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1、 第三章第三章 核核 酸化學酸化學 (Nucleic Acid Chemistry) 第一節(jié)第一節(jié) 核酸的重要性核酸的重要性 (Importantance of Nucleic Acids)What are nucleic acids? Nucleic acids are a kind of very important biomacromolecule.They exist in all organism (including virus). They play very important role during organism living activate such as: grow

2、th development reproducing heredity variation.So it can also say that there is no life without nucleic Acids. 核酸化學研究史： （1） 1869年Miescher, 博士論文工作中測定淋巴細胞蛋白質組成時, 發(fā)現(xiàn)了不溶于稀酸和鹽溶液的沉淀物, 并在所有細胞的核里都找到了此物質, 故命名“核質(Nuclein)”,即今天我們所說的脫氧核糖核蛋白，其中脫氧核糖核酸的含量為30%。 （2） 1889 年Altman等人又從酵母和動物的細胞核中得到了不含蛋白質的核酸，并建議將“ 核質”改名為“

3、 核酸”, 因為已經(jīng)認識到“ 核質” 乃“ 核酸” 與蛋白質的復合體。 （3）1944年,O.T.Avery 等人通過細菌轉化實驗證明核酸是遺傳物質。 目前，核酸的的研究已成為生物學研究中最活躍的一個領域，是最重要的生物大分子。 第二節(jié) 核酸的分類及其在細胞內的分布 （Classification and distribution of nucleic acid） 一、核酸的分類一、核酸的分類 Nucleic acids are grouped into two types nucleic acid ：（一）（一） 脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid , DN

4、A)（二）（二） 核糖核酸（核糖核酸（ribonucleic acid , RNA)1、轉移RNA（transfer RNA , tRNA) 2、核糖體RNA（ribosomal RNA , rRNA)3、信使RNA（mesenger RNA , mRNA)4、特殊功能的、特殊功能的RNA:Small nuclear RNA , snRNA Small nucleoar RNA , snoRNASmall cytoplasmic RNA , scRNAAntisense RNARibozymeRNase P 二、核酸的分布二、核酸的分布 In eukaryotes，DNA mainly exi

5、st in nucleus（more than 98%）；）； mitochondria and chloroplasts respectively have their own DNA. In prokaryotes，DNA exist in nucleoid（擬核區(qū)）（擬核區(qū)）. Every prokaryotic cell only contain one chromsome（染色質），（染色質），which is double-strand circular DNA molecule. In addition，It also contain plasmid DNA（質粒（質粒DNA ）

6、 Viruses consit nucleic acid（DNA or RNA）coated with protein（called capsid，病毒衣殼），病毒衣殼）. RNA mainly exist in the cytosol（90%），），the other 10% in nucleus.三、核酸的功能（一）DNA是主要的遺傳物質1944 ， O. Avery 肺炎雙球菌轉化實驗1952 ， A.D Hershey 和M. Chase 噬菌體感染實驗（二）（二）RNA功能的多樣性功能的多樣性1、參與蛋白質的合成 2、RNA的轉錄后加工與修飾3、參與基因表達的調控4、生物催化作用第三

7、節(jié)第三節(jié) 核酸的結構核酸的結構核 酸（nucleic acid)核苷酸(nucleotide) 磷酸 (phosphoric acid)核苷(nucleoside) 戊糖(pentose)堿 基(base)一、核酸的化學組成一、核酸的化學組成 兩類核酸的基本化學組成RNA： D-核糖， A、G、C、U堿基DNA： D-2-脫氧核糖， A、G、C、T堿基 （一）（一） 堿基堿基 1.嘧啶堿：尿嘧啶 胞嘧啶 胸腺嘧啶2. 嘌呤堿： 腺嘌呤 鳥嘌呤 嘌呤衍生物 ： 3. 核酸中的修飾堿基： 100余種，多數(shù)是甲基化的產(chǎn)物Structure of T and C Structure of A and

8、G （二）（二） 核苷與脫氧核苷核苷與脫氧核苷 嘧啶堿： C1 N1，嘌呤堿： C1 N9。核酸中的核苷與脫氧核苷均為-型堿基平面與核糖平面互相垂直2、核酸中的稀有核苷、核酸中的稀有核苷 稀有堿基稀有糖苷鍵：假尿嘧啶核苷（）P481甲基化核糖 （三）（三） 核苷酸核苷酸核苷中戊糖C2 、C3、C5羥基被磷酸酯化 Cytosine, Cytidine, Cytidine monophosphate CMP Uracil, Uridine, Uridine monophosphate UMPThymine, Thymidine, Thymidine monophosphate AMPAdenine

