《現(xiàn)代分析技術(shù)與應(yīng)用：第十八章 高效液相色譜法》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《現(xiàn)代分析技術(shù)與應(yīng)用：第十八章 高效液相色譜法（76頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、第十八章第十八章 高效液相色譜法高效液相色譜法 High performance liquid chromatography；HPLCn固定相固定相 剛性固體或硬膠n流動相流動相 液體（有機(jī)溶劑或水等）n分離機(jī)制分離機(jī)制液液分配色譜、液固吸附色譜、離子交換色譜、尺寸排阻色譜與親和色譜高效液相色譜法高效液相色譜法高效高效液相色譜法與液相色譜法與經(jīng)典經(jīng)典液相色譜法液相色譜法n高壓輸液泵高壓輸液泵輸送流動相，流速快，分析速度快輸送流動相，流速快，分析速度快n顆粒極細(xì)（一般為顆粒極細(xì)（一般為1010 m m以下）、規(guī)則均勻的以下）、規(guī)則均勻的固定相固定相，傳質(zhì)阻抗小傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離效率高，柱效

2、高，分離效率高n高靈敏度檢測器高靈敏度檢測器，紫外檢測器最小檢測限可達(dá)，紫外檢測器最小檢測限可達(dá)1010 9 9g g，熒光檢測器最小檢測限可達(dá)熒光檢測器最小檢測限可達(dá)1010 1212g g與與氣相色譜法氣相色譜法相比相比氣相氣相液相液相分析對象氣體及沸點(diǎn)低的化合物（20%）高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差，摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)（80%）流動相氣體（僅運(yùn)載）液體（與組分間有親和力，參與固定相對組分的競爭）柱溫較高溫度室溫及以上高效液相色譜流程圖高效液相色譜流程圖第一節(jié)第一節(jié) 主要類型和原理主要類型和原理n親合色譜法（親合色譜法（affinity chromatographyaffinity chromatog

3、raphy；ACAC）n手性色譜法（手性色譜法（chiral chromatographychiral chromatography；CCCC）n膠束色譜法（膠束色譜法（micellar chromatographymicellar chromatography；MCMC）n電色譜法（電色譜法（electrochromatographyelectrochromatography；ECEC）n生物色譜法生物色譜法( (biochromatography;BCbiochromatography;BC) )主要類型主要類型分離機(jī)制分類分離機(jī)制分類n化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法n離子抑制色譜法離子

4、抑制色譜法n離子對色譜法離子對色譜法主要類型主要類型固定相類型分類固定相類型分類主要類型主要類型n分配色譜法（分配色譜法（partition chromatographypartition chromatography）n吸附色譜法（吸附色譜法（adsorption chromatographyadsorption chromatography）n離子交換色譜法（離子交換色譜法（IECIEC）n空間排阻色譜法（空間排阻色譜法（SECSEC）分離機(jī)制分類分離機(jī)制分類基本要求：基本要求：n顆粒細(xì)且均勻n傳質(zhì)快n機(jī)械強(qiáng)度高、耐高壓n化學(xué)穩(wěn)定性好，不與流動相發(fā)生反應(yīng)高效液相色譜法高效液相色譜法固定相固

5、定相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 n化學(xué)鍵合相化學(xué)鍵合相 采用采用化學(xué)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng)的方法將的方法將官能團(tuán)鍵合官能團(tuán)鍵合在在載體載體表表面所形成的固定相面所形成的固定相n分離幾乎所有類型的化合物，分離幾乎所有類型的化合物，應(yīng)用最廣應(yīng)用最廣固定相固定相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)n固定相的均一性和穩(wěn)定性好，在使用過程中不易流失，使用周期長；n柱效高；重現(xiàn)性好；n能使用的流動相和鍵合相的種類多，分離的選擇性高n正相、反相鍵合相色譜法：正相、反相鍵合相色譜法：根據(jù)化學(xué)鍵合相（官能團(tuán)）與流動相極性的相對強(qiáng)弱根據(jù)化學(xué)鍵合相（官能團(tuán)）與流動相極性的相對強(qiáng)弱化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法

