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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,#,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,#,型糖尿病自身抗體檢測,型糖尿病自身抗體檢測,第1頁,糖尿病分型診療進(jìn)展,1979,年,WHO,提出了原發(fā)性臨床糖尿病分為胰島素依賴型和非胰島素依賴型，依賴型與非依賴型區(qū)分主要依據(jù)胰島素,細(xì)胞功效受損程度，臨床上是否依賴胰島素而言，并不反應(yīng)其發(fā)病本質(zhì),1997,年,WHO,提議取消依賴型與非依賴型，改為,1,、,2,型。,1,、,2,型區(qū)分要看病因是否由胰島,細(xì)胞本身免疫破壞造成，,1,型與,2,型是完全不一樣兩類疾病，但

2、,2,型非依賴型可發(fā)展成,1,型胰島素依賴型，成人遲緩進(jìn)展型就經(jīng)歷了這個過程。,型糖尿病自身抗體檢測,第2頁,WHO,（,1997,年）提議糖尿病分型方案,1,型糖尿病（,T1DM,）,胰島,細(xì)胞破壞造成胰島素絕對缺乏,：,A.,免疫型；,B.,特發(fā)型,2,型糖尿病（,T2DM,）,胰島素抵抗為主體胰島素相對缺乏，或胰島素分泌受損為主體胰島素抵抗,其它特殊類型糖尿病,妊娠期糖尿病,型糖尿病自身抗體檢測,第3頁,1,型糖尿病流行病學(xué),主要見于,15,歲以前兒童和未成年人；,亞洲及我國發(fā)病率相對較低（我國兒童中發(fā)病率為,0.59/10,萬每年，全國,T1DM,總數(shù)最少,200-400,萬）,各國,

3、1,型糖尿病較以前有逐年增加趨勢；,不少地域,1,型糖尿病發(fā)病率與季節(jié)相關(guān),型糖尿病自身抗體檢測,第4頁,1,型糖尿病發(fā)病機(jī)制,遺傳易感性 環(huán)境原因,感染、飲食、地理、氣候,細(xì)胞本身免疫損傷,細(xì)胞破壞、功效損害,胰島素分泌缺乏,型糖尿病自身抗體檢測,第5頁,1,型糖尿病病程,細(xì)胞量,1,型糖尿病病程,遺傳易感性,環(huán)境原因,胰島素正常,本身抗體陽性,血糖正常,胰島素,血糖正常,應(yīng)激血糖,胰島素,血糖,80%,細(xì)胞破壞,胰島素缺乏,臨床糖尿病,型糖尿病自身抗體檢測,第6頁,1,型糖尿病和,2,型糖尿病比較,T1DM T2DM,起病 急 進(jìn)行性,內(nèi)源性Ins 低或缺乏 正常，升高或降低,酮癥 常見

4、少見,發(fā)病年紀(jì) 各年紀(jì)段 絕大多數(shù)為成人,體重 通常非肥胖 肥胖或非肥胖,治療 Ins 飲食，口服降糖,藥，Ins,家族史 10-15%30%,孿生子發(fā)病一致率 30-50%70-90%,HLA相關(guān) HLA-DR,HLA-DQ 無關(guān),本身抗體 多見（85%)少見,型糖尿病自身抗體檢測,第7頁,1,型糖尿病和,2,型糖尿病區(qū)分,普通,30歲,起病方式,急，有者以酮癥酸中毒（,DKA,）發(fā)病,酷似非肥胖,T2DM,，多在病后,3,年內(nèi)發(fā)生,DKA,糖耐量減低,發(fā)病時嚴(yán)重,數(shù)年后顯著或嚴(yán)重,伴其它本身免疫病,常無,可有（,Addison,，惡性貧血，重癥肌無力等）,依賴,Ins,治療,發(fā)病后即依賴,

