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1、單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),2015/12/15,#,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,主講人：王留勇,鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵,1.,通過(guò)分光光度法測(cè)定鐵的條件實(shí)驗(yàn),學(xué)會(huì)如何選擇分光光度分析的條件。,2.,掌握鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵的原理和方法。,3.,了解,7220,型分光光度計(jì),的構(gòu)造和使用方法。,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?鄰,二氮雜菲是測(cè)定微量鐵的一種較好的試劑。在,pH 2-9,的范圍,內(nèi),與,鄰二氮雜菲反應(yīng)生成極穩(wěn)定的橘紅色配合,物,其,反應(yīng)式,如下：,該,配合物的最大吸收峰在,510,nm,處,，摩爾,吸收系數(shù),二、實(shí)驗(yàn)原理,與,鄰二氮雜,菲能生成,3:1,的,淡

2、藍(lán)色配合,物,因此，在顯色之前應(yīng)預(yù)先,用鹽酸羥,氨,將,離子還原成 離子,其反應(yīng)式如下,：,二價(jià)鐵離子與鄰二氮雜菲在,pH,為,2-9,的范圍內(nèi)都能顯色，但酸度高，反應(yīng)較慢，酸度太低，二價(jià)鐵水解。所以一般在,pH,在,5-6,的微酸性溶液中顯色較為適宜。,本,測(cè)定方法不僅靈敏度,高、穩(wěn)定性,好，而且選擇性,高。,實(shí)驗(yàn)原理,分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)，通常要經(jīng)過(guò)取樣、顯色,及測(cè)量,等步驟。為了使測(cè)定有較高的靈敏度和,準(zhǔn)確度，必須,選擇適宜的顯色反應(yīng)的條件和,測(cè)量吸光度,的條件。,通常所,研究的顯色反應(yīng)條件有溶液的,酸度、顯色劑用量、顯,色,時(shí)間、溫度、溶劑,以及共存離子干擾,及其消除,方法等。,測(cè)

3、量吸光度,的,條件主要,是測(cè)量,波長(zhǎng)、吸光度,范圍和參比溶液的選擇。,實(shí)驗(yàn)原理,100,ug/mL,的鐵,標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確,稱取,0.864,g,分析純,置于,一燒杯,中，以,30,ml,2,mol/LHCL,溶液,溶解,后轉(zhuǎn)入,1000,mL,容量瓶中,以,水稀釋至,刻度,搖,勻,。,10,ug/mL,的,鐵,標(biāo)準(zhǔn)溶液,由,100,ug/mL,的,鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液用水準(zhǔn)確稀釋,10,倍而成,。,100,g/mL,鹽酸羥胺溶液（因,其不穩(wěn)定，需臨用時(shí),配制）,1,g/mL,鄰,二氮雜菲,溶液,1,mol/L,溶液,2,mol/L HCL,溶液,7220,型分光光度計(jì),50,mL,容量瓶,8,只,，,1

4、00,mL,容量瓶,1,只,吸量管,1mL 1,支、,2,mL 1,支、,5,mL,4,支。,三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑,1.,條件實(shí)驗(yàn),:,吸收,曲線,的測(cè)繪：準(zhǔn)確,吸取,10,ug/mL,鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液,5.0,mL,于,50,mL,容量瓶,中，加入,100,g/mL,鹽酸,羥,胺溶液,1.0,mL,搖勻,加入,1,mol/L,溶液,5.0,mL,和,1,g/L,鄰,二氮雜菲,溶液,3.0,mL,，,以水稀釋至刻度，搖勻,。放置,10,min,在,7220,型分光光度計(jì),上，,用,2,cm,比,色皿，以水為參比溶液，波長(zhǎng)從,570,nm,開(kāi)始,到,430,nm,為止,，每隔,10,或,20,nm,測(cè)定

