菌 肽 S 體 內(nèi) 許 多 激 素 屬 寡 肽 或 多 肽 激 素 類 多 肽 蛋 白 質(zhì) 的 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) (Primary structure)包 括 ： (1)組 成 蛋 白 質(zhì) 的 多 肽 鏈 數(shù) 目 ; (2)多 肽 鏈 的 氨 基 酸 順 序 ; (3)多 肽 鏈 內(nèi) 或 鏈 間 二 硫 鍵 的 數(shù) 目 和 位 置 。 其 中 最 重 要 的 是 多 肽 鏈 的 氨 基 酸 順 序 ， 它 是 蛋 白質(zhì) 生 物 功 能 的 基 礎(chǔ) 。 2.蛋 白 質(zhì) 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 測(cè) 定 的 意 義 是 推 測(cè) 蛋 白 質(zhì) 高 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 的 分 子 依 據(jù)

19、是 理 解 蛋 白 質(zhì) 生 理 功 能 的 分 子 基 礎(chǔ) 是 闡 明 遺 傳 疾 病 發(fā) 生 機(jī) 理 的 分 子 手 段 是 研 究 生 物 進(jìn) 化 的 分 子 佐 證 胰 島 素一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 高 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 鐮 刀 形紅 細(xì) 胞正 常 紅細(xì) 胞-鏈 N端 氨 基 酸 排 列 順 序 1 2 3 4 5 6 7 8 Hb-A（ 正 常 人 ） Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys Hb-S（ 患 者 ） Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys 生 物 與 人 不 同 的 AA數(shù) 目黑 猩 猩 0恒 河 猴 1兔 9袋 鼠 10牛 、 豬 、

20、 羊 、 狗 11馬 12雞 、 火 雞 13響 尾 蛇 14海 龜 15金 槍 魚 21角 餃 23小 蠅 25 蛾 31小 麥 35粗 早 鏈 孢 霉 43酵 母 44 14106 100 134323029271817 675952514845413887848280706891 GlyGlyPheCysGly Gly Gly ArgLys GlyCysLys Phe HisProLeuGlyArgTyrAlaAsnTrpTyr 70 7580 LysLysLysProProTyrIleGlyThrMetAsnLeu 血 紅 素 細(xì) 胞 色 素 c分 子 的 空 間 結(jié) 構(gòu)不 變 的 A

21、A殘 基 35個(gè) 不 變 的 AA殘 基 ， 是 Cyt C 的 生 物 功 能 所 不可 缺 少 的 。 其 中 有 的 可 能 參 加 維 持 分 子 構(gòu) 象 ； 有 的可 能 參 與 電 子 傳 遞 ； 有 的 可 能 參 與 “ 識(shí) 別 ” 并 結(jié) 合細(xì) 胞 色 素 還 原 酶 和 氧 化 酶 。 3.一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 測(cè) 定 的 原 則 和 基 本 流 程一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 測(cè) 定 的 原 則 ：將 大 化 小 ， 逐 段 分 析 ， 制 成 兩 套 肽 片 段 ， 找 出 重疊 位 點(diǎn) ， 排 出 肽 的 前 后 位 置 ， 最 后 確 定 蛋 白 質(zhì) 的完 整 序 列 。目 前 往 往

22、 采 用 從 待 測(cè) 蛋 白 質(zhì) 的 基 因 序 列 反 推 出蛋 白 質(zhì) 的 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 。 將 肽 段 順 序 進(jìn) 行 疊 聯(lián) 以 確 定 完 整 的 順 序 將 肽 段 分 離 并 測(cè) 出 順 序?qū)?一 性 裂 解末 端 氨 基 酸 測(cè) 定 拆 開 二 硫 鍵純 蛋 白 質(zhì) 通 過 核 酸 來 推 演 蛋 白 質(zhì) 中 的 氨 基 酸 序 列按 照 三 聯(lián) 密 碼 的 原 則 推 演 出 氨 基 酸 的 序 列分 離 編 碼 蛋 白 質(zhì) 的 基 因測(cè) 定 DNA序 列排 列 出 mRNA序 列 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 測(cè) 定 的 基 本 流 程 :（ 7） 酰 胺 基 位 置 的 確 定 。

23、測(cè) 定 蛋 白 質(zhì) 的 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 前 的 準(zhǔn) 備 工 作A. 樣 品 純 度 必 須 97%以 上 ； 聚 丙 烯 酰 胺 凝 膠 電 泳 要 求 一 條 帶B. 測(cè) 定 蛋 白 質(zhì) 的 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 ； SDS-PAGE， 凝 膠 過 濾 法 ， 沉 降 系 數(shù) 法C. 測(cè) 定 蛋 白 質(zhì) 多 肽 鏈 種 類 和 數(shù) 目 ； 種 類 ： SDS-PAGE 數(shù) 目 ： N末 端 氨 基 酸 殘 基 摩 爾 數(shù) /蛋 白 質(zhì) 摩 爾 數(shù)D. 測(cè) 定 蛋 白 質(zhì) 的 氨 基 酸 組 成 ； 并 根 據(jù) 分 子 量 計(jì) 算 每 種 氨 基 酸 的個(gè) 數(shù) ；E. 測(cè) 定 水 解 液 中

