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1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,*,*,膠體金組研發(fā)(yn f)思路,第一頁，共18頁。,明確對(duì)象,檢測(cè)方法(fngf)-膠體金法,膠體金的制備,標(biāo)金過程,試紙條的組成,性能評(píng)估,投入市場(chǎng),目錄(ml),第二頁，共18頁。,1,明確(mngqu)對(duì)象,第三頁，共18頁。,豬瘟,犬細(xì)小,犬瘟,第四頁，共1

2、8頁。,豬瘟病毒是豬瘟的病原,主要通過直接接觸，或由于接觸污染的媒介物而發(fā)病。,臨床表現(xiàn)：,最急性型：發(fā)病急，高熱稽留(jli)，痙攣，抽搐，皮膚和可視粘膜發(fā)紺，有出血點(diǎn)，很快死亡。,急性型和亞急性型：高熱，精神沉郁，食欲減退，初便秘，后腹瀉，公豬包皮積液，離心端有出血點(diǎn)或紅斑不褪色，少數(shù)神經(jīng)癥狀，死亡率高。,慢性型：食欲時(shí)好時(shí)壞，體溫時(shí)高時(shí)低，便秘與腹瀉交替進(jìn)行。耳尖、尾根和四肢皮膚經(jīng)常發(fā)紫壞死，甚至干脫,消瘦，全身衰竭，后肢麻痹，行走不穩(wěn)或不能立。,繁殖障礙型（母豬帶毒綜合癥）：早中期感染，母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)、木乃伊胎等；孕后期感染，外表正常，仔豬也終身帶毒，免疫耐受（不產(chǎn)生免答）。,豬瘟(z

3、h wn),第五頁，共18頁。,膠體金的制備(zhbi),從3個(gè)重復(fù)批次的試紙條中分別隨機(jī)抽取一定數(shù)量試紙條，分別測(cè)試陰性檢測(cè)液和陽性檢測(cè)液，考察每一批次試紙條的線條是否均一、顏色深淺是否相當(dāng)、檢測(cè)結(jié)果是否一致。,急性型和亞急性型：高熱，精神沉郁，食欲減退，初便秘，后腹瀉，公豬包皮積液，離心端有出血點(diǎn)或紅斑不褪色，少數(shù)神經(jīng)癥狀，死亡率高。,將制作好的試紙條放入密封袋內(nèi)，內(nèi)置干燥劑片，置于45C烘箱內(nèi)，分別于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，測(cè)試試紙條的穩(wěn)定性。,采用化學(xué)還原法制備膠體金時(shí)，通過改變反應(yīng)體系中氯金酸與還原劑的比例（增加(zngji)或減少還原劑的量）可

4、得到所需不同直徑的金顆粒。,不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存、運(yùn)輸，在室溫下可長(zhǎng)期保存，不需冷藏。,也需要在試驗(yàn)中進(jìn)行梯度試驗(yàn),反復(fù)比較不同標(biāo)記量的標(biāo)記物在破壞試驗(yàn)中的穩(wěn)定性,確定最佳的標(biāo)記量。,pH：在pH接近和稍高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí),膠體金蛋白質(zhì)的吸附力最強(qiáng);pH過高過低都不利于兩者的結(jié)合,因此標(biāo)記時(shí)選擇精密的酸堿度測(cè)定儀器或者試紙條,采用不同方法重復(fù)校正,并進(jìn)行梯度試驗(yàn)找到最佳的標(biāo)記pH。,不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存、運(yùn)輸，在室溫下可長(zhǎng)期保存，不需冷藏。,孕后期感染，外表正常，仔豬也終身帶毒，免疫耐受（不產(chǎn)生免答）。,蛋白：過多蛋白質(zhì)標(biāo)記,造成浪費(fèi)的同時(shí)引起試紙的拖帶現(xiàn)象;過少蛋白質(zhì)標(biāo)記,

5、導(dǎo)致膠體金標(biāo)記不完全,從而降低試紙的靈敏度及假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)(chxin)。,不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存、運(yùn)輸，在室溫下可長(zhǎng)期保存，不需冷藏。,操作快速、短時(shí)間獲得檢測(cè)結(jié)果，一般1015 分鐘即可得出結(jié)論，便于大批量篩查，取量少，檢測(cè)成本均較低，無需特殊儀器。,膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。,穩(wěn)定性測(cè)試(csh)(加速老化試驗(yàn)）,適用范圍廣泛，檢測(cè)標(biāo)本種類多，可用于查血、尿液或糞便，因而適合各種檢查。,2,檢測(cè)(jin c)方法-膠體金法,第六頁，共18頁。,不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保,存,、運(yùn)輸,，,在室溫下可長(zhǎng)期,保,存，不需冷藏,。,1,操作簡(jiǎn)便、易于肉眼觀察