5、,一次,吸光度,(,其中,從,530,490,nm,，,每隔,10,nm,測(cè),一,次,),，,然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制出吸收曲線，從吸收曲線,上確定,該測(cè)定的適宜,波長(zhǎng),(,最大吸收波長(zhǎng),),。,四、實(shí)驗(yàn)步驟,2.,鐵,含量的,測(cè)定,:,(1),標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)繪：取,50,mL,容量瓶,6,支,編號(hào),。分別吸取,10,ug/mL,的,鐵,標(biāo)準(zhǔn)溶液,2.0,mL,、,4.0,mL,、,6.0,mL,、,8.0,mL,和,10.0,mL(,務(wù)必,準(zhǔn)確量,取,),于,5,只容量瓶中，另一容量瓶中不加鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液,(,配置空白溶液，作參比,),。然后,各,加,1.0,mL,100,g/mL,

6、鹽酸,羥胺溶液，搖勻，,經(jīng),2,min,后,，再各,加,5.0,mL,1,mol/L,的 溶液及,3.0,mL,1,g/mL,鄰二,氮雜菲,溶液，以,水稀釋至,刻度，搖,勻。,放置,10,min,在,分光光度計(jì),上,用,2,cm,比,色,皿,在,最大吸收,波長(zhǎng),(,510,nm),處,測(cè)定,各,溶液的吸光度。以鐵含量為,橫坐標(biāo)，吸光度,為,縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,實(shí)驗(yàn)步驟,(2),未知,液中鐵含量的,測(cè)定,:,吸取,10,mL,未知,液代替,標(biāo)準(zhǔn)溶液,其他,步驟均,同上,測(cè)定,吸光度。由未知液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上,查出,10,mL,未知,液中的鐵,含量,以,mg/L,表示,結(jié)果,。,實(shí)驗(yàn)步驟,

7、1.,記錄表格,:(1).,吸收曲線的測(cè)繪記錄,:,(2).,標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)繪記錄：,五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄,波長(zhǎng),/nm,430,450,470,490,500,510,520,530,550,570,吸光度,序號(hào),項(xiàng)目,1,2,3,4,5,6,7(,鐵試樣溶液,),取,10ug/mL,鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,(mL),鐵含,(ug/mL),最大吸收波長(zhǎng),(nm),吸光度,A,2.(1),根據(jù)表格一繪制吸收曲線,(A-),(2),根據(jù)表格二繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,(,縱坐標(biāo)為,A,橫坐標(biāo)為鐵,的含量，單位為,ug/mL),3.,根據(jù)鐵樣品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線,表示出標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，再將未知樣液的吸光強(qiáng)度代入，求得樣液中的

8、鐵的含量，單位為,mg/L,。,數(shù)據(jù)記錄：,參比溶液又稱空白溶液。測(cè)量時(shí)用作比較的、不含被測(cè)物質(zhì)但其基體盡可能是與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時(shí)，基體中雖不含被測(cè)物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時(shí)必須保證其不影響測(cè)試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測(cè)物質(zhì)，此時(shí)必須經(jīng)過(guò)純化將其除去。否則將影響測(cè)定結(jié)果。在色譜分析中，有時(shí)基體中可能存在一個(gè)以上的和被測(cè)組分相距較遠(yuǎn)的色譜峰，計(jì)算機(jī)在數(shù)據(jù)處理中不會(huì)計(jì)入它們，不影響測(cè)定。,參比溶液？,用分光光度計(jì)測(cè)量，被測(cè)的都為液體，通常是稀釋后的，要測(cè)的是溶質(zhì)吸光度，而溶劑也是有影響的，所以要有參比，以參比溶液調(diào)節(jié)零點(diǎn)，去除溶劑對(duì)溶質(zhì)吸

9、光度的影響。在進(jìn)行光度測(cè)量時(shí)，利用參比溶液來(lái)調(diào)節(jié)儀器的零點(diǎn)，可以消除由于吸收池壁及溶劑對(duì)入射光的反射和吸收帶來(lái)的誤差，并扣除干擾的影響。參比溶液可根據(jù)下列情況來(lái)選擇。,A.,當(dāng)試劑及顯色劑均無(wú)色時(shí)，可用蒸餾水作參比溶液。,B.,顯色劑為無(wú)色，而被測(cè)試液中存在其它有色離子，可用不加顯色劑 的被測(cè)試液作為參比溶液。,C.,顯色劑有顏色，可選用不加被測(cè)試液而加入顯色劑的溶液作為參比溶液。,D.,顯色劑和試液均有顏色，可將一份試液加入適當(dāng)掩蔽劑，將被測(cè)組分掩蔽起來(lái)，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其它試劑均按試液測(cè)定方法加入，以此作為參比溶液，這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。,E.,改變加入