5、早期對飲食和/或口服降糖藥有效隨即依賴,胰島細(xì)胞功效,發(fā)病后即嚴(yán)重受損，血中,C,肽水平低或側(cè)不出,發(fā)病時還有殘余功效，數(shù)年后同急性型,細(xì)胞本身抗體,起病時急劇升高，發(fā)病后下降，數(shù)年后可陰轉(zhuǎn),低水平連續(xù)陽性，有些人超越,型糖尿病自身抗體檢測,第9頁,抗胰島細(xì)胞抗體,(ICA),1974,年,Bottazzo,采取間接免疫熒光法在胰島素依賴性糖尿病患者血清中首次檢測到抗胰島細(xì)胞抗體（,islet cell autoantibodies,ICA,）。,ICA,是針對胰島細(xì)胞內(nèi)各種抗原一組抗體,其靶抗原至今還未完全說明。,型糖尿病自身抗體檢測,第10頁,與糖尿病相關(guān)本身抗原不但在,細(xì)胞表示，這些抗原

6、組織分布可分為：,(1),細(xì)胞特異，如胰島素；,(2),胰島細(xì)胞特異；,(3),神經(jīng)內(nèi)分泌特異，如分子量為,65 kD,谷氨酸脫羧酶（,GAD65kD,）、,ICA512,、神經(jīng)節(jié)苷脂（,ganglioside,）、腦硫脂（,sulfatides,）等；,(4),較廣泛分布，如,HSP62,等。,當(dāng)前所知,ICA,主要抗原是谷氨酸脫羧酶（,GAD,）和酪氨酸磷酸酶（,IA2,）,型糖尿病自身抗體檢測,第11頁,檢測方法：,間接免疫熒光法,組織化學(xué)染色法,免疫沉淀化學(xué)法,ELISA,法,型糖尿病自身抗體檢測,第12頁,當(dāng)前,ICA,檢測方法主要是以猴胰腺為基質(zhì)間接免疫熒光法，但易受組織固定方法影

7、響。,抗胰島細(xì)胞抗體與胰腺內(nèi)分泌部位反應(yīng)，可見全部胰島細(xì)胞胞漿展現(xiàn)均質(zhì)到顆粒型熒光。,型糖尿病自身抗體檢測,第13頁,檢測方法標(biāo)化：,1983,年瑞典,Ludvigsson,為一名,1,型糖尿病新發(fā)病者做了血漿置換,這份血漿在青少年糖尿病基金會,(FDA),組織,ICAs,定標(biāo)試驗中,在參加這項工作全部試驗室檢測時均為,ICAs,陽性,于是用這份血樣定出了,ICAs,JDF,單位,并逐步成為國際上較為通用單位。,型糖尿病自身抗體檢測,第14頁,敏感度,81%(44%,100%),，特異度,96%(64%,100%),特異度較,GADA,和,IA2A,差,ICA,可作為早期預(yù)測指標(biāo),能早于,T1

8、DM,發(fā)病,8,年前被檢測出,高滴度,ICA,（大于,20-40JDF,單位）預(yù)示疾病進(jìn)展高危險性。,大個別,T1DM,病人,ICAs,在發(fā)病,2,年后消失，,ICA,連續(xù)陽性超出,23,年者，僅占,T1DM,10%,。,ICA,滴度連續(xù)高水平通常與,細(xì)胞損傷相關(guān)，,ICA,水平與,C,肽水平呈負(fù)相關(guān)。,ICA,和其它胰島本身抗體（如,GAD,或,IAA,）同時陽性對疾病更有診療價值，這類病人發(fā)生,T1DM,危險性是僅,ICA,陽性病人,3-5,倍。,型糖尿病自身抗體檢測,第15頁,ICA,在不一樣人群中陽性率,ICA,檢測對,1,型糖尿病有很好預(yù)測價值,人群 陽性率（,%,）,健康對照組 0