9、, Adenosine, Adenosine monophosphate AMPGuanine, Guanosine, Guanosine monophosphate GMP2、 細胞內的游離核苷酸及其衍生物細胞內的游離核苷酸及其衍生物核苷5-多磷酸化合物ATP、GTP、CTP、在能量代謝和物質代謝及調控中起重要作用。環(huán)核苷酸3,5-cAMP， 3,5-cGMP信號分子，cAMP調節(jié)細胞的糖代謝、脂代謝。一級結構：脫氧核苷酸分子間連接方式及排列順序。二級結構：DNA的兩條多聚核苷酸鏈間通過氫 鍵形成的雙螺旋結構。三級結構：DNA雙鏈進一步折疊卷曲形成的構象。（一）（一） DNA的一級結構的一級

10、結構蛇毒磷酸二酯酶水解DNA（RNA）得5-核苷酸牛脾磷酸二酯酶水解DNA（RNA）得3-核苷酸P482 圖13-1磷酸二酯酶對核酸的水解作用DNA是dAMP、dGMP、dCMP、dTMP通過3、5-磷酸二酯鍵連接起來的線形或環(huán)形多聚體。 P483 圖 13-2DNA中多核苷酸的一個片段及縮寫符號 寫法：53：5-pApCpTpG-3，或5ACTG3 （二）（二） DNA的二級結構的二級結構1953年，Watson和Crick根據(jù)Chargaff 規(guī)律和DNA Na鹽纖維的X光衍射分析提出了DNA的雙螺旋結構模型。 Photo by A.C. Barrington Brown, courtes

11、y of Cold Spring Harbor Laboratory Archives.1962 Francis Crick, James Watson, and Maurice Wilkins receive the Nobel Prize fordetermining the molecular structure of DNA.Chargaff 規(guī)律規(guī)律 1950年年a. 所有生物的DNA中，A=T，G=C 且A+G=C+T。b. DNA的堿基組成具有種的特異性。c. DNA堿基組成沒有組織和器官的特異性。d. 年齡、營養(yǎng)狀況、環(huán)境等因素不影響DNA的堿基組成。Structure of

12、DNA Double Helix 1、 Watson-Crick雙螺旋結構模型雙螺旋結構模型(B-DNA)（1）DNA分子為兩條多核苷酸鏈以相同的螺旋軸為中心，盤繞成右旋、反向平行的雙螺旋.（2）磷酸和戊糖組成的骨架位于螺旋外側，堿基 位于螺旋內側，并且按照堿基互補的原則，堿基之間通過氫鍵形成堿基對，A-T間形成二個氫鍵、G-C間形成三個氫鍵.（3）雙螺旋的直徑是2nm，每10個堿基對旋轉一周，螺距為3.4nm，所有的堿基平面都與中心軸垂直.（4）維持雙螺旋的力是堿基堆積力和氫鍵.3.4nm（1.2nm, 0.85 nm）（0.6nm, 0.75 nm）Double helix Right-h

13、anded10 base pairs/turn 3.4 nm /turnDiameter: ca. 2.0 nm 磷酸與脫氧核糖彼此通過3、5-磷酸二酯鍵相連接，構成DNA分子的骨架。磷酸與脫氧核糖在雙螺旋外側，嘌呤與嘧啶堿位于雙螺旋的內側。堿基平面與縱軸垂直，糖環(huán)平面與縱軸平行 兩條核苷酸鏈之間依靠堿基間的氫鏈結合在一起。螺圈之間主要靠堿基平面間的堆積力維持 每圈螺旋10.4nt ，堿基堆積距0.34nm，雙螺旋平均直徑2nm，大溝：寬1.2nm ，深0.85nm，小溝 ：寬0.6nm，深0.75nm2、穩(wěn)定雙螺旋結構的因素、穩(wěn)定雙螺旋結構的因素堿基堆積力形成疏水環(huán)境（主要因素） 。堿基配對