10、試劑的順序，使被測(cè)組分不發(fā)生顯色反應(yīng)，可以把此溶液作為參比溶液消除干擾。,參比溶液的選擇：,7220,型分光光度計(jì)的構(gòu)造：,分光光度計(jì)的原理：,分光光度計(jì)的基本原理：溶液中的物質(zhì)在光的照耀下，發(fā)生了對(duì)光的特定吸收的效應(yīng)，而且物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某種光透過(guò)溶液時(shí)，其能量就會(huì)被吸收而減弱，光能減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，既符合朗伯,-,比爾定律：,A,吸光度,入射光強(qiáng)度,吸收系數(shù),透射光強(qiáng)度,b,比色,皿池長(zhǎng)度,c,溶液的濃度,T,透射比 由上式可以看出當(dāng)吸收系數(shù),a,與光程長(zhǎng)度,b,不變時(shí)，吸光度與溶液濃度成正比。本儀器正是依據(jù)這一

11、原理而設(shè)計(jì)的。,1.,開(kāi)機(jī)安裝好儀器后，檢查樣池位置，使其處在光路中（拉動(dòng)拉手應(yīng)感應(yīng)到每擋的定位），關(guān)好樣品室門，打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱,10,分鐘，即可進(jìn)行測(cè)量。,2.,打開(kāi)樣品室門，將方式定于透過(guò)率檔，按,0%T,進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。,3.,從蒸餾水中取出比色皿擦干，注意拿比色皿的時(shí)候拿毛玻璃面。向比色皿內(nèi)注入少量試液，潤(rùn)洗三次，然后注入,3/4,至,4/5,的試液，用濾紙片擦干外壁所掛水珠。將比色皿按順序放入樣品池。注意光面對(duì)光源。,4.,在樣品池中放置空白液與樣品。,5.,按需要調(diào)節(jié)波長(zhǎng)按鈕。,6.,使空白溶液位于光路中，按方式選擇鍵使吸光度指示燈亮，按,100%T,鍵調(diào),100%,，至窗口

12、顯示,100%,。,7.,打開(kāi)樣品室門，將功能調(diào)于透射比檔，觀察顯示是否為,0.0,，若否則按,0%T,鍵調(diào)零。調(diào)零后再放回吸光度檔。,8.,重復(fù)上兩步，直至儀器穩(wěn)定。,9.,將樣品置入光路，從顯示屏上讀取吸光度,。,7220,型分光光度計(jì)的使用方法：,1.,鹽酸羥胺溶液配制已久對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來(lái)什么影響？,答：羥胺是用來(lái)將 還原成 的，如果配制已久，還原能力減弱，就會(huì)使部分鐵離子得不到還原，造成分析結(jié)果偏小。,2.,用分光光度計(jì)測(cè)量顯色劑量不同時(shí)的吸光度時(shí)應(yīng)注意什么？,答,:,應(yīng)用分光光度計(jì)測(cè)量顯示劑量不同時(shí)的吸光度時(shí)，應(yīng)保持用一個(gè)比色皿測(cè)量，這樣可以減小比色皿自身對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的影響,3.,為什么要用鄰二氮雜菲顯色后再測(cè)量？,六,.,思考,答：因?yàn)樗形⒘拷M分較少，對(duì)光的吸收很小，無(wú)法測(cè)出其吸光光度，加入顯色劑后，與被測(cè)組分形成絡(luò)合物，摩爾吸收系數(shù)較高，吸光明顯，容易測(cè)定。,4.,顯色時(shí)，加入還原劑，緩沖劑，顯色劑的順序是否可以顛倒？為什么？,答：不可以，若在加還原劑前先加顯色劑鄰二氮菲，鄰二氮菲會(huì)與 絡(luò)合，再加入還原劑，已絡(luò)合的三價(jià)鐵無(wú)法還原成二價(jià)鐵，不能準(zhǔn)確得出鐵的含量。還原劑是為了把 還原為,，緩沖溶液是調(diào)節(jié)一定的,PH,值范圍,謝謝,觀看！,