6、分類分類非極性非極性非極性烴基非極性烴基C C1818C C8 8C C1 1與苯基等鍵與苯基等鍵合合反相色譜反相色譜弱極性鍵弱極性鍵醚基和二羥基醚基和二羥基反相或正相色譜反相或正相色譜極性極性氨基氨基氰基鍵合相鍵氰基鍵合相鍵合合硅膠硅膠正相色譜正相色譜鍵合相的性質(zhì)和特點(diǎn)鍵合相的性質(zhì)和特點(diǎn)n鍵合反應(yīng)鍵合反應(yīng) 硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷與硅膠進(jìn)行）型：氯硅烷與硅膠進(jìn)行硅烷硅烷 化反應(yīng)化反應(yīng) 22SiOHClCH+SiSiSiClH18OR118HC3737RRR1化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 ODSODS鍵合相：鍵合相：n含碳量含碳量：含碳的百分?jǐn)?shù)：含碳的百分?jǐn)?shù)

7、 n覆蓋度覆蓋度：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總：已反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例數(shù)的比例 n封尾封尾（end-cappingend-capping）：在鍵合反應(yīng)后，用三甲基）：在鍵合反應(yīng)后，用三甲基氯硅烷等進(jìn)行鈍化處理，減少殘余硅醇基。氯硅烷等進(jìn)行鈍化處理，減少殘余硅醇基。鍵合相的性質(zhì)鍵合相的性質(zhì)化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 n使用過程中不流失；使用過程中不流失；n化學(xué)穩(wěn)定性好；化學(xué)穩(wěn)定性好；n適于梯度洗脫；適于梯度洗脫；n載樣量大載樣量大 注：注：流動相的流動相的pHpH一般應(yīng)在一般應(yīng)在2-82-8鍵合相的特點(diǎn)鍵合相的特點(diǎn)化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 其他種類的固

8、定相其他種類的固定相n鍵合型離子交換劑（鍵合型離子交換劑（ion exchanger)ion exchanger)。n手性固定相（手性固定相（chiral stationary phase)chiral stationary phase)n親和色譜固定相親和色譜固定相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法要求要求：n與固定相與固定相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。n對試樣有適宜的溶解度。使對試樣有適宜的溶解度。使k k在在1 11010范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，n與檢測器相適應(yīng)與檢測器相適應(yīng)。 紫外檢測器：溶劑截止波長應(yīng)小于檢測波長紫外檢測器：溶劑截止波長應(yīng)小于檢測波長n純度高，粘度小。以降低柱壓，提高柱效純度

9、高，粘度小。以降低柱壓，提高柱效 流動相流動相流動相對分離的影響流動相對分離的影響n n: :固定相性能決定固定相性能決定: :溶劑種類溶劑種類k k: :溶劑配比溶劑配比2211-4nkkR化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法流動相流動相n溶劑的極性（強(qiáng)度）溶劑的極性（強(qiáng)度）正相色譜：溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng)正相色譜：溶劑極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng) 反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強(qiáng)反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強(qiáng) n溶劑的選擇性溶劑的選擇性溶劑分子間的作用力不同，選擇性不同溶劑分子間的作用力不同，選擇性不同 n混合溶劑混合溶劑（二元或多元流動相）（二元或多元流動相） 正己烷正己烷- -異丙醇，甲醇

10、異丙醇，甲醇- -乙腈乙腈 化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法流動相流動相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法流動相流動相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法流動相流動相化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法流動相流動相不同組別的溶劑組合可以提高分離的選擇性不同組別的溶劑組合可以提高分離的選擇性n正相化學(xué)鍵合相色譜法正相化學(xué)鍵合相色譜法n反相化學(xué)鍵合相色譜法反相化學(xué)鍵合相色譜法n反相離子對色譜法反相離子對色譜法n其他高效液相色譜法其他高效液相色譜法離子色譜法、手性色譜法、親和色譜法離子色譜法、手性色譜法、親和色譜法高效液相色譜法的分離高效液相色譜法的分離P389P389內(nèi)容合并與此部分內(nèi)容合并與此部分正相鍵合