9、.1-0.2,T1DM患者直系親屬 2-5,新近診療T1DM患者 60-80,T2DM患者 5-7,型糖尿病自身抗體檢測,第16頁,谷氨酸脫羧酶抗體,(GAD-Ab),谷氨酸脫羧酶,氨基丁酸,（,GABA,）合成酶,表示于人腦及胰島中都有，主要位于細(xì)胞漿中,含有抑制生長抑素和胰高糖素分泌作用，并可調(diào)整胰島素分泌和胰島素原合成,型糖尿病自身抗體檢測,第17頁,1990,年，,Beakkeskov,首次證實,GAD,是,1,型糖尿病本身抗原,GAD,分子存在,65kD,和,67kD,兩種形式，二者在氨基酸水平上有,65%,同源性和,80%,相同性，免疫源性也基礎(chǔ)相同，當(dāng)前認(rèn)為,T1DM,中抗,GA

10、D65,抗體更常見,型糖尿病自身抗體檢測,第18頁,檢測方法：,免疫沉淀酶活性法,放射免疫法,ELISA,法,間接免疫熒光法,化學(xué)發(fā)光法,型糖尿病自身抗體檢測,第19頁,最常見,GAD-Ab,檢測方法是,ELISA,法和放免法。,放免法因為存在放射性污染當(dāng)前已逐步被,ELISA,法替換,ELISA,法采取親和素和生物素擴(kuò)充級聯(lián)反應(yīng)增強(qiáng)了檢測敏感性,型糖尿病自身抗體檢測,第20頁,GAD,檢測方法評價,GAD,本身抗體,:41,個試驗室測定了血清,GADab,其中多數(shù)利用重組人,GAD,RIA,法,其調(diào)整敏感性是,0,91%(,平均,81%),。,ELISA,法與,RIAs,法比較,有很好效果,

11、其調(diào)整敏感性,77%,雙管測定陽性或陰性一致性為,100%,。,在,125,例血清,RIA,法陽性率為,22.4%,，,ELISA,陽性率為,26.4%,，二者顯著相關(guān)（,P=0.025),。均 與,ICA,顯著相關(guān),P,值分別為,0,和,0.01,。說明,ELISA,法能夠替換,RIA,法做為,1,型糖尿病本身抗體篩選有效伎倆。,（,RIA,試劑,歐蒙企業(yè)；,ELISA,試劑,美國,BLOMERICA,企業(yè)）,型糖尿病自身抗體檢測,第21頁,GAD,在,T1DM,發(fā)病機(jī)理中作用,分子模擬,(molecular mimicry),機(jī)制致病學(xué)說：,病毒蛋白如柯薩奇,B,病毒,p2C,蛋白肽段,胰

12、島,細(xì)胞抗原分子谷氨酸脫羧酶,(GAD),個別肽段序列相同,前者,(,外源性蛋白多肽,),在誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫同時,亦可能誘發(fā)針對本身胰島,細(xì)胞攻擊，造成,細(xì)胞損傷,。,型糖尿病自身抗體檢測,第22頁,GAD-Ab,含有與,細(xì)胞遲緩損傷相關(guān)性好、出現(xiàn)早、連續(xù)時間長、年紀(jì)跨度大、陽性率高、檢測易標(biāo)準(zhǔn)化等特點，是當(dāng)前公認(rèn)診療,LADA,及預(yù)測胰島功效免疫學(xué)指標(biāo),GAD-Ab,可于發(fā)病前,10,年測出，且在此期間呈高低度連續(xù)存在，約,80%,新發(fā)患者血清中,GAD,陽性且水平較穩(wěn)定，病程,10,年以上仍存在高滴度,GAD,抗體。,GAD,臨床應(yīng)用,型糖尿病自身抗體檢測,第23頁,GAD,抗體在大多數(shù),

