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1、生物芯片在結(jié)核分支桿菌抗體檢測中的應用 生物芯片在結(jié)核分支桿菌抗體檢測中的應用 [摘要] 目的 探討利用生物芯片技術(shù)對結(jié)核分支桿菌抗體進行快速檢測。方法 利用物芯片標本對2 000例確診為結(jié)核的患者血液進行LAM、16- kDa、38- kDa信號的檢測及結(jié)果分析。結(jié)果 在2 000例結(jié)核患者中，結(jié)核LAM、16- kDa、38- kDa指標的檢出率分別為47.2%（944/2000）、18.2%（364/2000）、23.2%（464/2000）。結(jié)論 生物芯片可用作結(jié)核病有效的臨床診斷手段。 [關(guān)鍵詞] 生物芯片；結(jié)核；抗體；檢測

2、 [中圖分類號] R450 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2013）08（a）-0183-02 隨著基因技術(shù)的快速發(fā)展，生物芯片在遺傳病及蛋白檢測中得到了廣泛的應用。20世紀90年代人們采用分子生物學的原理對結(jié)核等進行了相關(guān)的研究，并將其做為結(jié)核病在細菌學上臨床診斷的手段之一，相關(guān)的研究也不斷的深入。當前，人們研究中使用的結(jié)核抗原主要有三種，包括：①結(jié)核致病細菌的細胞壁蛋白，常用的有38- kDa和16- kDa等蛋白；②結(jié)核細菌細胞壁的脂多糖抗原，產(chǎn)用的有LAM和TBGL等蛋白；③結(jié)核細菌的菌體。 我國現(xiàn)階段的耐多藥性結(jié)核病的臨床發(fā)病率呈逐年增加的

3、事態(tài)，結(jié)核病的早期診斷就顯得尤為重要。為探討利用生物芯片技術(shù)對結(jié)核分支桿菌抗體進行快速檢測，該研究以病原體蛋白分子為模型對結(jié)合LAM、38- kDa及16- kDa進行檢測和分析。在檢測過程中把抗原點在芯片的膜表面，并將其與患者血清樣本進行雜交，以CCD 原理對患者樣本進行檢測。該研究就2009年1月―2012年12月間收治的2 000例結(jié)核患者的血清樣本進行了測試，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。 1 實驗部分 1.1 患者樣品來源 實驗收集了確診的結(jié)核病患者2000例的血清樣本，并用50例醫(yī)院健康體檢的血清樣本作為對照。對受試著進行空腹取血，將抽取的血液以1500 轉(zhuǎn)的速度進行離

4、心后取上清液，并進行相關(guān)的樣本的檢測。 1.2 測試方法 將蛋白與樣本雜交后對樣品進行編號處理，在蛋白芯片的盒窗口中加入4 滴試劑A將芯片膜濕潤。取100 μL樣本血清，搖勻后加入到芯片窗口中，使樣本血清滲透到蛋白芯片中，先后加入6滴試劑B、10滴試劑C、6滴試劑D。待反應完全后，放入儀器中進行檢測。 2 結(jié)果 2.1 結(jié)核指標檢出率比較 表1 為2000例患者的結(jié)核LAM、16- kDa、38- kDa指標的檢出率，從表1中可以看出LAM檢出率為47.2%（944/2000），16- kDa 檢出率為18.2%（364/2000），38- kDa 的檢

5、出率為23.2%（464/2000），蛋白檢出率順序依此為LAM、38- kDa及16- kDa。其中結(jié)核的陽性率為31.2%（624/2000）。 對于50例健康體檢的對照組患者，LAM指標陽性的有5例，16- kDa及38- kDa指標均稱陰性。 2.2 患者各年齡段陽性變化 依據(jù)結(jié)核患者的年齡，將其分為1～29歲、30～59歲及60歲以上年齡組。圖1為患者各年齡段陽性的發(fā)生率，從圖1中可以看出60歲以上患者的陽性率最高，其次為1～29歲年齡組。 3 討論 利用生物蛋白芯片對結(jié)核患者的蛋白制備進行檢測，需要將幾個蛋白指標進行聯(lián)合檢測，如可將LAM、3

6、8- KDa 及16- KDa等蛋白 聯(lián)合，聯(lián)合檢測有利于結(jié)核病陽性蛋白檢測的準確率[1-3]。該研究以LAM蛋白及2 種重組的結(jié)核分枝桿菌蛋白抗原對患者進行檢測，其結(jié)果并不一致，這主要是由于結(jié)核分枝桿菌抗原的特性造成的，分支桿菌的抗原種類多且十分的繁雜，在人體中的表達也各不一樣，其會依據(jù)患者免疫及臨床狀況而表現(xiàn)不同。相當一部分的分枝桿菌抗原無法表達，就會在測試中檢測不到其抗體。有一部分患者抗體的含量較高，有的則是抗體含量較低，還有一些受到免疫抗體、潛伏的結(jié)核以及環(huán)境中的細菌影響而發(fā)生變異。這就要求我們在檢測結(jié)核時，需要聯(lián)合幾種抗原的蛋白芯片檢測技術(shù)，這樣可以在確保檢測蛋白特異性的同時提升檢測

7、的準確及敏捷。該文中，患者LAM檢出率為47.2%（944/2000），16-kDa檢出率為18.2%（364/2000），38- kDa 的檢出率為23.2%（464/2000），蛋白檢出率順序依此為LAM、38- kDa及16- kDa。而其中結(jié)核的陽性率為31.2%（624/2000）。這說明對于三種蛋白抗原聯(lián)合檢測技術(shù)對結(jié)核病的臨床診斷有很好的價值。 在患者各年齡段陽性率的比較中，可以看出陽性發(fā)生率最高的是60歲以上的老年人組，其次為1～29歲組。其結(jié)果表明結(jié)核病的發(fā)生率可能與患者的免疫能力及勞逸狀況有密切的關(guān)系[4-6]。在治療過程中需要對該組患者進行適時的復查，做到盡早發(fā)現(xiàn)

8、、治療的目的。 研究表明，LAM、38- kDa及16- kDa蛋白抗原跟結(jié)核患者的感染狀況呈線性關(guān)系。所以，利用生物芯片技術(shù)可以對結(jié)核的LAM、38- kDa及16- kDa蛋白抗體進行適時的動態(tài)檢測，可用于結(jié)核病的臨床診斷及治療效果評價體系。 [參考文獻] 【1】 Yon Reyn C F， Vuola J M. New vaccines for the prevention of tuberculosis[J]. Clin Infect Dis， 2002， 35： 465- 474. 【2】 Brandt L， Feino Cunha J， Weinre

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