11、相色譜法正相鍵合相色譜法n適用范圍：適用范圍：中等極性的分子型化合物中等極性的分子型化合物n固定相：固定相：極性鍵合相極性鍵合相氰基（氰基（CNCN）：含雙鍵化合物）：含雙鍵化合物氨基（氨基（NHNH2 2）：多基團(tuán)如甾體、糖類等）：多基團(tuán)如甾體、糖類等或二羥基鍵合硅膠或二羥基鍵合硅膠分離條件的選擇分離條件的選擇n 流動相：流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑烷烴加醇類烷烴加醇類n分離機(jī)制：分離機(jī)制： 分配：組分在兩相的溶解分配：組分在兩相的溶解 吸附：組分與鍵合極性基團(tuán)間的誘導(dǎo)、氫鍵和定向吸附：組分與鍵合極性基團(tuán)間的誘導(dǎo)、氫鍵和定向作用作用正相鍵合相色譜法正相

12、鍵合相色譜法分離條件的選擇分離條件的選擇n分離選擇性分離選擇性鍵合相種類、流動相強(qiáng)度、試樣性質(zhì)鍵合相種類、流動相強(qiáng)度、試樣性質(zhì)1.1.極性強(qiáng)的組分極性強(qiáng)的組分k k大，后洗脫出柱。大，后洗脫出柱。2.2.流動相的極性增強(qiáng)，洗脫能力增加，使組分流動相的極性增強(qiáng)，洗脫能力增加，使組分k k減小，減小，t tR R 減小減小正相鍵合相色譜法正相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法n適用：非極性至中等極性的組分，有機(jī)酸、堿及鹽等適用：非極性至中等極性的組分，有機(jī)酸、堿及鹽等 n固定相固定相：非極性鍵合相：非極性鍵合相 十八烷基硅烷（十八烷基硅烷（C C1818，ODSODS），應(yīng)用最廣），應(yīng)用

13、最廣 辛烷基（辛烷基（C C8 8）鍵合硅膠）鍵合硅膠 短短鏈烷烴鍵合相：極性化合物鏈烷烴鍵合相：極性化合物苯基鍵合相：芳香化合物及多羥基化合物苯基鍵合相：芳香化合物及多羥基化合物n流動相流動相：水水+ +與水混溶的與水混溶的極性調(diào)整劑極性調(diào)整劑 甲醇水甲醇水, ,最常用；乙腈水等，末端吸收的檢測最常用；乙腈水等，末端吸收的檢測n弱酸、弱堿或緩沖鹽為弱酸、弱堿或緩沖鹽為抑制劑抑制劑調(diào)節(jié)流動相調(diào)節(jié)流動相PH,PH,抑制組分分解抑制組分分解n0.1-1%0.1-1%醋酸鹽、磷酸鹽醋酸鹽、磷酸鹽減弱固定相表面硅醇基的干擾作用減弱固定相表面硅醇基的干擾作用反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法分離條件的選擇

14、分離條件的選擇溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)( (極性）極性）n極性越弱，疏水性越強(qiáng)，極性越弱，疏水性越強(qiáng)，k k越大，越大，t tR R也越大也越大n同系物碳數(shù)越多，極性越弱，同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k k越大越大n引入引入極性取代基，降低疏水性，極性取代基，降低疏水性，k k值變小值變小 反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因保留行為的主要影響因素素固定相固定相n鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質(zhì)k增大。n硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，溶質(zhì)的k越大反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因保留行為的主要影響因素素流動相流動相 n極性越強(qiáng)，洗脫能力越弱，溶質(zhì)k越大