24、 的 氨 量 ， 計(jì) 算 酰 胺 的 含 量 。 4.蛋 白 質(zhì) 的 一 級(jí) 結(jié) 構(gòu) 測(cè) 定1） 多 肽 鏈 的 拆 分 獲 得 單 條 線 形 多 肽 鏈 由 多 條 多 肽 鏈 組 成 的 蛋 白 質(zhì) 分 子 ， 必 須 先 進(jìn) 行 拆分 。 如 ： 血 紅 蛋 白 為 四 聚 體 ， 烯 醇 化 酶 為 二 聚 體等 。 拆 分 非 共 價(jià) 鍵 ： 可 用 8mol/L尿 素 或 6mol/L鹽 酸 胍 處 理 。 拆 分 拆 分 巰 基 的 保 護(hù)-OOC CHCH2 SHNH 3+ ICH2CNH2O CH2OCClOCH2Cl -OOC CHCH2 SNH3+ OCCH2OCH2-

25、OOC CHCH2 SNH 3+ CH2CNH2O-OOC CHCH2 SNH3+ 2） N-末 端 和 C-末 端 氨 基 酸 殘 基 的 確 定 為 氨 基 酸 序 列 排 列 建 立 兩 個(gè) 重 要 的 參 考 點(diǎn)N端 分 析 方 法 ： 二 硝 基 氟 苯 法 （ DNP法 、 DNFB法 或 FDNB法 ） 丹 磺 酰 氯 法 （ DNS法 ） 丹 磺 酰 -氨基 酸 有 很 強(qiáng)的 熒 光 性 質(zhì) 苯 異 硫 氰 酸 (酯 )法 （ PITC法 、 PTC法 、 PTH法 、 Edman降 解 法 ） 由 于 其 連 續(xù) 反 應(yīng) 特 性 ，成 為 蛋 白 質(zhì) 序 列 分 析 儀的 分

26、 析 原 理 ！ 氨 肽 酶 （ aminopeptidase, Apase） 法 Ala Val Gly氨 肽 酶 法 ： 氨 肽 酶 是 一 種 肽 鏈 外 切 酶 ， 它 能 從 多 肽 鏈 的 N-端 逐 個(gè) 的水 解 。 根 據(jù) 不 同 的 反 應(yīng) 時(shí) 間 測(cè) 出 酶 水 解 所 釋 放 出 的 氨 基 酸 種 類 和 數(shù) 量 ， 從 而 知 道 蛋 白 質(zhì) 的 N-末 端 殘 基 順 序 。 最 常 用 的 氨 肽 酶 是 亮 氨 酸氨 肽 酶 ， 水 解 以 亮 氨 酸 殘 基 為 N-末 端 的 肽 鍵 速 度 最 大 。 C末 端 分 析 方 法肼 解 法 ： 多 肽 與 肼

27、 在 無 水 條 件 下 加 熱 ， C-端 氨 基 酸 即 從 肽 鏈上 解 離 出 來 ， 其 余 的 氨 基 酸 則 變 成 肼 化 物 。 肼 化 物 能 夠與 苯 甲 醛 縮 合 成 不 溶 于 水 的 物 質(zhì) 而 與 C-端 氨 基 酸 分 離 。 H2N CH CR O HN CH CR O ORn CCHHN OHn-1N-端氨基酸 C-端氨基酸 ORn CCHH 2N OHH2N CH CR O NHNH2 +H+NH2NH2 氨基酸酰肼 C-端氨基酸 羧 肽 酶 法 ： 羧 肽 酶 是 一 種 肽 鏈 外 切 酶 ， 它 能 從 多 肽鏈 的 C-端 逐 個(gè) 的 水 解 。

28、目 前 常 用 的 羧 肽 酶 有 四 種 ： A,B,C和 Y。 羧 肽 酶 A能水 解 除 Pro,Arg和 Lys以 外 的 所 有 C-末 端 氨 基 酸 殘 基 ；B只 能 水 解 Arg和 Lys為 C-末 端 殘 基 的 肽 鍵 。 （ 3） 多 肽 鏈 部 分 裂 解 成 較 小 的 片 段 化 大 為 小 ， 獲 得 短 肽 段甲 硫 氨 酸 CH3 S：CH2CH2CHNH C NH CH CO OR + Br C+ N Br-CH3 S+CH 2CH2CHNH C NH CH CO ORC N CH3 S C N CH2CHNH C NH CH CO ORCH2 +H2O

29、 +CH2CHNH COCH2 O H3N + CH COR高絲氨酸內(nèi)酯 胰 蛋 白 酶 ：R1=賴 氨 酸 Lys和 精 氨 酸Arg側(cè) 鏈 （ 專 一 性 較 強(qiáng) ，水 解 速 度 快 ） 。 NH CH COR4NH CH COR3NH CH COR2NH CH COR1 NH CH COR4NH CH COR3NH CH COR2NH CH COR1糜 蛋 白 酶 胃 蛋 白 酶 ：在 疏 水 性 氨 基 酸 處 部 分 水 解 ， 最適 反 應(yīng) pH為 23。 （ 4） 測(cè) 定 各 短 肽 段 的 氨 基 酸 序 列 利 用 兩 套 或 多 套 肽 段 的 氨 基 酸 順 序 彼 此 間 的 交錯(cuò) 重 疊 ， 拼 湊 出 整 條 多 肽 鏈 的 氨 基 酸 順 序 。 對(duì) 角 線 電 泳 動(dòng) 態(tài) 圖 解 （ 7） 酰 胺 基 位 置 的 確 定AspAsn、 GluGln方 法 ： 酶 解 肽 鏈 ， 產(chǎn) 生 含 有 單 個(gè) Asx或 Glx的 肽 ， 用電 泳 法 確 定 是 Asp還 是 Asn。