《DNA重組技術(shù)的基本工具 課件.ppt》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《DNA重組技術(shù)的基本工具 課件.ppt（32頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 自 然 界 是 否 存 在 一 種 生 物 的 DNA進(jìn) 入 另 一 生物 的 情 況 ？噬 菌 體 侵 染 細(xì) 菌 的 實(shí) 驗(yàn) 。思 考 ： 主 要 從 原 核 生 物 中 分 離 純 化思 考一 、 限 制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 “ 分 子 手 術(shù) 刀 ” 根 據(jù) 你 所 掌 握 的 知 識(shí) 你 能 推 測(cè) 限 制 酶 存 在 于原 核 生 物 中 的 作 用 是 什 么 嗎 ？限 制 酶 在 原 核 生 物 中 主 要 起 到 切 割 外 源 DNA使 之 失 效 ， 從 而 達(dá) 到 保 護(hù) 自 身 的 目 的 。 現(xiàn) 在 已 經(jīng) 從 約 300種 微 生 物 中 分 離 出 了 約

2、4000種 限 制 性 內(nèi) 核 酸 切 酶 (限 制 酶 )。 練 習(xí) ： 流 感 嗜 血 桿 菌 的 d菌 株( Haemophilus influenzae d )中 先 后 分 離 到 3種 限 制 酶 ， 則 分別 命 名 為 :H ind 、 H ind 、 H ind一 、 限 制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 “ 分 子 手 術(shù) 刀 ”粘 質(zhì) 沙 雷 氏 桿 菌（ Serratia marcesens）Sma 大 腸 桿 菌（ Escherichia coli R）EcoR （ 1） 識(shí) 別 雙 鏈 DNA分 子 的 某 種 特 定 的 核 苷 酸 序 列例 如 ： 大 腸 桿 菌 的

3、 EcoR 限 制 酶 只 能 識(shí) 別 GAATTC序列 ，一 、 限 制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 “ 分 子 手 術(shù) 刀 ”（ 2） 在 特 定 的 位 點(diǎn) 切 割 DNA分 子 。并 在 G和 A之 間 切 開 。特 異 性 能 被 限 制 性 內(nèi) 切酶 特 異 性 識(shí) 別 的 切 割部 位 都 具 有 回 文 序 列 ：在 切 割 部 位 ， 一 條 鏈正 向 讀 的 堿 基 順 序 與另 一 條 鏈 反 向 讀 的 順序 完 全 一 致 。 切 割 DNA分 子 實(shí) 質(zhì) 是 斷 開 兩 個(gè)核 苷 酸 之 間 的 磷 酸 二 酯 鍵 。 產(chǎn) 生 黏 性 末 端 或 平 末 端一 、 限

4、制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 “ 分 子 手 術(shù) 刀 ” 平 末 端 平 末 端 脫 氧 核 糖 和 磷 酸催 化 磷 酸 二 酯 鍵 形 成二 、 DNA連 接 酶 “ 分 子 縫 合 針 ” 3. 種 類 ： （ 1） EcoliDNA連 接 酶 （ 2） T4DNA連 接 酶恢 復(fù)磷 酸二 酯 鍵 只 能 連 接 黏 性 末 端能 連 接 黏 性 末 端 和平 末 端 (效 率 較 低 )二 、 DNA連 接 酶 “ 分 子 縫 合 針 ” DNA聚 合 酶 DNA連 接 酶模 板作 用 底 物作 用 特 點(diǎn)相 同 點(diǎn) DNA連 接 酶 與 DNA聚 合 酶 是 一 回 事 嗎 ?為 什

5、么 ?形 成 磷 酸 二 酯 鍵以 一 條 DNA鏈 為 模 板 ，單 個(gè) 核 苷 酸 連 接 成一 條 互 補(bǔ) 的 DNA鏈 將 DNA雙 鏈 上 的 兩 個(gè)缺 口 同 時(shí) 連 接 起 來 ，不 需 要 模 板需 要 不 需 要單 個(gè) 脫 氧 核 苷 酸 DNA分 子 片 段 運(yùn) 載 體 必 備 的 條 件 ： 在 受 體 細(xì) 胞 中 能 自 我 復(fù) 制 并 穩(wěn) 定 保 存 有 1個(gè) 至 多 個(gè) 限 制 酶 切 割 位 點(diǎn) 有 特 殊 的 標(biāo) 記 基 因 ， 便 于 鑒 定 和 選 擇 對(duì) 受 體 細(xì) 胞 的 生 存 無 決 定 性 作 用 常 用 運(yùn) 載 體 ： 質(zhì) 粒 噬 菌 體 的 衍 生 物 動(dòng) 植 物 病 毒三 、 基 因 進(jìn) 入 受 體 細(xì) 胞 的 載 體 “ 分 子 運(yùn) 輸 車 ” 常 存 在 于 原 核 細(xì) 胞 中 ， 是 一 種 裸 露 的 、 結(jié) 構(gòu) 簡 單 、 獨(dú)立 于 擬 核 之 外 能 自 我 復(fù) 制 的 很 小 的 雙 鏈 環(huán) 狀 DNA分 子 。