15、,tR越大n水(弱溶劑)-醇(強(qiáng)溶劑),n水的比例增加，k增大npH：影響弱酸、弱減的離解(離子抑制色譜法）n流動相的pH降低，弱酸k增大，tR增大；弱堿k變小反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因保留行為的主要影響因素素離子抑制色譜法離子抑制色譜法n用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動相用少量弱酸、弱堿或緩沖溶液，調(diào)節(jié)流動相的的pHpH，抑制有機(jī)弱酸、弱堿的離解，增加疏，抑制有機(jī)弱酸、弱堿的離解，增加疏水締合作用，使水締合作用，使k k變大變大n適用于適用于3p3pK Ka7a7的弱酸、的弱酸、7p7pK Ka8a8的弱堿的弱堿反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法n方法：方法：把把

16、離子對試劑離子對試劑加入到加入到含水流動相含水流動相中，組分離中，組分離子在流動相中與離子對試劑的反離子（子在流動相中與離子對試劑的反離子（counter ioncounter ion）生成生成中性離子對中性離子對，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使使k k增加，改善分離效果。增加，改善分離效果。 n正相離子對色譜法（基本不用）正相離子對色譜法（基本不用）n反相離子對色譜法（更常用）反相離子對色譜法（更常用）反相離子對色譜法反相離子對色譜法 離子對模型離子對模型33+()+3s3(+固定相固定相+()+B)+B + H+BHRSO NaRSO + Na+BH RSO

17、RSO)BH離子對mB+AB AmA(smBAmmmsmsBAAABABBABEK流動相流動相通式通式反相離子對色譜法反相離子對色譜法 n適用范圍適用范圍：有機(jī)酸、堿、鹽，離子型和非離子型化：有機(jī)酸、堿、鹽，離子型和非離子型化合物的混合物合物的混合物n酸類或帶負(fù)電荷物質(zhì)酸類或帶負(fù)電荷物質(zhì)：季銨鹽，如四丁基銨磷酸鹽：季銨鹽，如四丁基銨磷酸鹽（TBATBA）和溴化十六烷基三甲基銨（）和溴化十六烷基三甲基銨（CTABCTAB）等）等n堿類或帶正電荷的物質(zhì)堿類或帶正電荷的物質(zhì)：烷基磺酸鹽或硫酸鹽，如：烷基磺酸鹽或硫酸鹽，如正戊烷基磺酸鈉（正戊烷基磺酸鈉（PICBPICB5 5）、正己烷基磺酸鈉）、正己

18、烷基磺酸鈉（PICBPICB6 6）反相離子對色譜法反相離子對色譜法 n固定相固定相 表面覆蓋度高且疏水性強(qiáng)的非極性鍵合相表面覆蓋度高且疏水性強(qiáng)的非極性鍵合相n離子對試劑離子對試劑 所帶的電荷應(yīng)與試樣離子的電荷相反所帶的電荷應(yīng)與試樣離子的電荷相反 n流動相流動相pHpH 使試樣組分與離子對試劑全部離子化使試樣組分與離子對試劑全部離子化n有機(jī)溶劑及其濃度有機(jī)溶劑及其濃度反相離子對色譜法反相離子對色譜法分離條件分離條件 n離子對試劑的種類和濃度離子對試劑的種類和濃度：碳鏈長度增加，溶質(zhì)的：碳鏈長度增加，溶質(zhì)的k k增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升高，溶質(zhì)的增大；在一定范圍內(nèi)試劑的濃度升高，溶質(zhì)的k