14、的氫鍵。GC含量越多，越穩(wěn)定。磷酸基上的負電荷與介質中的陽離子或組蛋白的正離子之間形成離子鍵，中和了磷酸基上的負電荷間的斥力，有助于DNA穩(wěn)定。堿基處于雙螺旋內部的疏水環(huán)境中，可免受水溶性活性小分子的攻擊。3、 DNA二級結構的多型性二級結構的多型性P489表13-6 A-、B-、Z-DNA的比較相對濕度92%：BDNA相對濕度75%：ADNA。 （1） BDNA：典型的：典型的Watson-Crick雙螺旋雙螺旋DNA右手雙螺旋每圈螺旋10.4個堿基對螺距：3.32nm（2） A-DNA右手雙螺旋，外形粗短。RNA-RNA、RNA-DNA雜交分子具有這種結構。（3）Z-DNA左手螺旋，外形細

15、長。天然B-DNA的局部區(qū)域可以形成Z-DNA。（4） 三股螺旋三股螺旋DNA K. Hoogsteen 1963通常是一條同型寡核苷酸與寡嘧啶核苷酸-寡嘌呤核苷酸雙螺旋的大溝結合：oligo(Py) : oligo(Pu)oligo(Py/Pu)第一股是寡嘧啶，中間是寡嘌呤，第三股可以是寡嘧第一股是寡嘧啶，中間是寡嘌呤，第三股可以是寡嘧啶或寡嘌呤啶或寡嘌呤T= A : A , CG ： C+T = A : T CG ： G第三股與寡嘌呤之間同向平行，并按第三股與寡嘌呤之間同向平行，并按Hoogsteen配對配對DNA三股螺旋結構常出現(xiàn)在DNA復制、轉錄、重組的起始位點或調節(jié)位點，如啟動子區(qū)。

16、第三股鏈的存在可能使一些調控蛋白或RNA聚合酶等難以與該區(qū)段結合，從而阻遏有關遺傳信息的表達。(三）三） DNA的三級結構的三級結構DNA在雙螺旋的基礎上通過扭曲和折疊形成的構象超螺旋是DNA三級結構的主要形式1、 環(huán)狀環(huán)狀DNA的三種典型構象的三種典型構象 P491 圖圖13-12（1）、）、 松弛環(huán)形松弛環(huán)形DNA線形DNA直接環(huán)化（2）、）、 解鏈環(huán)形解鏈環(huán)形DNA線形DNA擰松后再環(huán)化（3）、）、 正超螺旋與負超螺旋正超螺旋與負超螺旋DNA2、 三種環(huán)形三種環(huán)形DNA的拓撲學特性的拓撲學特性連環(huán)數(shù)（連環(huán)數(shù)（linking number , L）DNA雙螺旋中，一條鏈以右手螺旋繞另一條鏈

17、纏繞的次數(shù)扭轉數(shù)（扭轉數(shù)（twisting number , T）DNA分子中的Watson-Crick螺旋數(shù)目，以T表示超螺旋數(shù)（纏繞數(shù)超螺旋數(shù)（纏繞數(shù) , writhing number , W）連環(huán)數(shù)（L）纏繞數(shù)（T）扭曲數(shù)W松馳環(huán)25250解鏈環(huán)23230超螺旋2325-2L=T+W負超螺旋DNA是由于兩條鏈的纏繞不足引起（L），很易解鏈，易于參加DNA的復制、重組和轉錄等3、真核生物染色體的結構、真核生物染色體的結構染色質、染色體常染色質、異染色質永久性異染色質、功能性異染色質核小體（nucleosome):146bp,組蛋白：H2A、H2B、H3、H4P495 圖13-17真核生物

18、染色體真核生物染色體DNA的組裝層次的組裝層次MOV：MCB4.0three dimensional packing of nuclear chromosomes（一）（一） RNA的一級結構的一級結構 P483AMP、GMP、CMP、UMP通過3、5磷酸二酯鍵形成的線形多聚體。 組成RNA的戊糖是核糖 RNA的U替代DNA中的T，此外，RNA中常有一些稀有堿基。 天然RNA分子都是單鏈線形分子，只有部分區(qū)域是A-型雙螺旋結構。Transfer RNA Small polynucleotide chains - 73 to 94 residues each Several bases usua