13、T1DM,患者中陽性，且陽性率不隨病程延長而下降。,試驗顯示新診療患兒中,GAD,抗體陽性率為,74%,，長病程者為,67%,，而他們,ICA,陽性率分別為,64%,和,14%,。,如在初發(fā),T1DM,患者中查到,GAD,抗體有利于排除,T2DM,，以助于,DM,診療分型并指導(dǎo)治療。,在,T1DM,一級親屬（高危人群），,33.3%,GADA,陽性者可能患,TIDM,。,TIDM,一級親屬中,GAD,抗體陽性率為,15%,左右，其中,1/3,在,618,個月后發(fā)展為,T1DM,。,GADA,在僵人綜合征（,SMS,）中陽性率為,100%,另外還見于與,T1DM,相關(guān)多腺體本身免疫綜合征。,型糖

14、尿病自身抗體檢測,第24頁,GAD,在不一樣人群中陽性率,人群 陽性率（,%,）,健康對照組 0.3-0.6,T1DM患者直系親屬 3-4,其它本身免疫性,內(nèi)分泌疾病患者 1-2,新近診療T1DM患者 55-85,T2DM患者 10-15,妊娠糖尿病 10,型糖尿病自身抗體檢測,第25頁,抗酪氨酸磷酸酶抗體,(ICA 512/IA 2ab),ICA 512/IA 2,是利用,1,型糖尿病患者或其前期病人血清免疫篩選胰島細(xì)胞,cDNA,文庫得到一個新,細(xì)胞本身抗原。,其氨基酸序列與,T,淋巴細(xì)胞蛋白酪氨酸磷酸酶,(PTP)CD45,相同，而堿基序列與人胰島素瘤克隆,cDNA(IA2),相近。,N

15、orthern,印跡示,ICA 512/IA 2,在胰島、腦和垂體中都有表示。,Rabin,等發(fā)覺,ICA512,實際上是,ICA,一個片段。,型糖尿病自身抗體檢測,第26頁,IA2A,存在于大約,65%,（,55%-75%,）新發(fā),T1DM,病人中，而正常對照人群中陽性率小于,1%,。,IA-2Ab,特異性強(qiáng),在不伴,1,型,DM,本身免疫病患者中較少發(fā)覺。,T1DM,患者中,IA2A,陽性率可能受各種原因影響，,15,歲以上,T1DM,者,IA2A,陽性率最高，隨增齡陽性率逐步下降，但其發(fā)生率與,DGA,抗體無關(guān)。,攜帶,IA-2,抗體個體在,5,歲時患,型糖尿病風(fēng)險是,34,歲時,11,

16、倍。,型糖尿病自身抗體檢測,第27頁,檢測方法,酶聯(lián)免疫吸附分析法,(ELISA),放射配體分析法,(RLA),35,S,標(biāo)識放射免疫沉淀法,型糖尿病自身抗體檢測,第28頁,抗胰島素本身抗體,(IAA),IAA,識別抗原表位是胰島素,A,鏈,A8-A13,殘基和,B,鏈,B1-B3,殘基,IAA,與逆轉(zhuǎn)錄病毒,p73,蛋白間存在交叉反應(yīng)，提醒內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒感染與,T1DM,發(fā)生相關(guān),IAA,與胰島素治療誘導(dǎo)抗胰島素抗體相同,型糖尿病自身抗體檢測,第29頁,IAA,在新診療,T1DM,患者中陽性率為,40%,，多見于兒童（,4,歲），在成人中陽性率僅為,4%,，在,5,歲以前發(fā)生,IAA,陽性率達(dá),50%,，,IAA,滴度隨增齡而降,IAA,與,ICA,相關(guān)，在高危人群中約,40%ICA,陽性者,IAA,陽性。,IAA,水平與,T1DM,發(fā)生速度呈相關(guān)性，高滴度,IAA,者發(fā)病較快,型糖尿病自身抗體檢測,第30頁,檢測方法,放免法；,ELISA,法,不一樣試驗室及不一樣方法測定,IAAs,結(jié)果一致性顯著低于,IA2A,和,GADAs,。,型糖尿病自身抗體檢測,第31頁,本身抗體對,T1