《級(jí)DNS法測(cè)定還原糖含量最終版》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《級(jí)DNS法測(cè)定還原糖含量最終版（11頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),#,目的,掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理，學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法,原理,1.還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖。,2.在NaOH和丙三醇存在下，,DNS,與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物，在過量的堿性溶液中此化合物呈桔紅色，,在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系,，利用分光光度計(jì)，在550nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。,3.由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加

2、入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。,反應(yīng)化學(xué)方程式,桔紅色,黃色,實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑,1、試劑,（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液,準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL,（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑,將6.3g DNS和262mL 2Mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1000mL，貯于棕色瓶中備用。,（3）碘-碘化鉀溶液,（4）6mol/l NaOH,（5）0.1%酚酞指示劑,（6）6mol/l HCl溶液,2、材料,淀粉,

3、3、器材 分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電子萬用爐，試管若干,實(shí)驗(yàn)步驟,一、制作葡萄糖標(biāo)曲線,取10支試管，按下表加入試劑,試劑,0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml,0,0.2,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,1.0,1.2,1.4,蒸餾水/ml,2.0,1.8,1.6,1.5,1.4,1.3,1.2,1.0,0.8,0.6,DNS/ml,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,葡萄糖含量/mg,0,0.2,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,1.0,1.2,1.4,混合均勻,沸水中加熱5min取出,冷水冷卻至室溫,各管加

4、入21.5ml蒸餾水,測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,（550nm波長(zhǎng)處）,二、樣品中還原糖提取,準(zhǔn)確稱取0.65g面粉，,放在100ml燒杯中，先,以少量蒸餾水調(diào)成,糊狀，然后加入15ml,蒸餾水，混勻，于50恒溫保溫20min，時(shí)攪拌，使還原糖浸出，過濾，將濾液全部收集在25ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。,錐形瓶（0.5g面粉+10ml鹽酸+蒸餾水15ml）加熱,30min,檢驗(yàn)水解是否完成,（,I-KI,溶液）,冷卻至室溫后,中和并定容到,50ml,過濾取,10ml,于,100ml,容量瓶,取濾液又定容至刻度,（即為稀釋,50,倍）,三,.,總糖提取,四、樣品中含糖量的測(cè)定,試劑,空白,還原糖,總糖,樣品溶液/ml,0,1.0,1.0,蒸餾水/ml,2.0,1.0,1.0,水楊酸/ml,1.5,1.5,1.5,將各管溶液混合均勻后在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻至室溫，在向各管加入21.5ml蒸餾水，搖勻,在波長(zhǎng)為550nm處測(cè)定吸光度，并比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出糖的含量,結(jié)果處理,按下列公式計(jì)算樣品中還原糖與總糖的百分含量：,還原糖%=(m*100)/(M*1000),總糖%=（m*稀釋倍數(shù)*0.9*100）/(M*1000),式中：m根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得糖含量，mg,M所稱樣品質(zhì)量，g,祝實(shí)驗(yàn)成功！,The end,謝謝！,