19、lly methylatedmethylated Each a.a. has at least one unique tRNA which carries the a.a. to the ribosome 3-terminal sequence is always CCA-a.a. Aminoacyl tRNA molecules are the substrates of protein synthesis假尿嘧啶核苷假尿嘧啶核苷二氫尿嘧啶核苷二氫尿嘧啶核苷胸腺嘧啶核糖核苷胸腺嘧啶核糖核苷4-硫尿核苷硫尿核苷次黃嘌呤核苷次黃嘌呤核苷1-甲基鳥苷甲基鳥苷N-6-異戊烷腺苷異戊烷腺苷二級結構：二

20、級結構： 三葉草型三葉草型氨基酸臂二氫尿嘧啶環(huán)反密碼環(huán)額外環(huán)TC環(huán)（假尿嘧啶環(huán)）三級結構：三級結構： 倒倒L形（酵母形（酵母 tRNAphe)tRNA的功能：轉運氨基酸識別密碼子參與翻譯起始參與DNA的反轉錄參與基因表達調控（三）（三） mRNA的結構的結構原核：多順反子（原核：多順反子（polycistronic mRNA)真核：單順反子，斷裂基因（真核：單順反子，斷裂基因（splited gene)Eukaryotic mRNA DNA is transcribed to produce heterogeneous nuclear RNA （hnRNA核內不均一RNA）mixed intr

21、ons and exons with poly Aintron - intervening sequence exon - coding sequence poly A tail - stability? Splicing produces final mRNA without introns 5-帽子：帽子：m7G 5 -ppp5-Nm（ Nm ）p-O型： m7G 5 -ppp5-Np-I： m7G 5 -ppp5-Nmp-Np-II: m7G 5 -ppp5-Nmp -Nmp -Np-甲基鳥苷5，5-三磷酸（四）（四） rRNA的結構的結構細菌： 16S rRNA 、5S rRNA、23

22、S rRNA組成30S轉錄單位真核：18SrRNA、 5.8S rRNA，28S rRNA組成45S的轉錄單位，5S rRNA單獨轉錄。 Ribosomes are about 2/3 RNA, 1/3 protein rRNA serves as a scaffold for ribosomal proteins 23S rRNA in E. coli is the peptidyl transferase! 大腸桿菌 5S rRNA 結構P498 圖13-20 16S、5S rRNA的結構 rRNA的功能：的功能：組成核糖體催化肽鍵形成的轉移酶活性存在于 23SrRNA上參與tRNA與mR

23、NA的結合一、核酸的水解一、核酸的水解 （一）酸水解對酸的敏感性：糖苷鍵磷酸酯鍵 嘌呤糖苷鍵嘧啶糖苷鍵利用酸水解可以研究核酸的堿基組成（二）（二） 堿水解堿水解RNA的磷酸酯鍵對堿敏感室溫，0.31mol/L KOH，24h，可將RNA完全水解。DNA抗堿水解生理意義：DNA更穩(wěn)定 ，遺傳信息。RNA是DNA的信使，完成任務后迅速降解。（三）（三） 酶水解酶水解非特異的磷酸二酯酶：蛇毒磷酸二酯酶水解DNA（RNA）得5-核苷酸牛脾磷酸二酯酶水解DNA（RNA）得3-核苷酸特異的磷酸二酯酶：核酸酶1、核酸酶的分類、核酸酶的分類底物專一性：底物專一性：核糖核酸酶 RNase 脫氧核糖核酸酶 DNa

24、se作用方式：作用方式：核 酸 外 切 酶 （ e x o n u c l e a s e ) 、 核 酸 內 切 酶 (endonuclease)單鏈核酸酶、雙鏈核酸酶、雜鏈核酸酶磷酸二酯鍵的斷裂方式：磷酸二酯鍵的斷裂方式：5-（寡）核苷酸3-（寡）核苷酸 2、RNAaseRNase H作用于DNA-RNA中的RNA鏈牛胰核糖核酸酶（pancreatic ribonuclease) , RNase I最適pH ：7.0-8.2產(chǎn)物：以3-嘧啶核苷酸結尾的寡核苷酸，高度專一的內切酶RNase T1耐熱、耐酸產(chǎn)物：以3-鳥苷酸結尾的寡核苷酸，專一性更高RNase T2產(chǎn)物：以3-腺苷酸結尾的寡核