6、結(jié)果，不需經(jīng)過特殊復(fù)雜培訓(xùn),，操作者安全，對(duì)環(huán)境無污染。,2,操作快速、短時(shí)間獲得檢測(cè)結(jié)果，一般1015 分鐘即可得出結(jié)論，便于大批量篩查,，取量少，檢測(cè)成本均較低，無需特殊儀器。,3,適用范圍廣泛，檢測(cè)標(biāo)本種類多，可用于查血、尿液或糞便，因而適合各種檢查,。特異性較強(qiáng)、結(jié)果有可重復(fù)性。,4,第七頁，共18頁。,3,膠體金的制備(zhbi),第八頁，共18頁。,膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。因此對(duì)每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無(yu w)凝集顆粒等。,采用化學(xué)還原法制備膠體金時(shí)，通過改變反應(yīng)體系中氯金酸與還原劑的比例（增加(z

7、ngji)或減少還原劑的量）可得到所需不同直徑的金顆粒。,要還原材料,：,氯金酸,（,HAuCl4）,所,用還原劑,：,檸檬酸鈉,還原制備金溶膠,第九頁，共18頁。,標(biāo)金(biojn)過程,4,第十頁，共18頁。,復(fù)溶,PH,蛋白,封閉液,離心,調(diào)試,膠體金的標(biāo)記,第十一頁，共18頁。,pH：在pH接近和稍高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí),膠體金蛋白質(zhì)的吸附力最強(qiáng);pH過高過低都不利于兩者的結(jié)合,因此標(biāo)記時(shí)選擇精密的酸堿度測(cè)定儀器或者試紙條,采用不同方法重復(fù)校正,并進(jìn)行梯度試驗(yàn)找到最佳的標(biāo)記pH。,蛋白：過多蛋白質(zhì)標(biāo)記,造成浪費(fèi)的同時(shí)引起試紙的拖帶現(xiàn)象;過少蛋白質(zhì)標(biāo)記,導(dǎo)致膠體金標(biāo)記不完全,從而降低試紙的

8、靈敏度及假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)(chxin)。也需要在試驗(yàn)中進(jìn)行梯度試驗(yàn),反復(fù)比較不同標(biāo)記量的標(biāo)記物在破壞試驗(yàn)中的穩(wěn)定性,確定最佳的標(biāo)記量。,第十二頁，共18頁。,5,試紙條(zh tio)的組成,第十三頁，共18頁。,檢測(cè)線,質(zhì)檢線,吸收墊,樣品墊,硝酸纖維素膜,連接墊,（膠體金墊）,背襯,（底板）,第十四頁，共18頁。,特異性較強(qiáng)、結(jié)果有可重復(fù)性。,不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存、運(yùn)輸，在室溫下可長(zhǎng)期保存，不需冷藏。,豬瘟病毒是豬瘟的病原,主要通過直接接觸，或由于接觸污染的媒介物而發(fā)病。,蛋白：過多蛋白質(zhì)標(biāo)記,造成浪費(fèi)的同時(shí)引起試紙的拖帶現(xiàn)象;過少蛋白質(zhì)標(biāo)記,導(dǎo)致膠體金標(biāo)記不完全,從而降低試紙的靈

9、敏度及假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)(chxin)。,試紙條(zh tio)的組成,特異性檢驗(yàn)是正確認(rèn)識(shí)試劑盒對(duì)結(jié)構(gòu)類似物抗干擾能力的指標(biāo)。,將制作好的試紙條放入密封袋內(nèi)，內(nèi)置干燥劑片，置于45C烘箱內(nèi)，分別于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，測(cè)試試紙條的穩(wěn)定性。,操作快速、短時(shí)間獲得檢測(cè)結(jié)果，一般1015 分鐘即可得出結(jié)論，便于大批量篩查，取量少，檢測(cè)成本均較低，無需特殊儀器。,檢測(cè)方法(fngf)-膠體金法,最急性型：發(fā)病急，高熱稽留(jli)，痙攣，抽搐，皮膚和可視粘膜發(fā)紺，有出血點(diǎn)，很快死亡。,膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。,6,性能(xngnn

10、g)評(píng)估,第十五頁，共18頁。,性能(xngnng)評(píng)估,從3個(gè)重復(fù)批次的試紙條中分別隨機(jī)抽取一定數(shù)量試紙條，分別測(cè)試陰性檢測(cè)液和陽性檢測(cè)液，考察每一批次試紙條的線條是否均一、顏色深淺是否相當(dāng)、檢測(cè)結(jié)果是否一致。,將制作好的試紙條放入密封袋內(nèi)，內(nèi)置干燥劑片，置于45C烘箱內(nèi)，分別于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，測(cè)試試紙條的穩(wěn)定性。,重復(fù)性測(cè)試(csh),穩(wěn)定性測(cè)試(csh)(加速老化試驗(yàn)）,特異性測(cè)試,特異性檢驗(yàn)是正確認(rèn)識(shí)試劑盒對(duì)結(jié)構(gòu)類似物抗干擾能力的指標(biāo)。,第十六頁，共18頁。,7,投入(tur)市場(chǎng),第十七頁，共18頁。,謝謝(xi xie)聆聽！,THANK YOU VERY,MUCH!,第十八頁，共18頁。,