25、苷酸3、DNase核酸酶核酸酶S1作用于單鏈DNA部分牛胰核糖核酸酶，牛胰核糖核酸酶，DNase I切斷雙鏈或單鏈DNA產(chǎn)物：以5-磷酸為末端的寡核苷酸5、DNA限制性內切酶限制性內切酶(Restriction Enzymes) 在細菌中發(fā)現(xiàn)，主要降解外源在細菌中發(fā)現(xiàn)，主要降解外源DNA。具有。具有嚴格的堿基序列專一性嚴格的堿基序列專一性 Bacteria have learned to restrict the possibility of attack from foreign DNA by means of restriction enzymes Type II and III rest

26、riction enzymes cleave DNA chains at selected sites Enzymes may recognize 4, 6 or more bases in selecting sites for cleavage An enzyme that recognizes a 6-base sequence is a six-cutter二、二、 核酸的酸堿性質核酸的酸堿性質 磷酸和堿基均能發(fā)生兩性解離。DNA等電點 44.5RNA 等電點 22.5三、三、 核酸的紫外吸收核酸的紫外吸收堿基、核苷、核苷酸和核酸在240290nm的紫外波段有強烈的光吸收，max=26

27、0nm1、 鑒定純度鑒定純度純DNA的A260/A280應為1.8（1.65-1.85）純RNA的A260/A280應為2.0。若溶液中含有雜蛋白或苯酚，則A260/A280比值明顯降低。2、 含量計算含量計算 A值為1相當于：50ug/mL雙螺旋DNA 或：40ug/mL單鏈DNA（或RNA） 或：20ug/mL寡核苷酸四、四、 核酸的變性、復性及雜交核酸的變性、復性及雜交(Denaturation、Renaturation and Hybridization)(一一) DNA 變性變性(Denaturation of DNA)核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，不涉及共價鍵斷裂。Denatu

28、ration of DNADouble-stranded DNAA-T rich regions denature firstCooperative unwinding of the DNA strandsStrand separationand formation ofsingle-stranded random coilsExtremes in pH or high temperature 變性因素 ：熱變性 酸堿變性（pH小于4或大于11）變性劑（尿素、鹽酸胍、甲醛） 變性后的理化性質 ：260nm吸收值升高。粘度降低，浮力密度升高。二級結構改變，部分失活。 增色效應與減色效應增色效應與

29、減色效應增色效應：在DNA的變性過程中，摩爾吸光系數(shù)增大減色效應：在DNA的復性過程中，摩爾吸光系數(shù)減小。DNA的變性是爆發(fā)式的，變性作用發(fā)生在一個很窄的溫度范圍內。1、 熔解溫度（熔解溫度（Tm）：）：DNA的雙螺旋結構失去一半時對應的溫度。DNA的Tm一般在8295之間2、 影響影響DNA的的Tm值的因素值的因素DNA均一性 。 均一性高，變性的溫度范圍越窄，據(jù)此可分析DNA的均一性 。G-C含量與Tm值成正比。測定Tm，可推知G-C含量。G-C%=（Tm-69.3）2.44介質中離子強度介質中離子強度離子強度高，Tm高。(二二) 復性復性 (Renaturation)變性DNA在適當（一

30、般低于Tm2025）條件下，兩條鏈重新締合成雙螺旋結構。DNA reassociation (renaturation)Double-stranded DNADenatured,single-strandedDNASlower, rate-limiting,second-order process of findingcomplementary sequencesto nucleate base-pairingFaster,zipperingreaction toform longmoleculesof double-strandedDNA 熱變性DNA在緩慢冷卻時可以復性，快速冷卻不能復性。

31、 DNA片段越大，復性越慢； DNA濃度越大，復性越快。 復性速度可用Cot衡量Co為變性DNA原始濃度molL-1，t為時間，以秒表示。 P352 圖5-22，不同DNA的復性動力學曲線。Cot1/2表示復性一半的Cot值。根據(jù)復性動力學可以測定基因組的大小和重復序列的拷貝數(shù) 核酸的雜交核酸的雜交加熱加熱雙鏈雙鏈DNADNA單鏈單鏈DNA雜交雜交雜化雙鏈雜化雙鏈在在DNADNA復性過程中復性過程中, ,雙鏈分子的再形成既可以發(fā)生在序列完全互補雙鏈分子的再形成既可以發(fā)生在序列完全互補的核酸分子之間的核酸分子之間, ,也可以發(fā)生在堿基序列部分互補的不同的也可以發(fā)生在堿基序列部分互補的不同的DNA

32、DNA之之間或間或DNADNA與與RNARNA之間之間 , ,這種現(xiàn)象稱為這種現(xiàn)象稱為分子雜交分子雜交。 核酸雜交可以是核酸雜交可以是DNA-DNA，也可以是，也可以是DNA-RNA雜交。雜交。 不同來源的，具有大致相同互補堿基不同來源的，具有大致相同互補堿基順序的核酸片段稱為順序的核酸片段稱為同源順序同源順序。 利用核酸的分子雜交，可以確定或尋利用核酸的分子雜交，可以確定或尋找不同物種中具有同源順序的找不同物種中具有同源順序的DNA或或RNA片段。片段。 一、一、 核酸的分離純化和定量核酸的分離純化和定量盡可能保持其天然狀態(tài)，防止降解和變性。條件溫和，防止過酸、過堿、劇烈攪拌。抑制核酸酶。（

33、三）核酸的定量（三）核酸的定量 P514紫外分光光度法紫外分光光度法 硫酸硫酸 鉬酸鉬酸 還原劑還原劑 定磷法定磷法 有機磷有機磷 P 磷鉬酸磷鉬酸 鉬藍鉬藍 鹽酸鹽酸 苔黑酚苔黑酚定糖法定糖法 RNA 糠醛糠醛 鮮綠色物鮮綠色物 鹽酸鹽酸定糖法定糖法 DNA 藍色物藍色物 二苯胺二苯胺二、核酸的沉降特性與超速離心二、核酸的沉降特性與超速離心不同構象的核酸（線形、環(huán)形、超螺旋），密度和沉降速率不同，用Cs-Cl密度梯度離心可以將不同構象DNA、RNA與蛋白質區(qū)分開來這一方法常用于質粒DNA的純化。（一）密度梯度超速離心測定核酸的浮力密度：（一）密度梯度超速離心測定核酸的浮力密度：8M CsCl

34、，45000rpm，16h密度梯度：1.80g/ml1.55g/ml平衡時：浮力密度=CsCl密度=離心力=0 +4.22（r2 - r02） 10-10 ：浮力密度0 ：為標準DNA的密度 ：角速度（弧度/秒）r：樣品到轉軸的距離（二）密度梯度超速離心測定（二）密度梯度超速離心測定DNA的的G-C含量含量G-C含量與含量與DNA的浮力密度之間呈正比關系的浮力密度之間呈正比關系=0.1 xG-C + 1.658xG-C = （ -1.658） 10但是5-甲基胞嘧啶多的DNA，其實際浮力密度會降低，低于理論值。（三）密度梯度超速離心研究核酸的構象（三）密度梯度超速離心研究核酸的構象RNADNA

35、變性DNA雙鏈DNA 蛋白質，變性程度越大，浮力密度越大（四）密度梯度超速離心純化（四）密度梯度超速離心純化RNA或不同構象或不同構象的的DNA超螺旋超螺旋DNADNA或或三、三、 核酸的凝膠電泳核酸的凝膠電泳（一）（一） 瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳用于大片段用于大片段DNA的分離，精度低，但分離范圍廣的分離，精度低，但分離范圍廣影響遷移率的因素： 核酸分子的大小，遷移率與分子量的對數(shù)成反比 凝膠濃度 DNA的構象，超螺旋最快，線形其次，環(huán)形最慢。 電壓，不大于5V/cm染色：0.5ug/ml EB RNA的瓊脂糖凝膠電泳一般要加入甲醛或戊二醛瓊脂糖電泳可以用于瓊脂糖電泳可以用于DNA分子量的測定分子量的測定瓊脂糖電泳可以用于瓊脂糖電泳可以用于DNA的制備與純化的制備與純化（二）（二） PAGE電泳電泳用于小片段用于小片段DNA的分析，精度非常高的分析，精度非常高六、六、DNA聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應Polymerase Chain Reaction PCRPCR是以DNA聚合酶在體外擴增DNA片斷技術，經(jīng)歷DNA變性、退火、聚合酶催化DNA鏈的延伸等三個步驟周而復始的過程。1993Dr. Kary Mullis discovered the PCR procedure, for which he was awarded the Nobel prize.