19、k增大增大 n流動相的流動相的pHpH：有利于組分和離子對試劑離子化時：有利于組分和離子對試劑離子化時（離子對的形成），組分的（離子對的形成），組分的k k值最大值最大n固定相固定相 、流動相性質(zhì)、流動相性質(zhì)影響保留因子的因素影響保留因子的因素反相離子對色譜法反相離子對色譜法第二節(jié)液相色譜法分類及其分第二節(jié)液相色譜法分類及其分離條件的選擇離條件的選擇高效液相色譜法高效液相色譜法n渦流擴(kuò)散渦流擴(kuò)散A A=2=2ddp p 球形、小粒度、均勻固定相，勻漿高壓填充，以降球形、小粒度、均勻固定相，勻漿高壓填充，以降低低A An縱向擴(kuò)散縱向擴(kuò)散=2=2DDm m 可以忽略可以忽略 D Dl l很小，室溫

20、操作，且很小，室溫操作，且U U大于大于U U最佳最佳高效液相色譜法中的速率理論高效液相色譜法中的速率理論P(yáng)387P387傳質(zhì)阻抗傳質(zhì)阻抗n固定相傳質(zhì)阻抗固定相傳質(zhì)阻抗CsCs ：鍵合相為單層分子，忽略影響：鍵合相為單層分子，忽略影響n流動相傳質(zhì)阻抗流動相傳質(zhì)阻抗C Cm m：固定相顆粒力度固定相顆粒力度d dp p，組分在流動相中擴(kuò)散系數(shù)，組分在流動相中擴(kuò)散系數(shù)D Dm m靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗n細(xì)顆粒固定相，低粘度溶劑（甲醇或乙腈）細(xì)顆粒固定相，低粘度溶劑（甲醇或乙腈）m2PmmDdC高效液相色譜法中的速率理論高效液相色譜法中的速率理論H H = =A A + + C Cm

21、mu u + + C Csmsmu u 實驗條件：實驗條件：小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相低粘度流動相，流速不宜過快低粘度流動相，流速不宜過快柱溫適當(dāng)柱溫適當(dāng) 高效液相色譜法中的速率理論高效液相色譜法中的速率理論第三節(jié)高效液相色譜儀第三節(jié)高效液相色譜儀組成組成n進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)n色譜柱系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)n檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)n數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng) 輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng) 輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)高壓輸液泵高壓輸液泵n恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定。恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定。常用柱塞

22、往復(fù)泵常用柱塞往復(fù)泵 n雙泵：克服流量的脈動雙泵：克服流量的脈動, ,串聯(lián)式和并聯(lián)式串聯(lián)式和并聯(lián)式輸液泵應(yīng)具備的性能：輸液泵應(yīng)具備的性能：n流量精度高且穩(wěn)定流量精度高且穩(wěn)定n流量范圍寬流量范圍寬n能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作n液缸容積小液缸容積小n密封性能好，耐腐蝕密封性能好，耐腐蝕 輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)輸液泵操作注意事項：輸液泵操作注意事項：n防止固體微粒進(jìn)入泵體防止固體微粒進(jìn)入泵體n流動相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)流動相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)n防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完n不超過規(guī)定的最高壓力不超過規(guī)定的最高壓力n流動相一般應(yīng)該先脫氣流動相一般應(yīng)該先脫氣輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)分離

23、和進(jìn)樣系統(tǒng)分離和進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣器進(jìn)樣器進(jìn)樣閥（六通閥）、自動進(jìn)樣裝置進(jìn)樣閥（六通閥）、自動進(jìn)樣裝置色譜柱色譜柱（columncolumn）：柱管和固定相組成）：柱管和固定相組成分析柱、制備柱分析柱、制備柱 性能評價：性能評價：H H、n n、f fs s、k k和和的重復(fù)性，或的重復(fù)性，或R R分離和進(jìn)樣系統(tǒng)分離和進(jìn)樣系統(tǒng)分離和進(jìn)樣系統(tǒng)分離和進(jìn)樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)要求：要求：n靈敏度高，（檢測限低）噪音低靈敏度高，（檢測限低）噪音低n線性范圍寬線性范圍寬n重復(fù)性好重復(fù)性好n適用范圍廣（通用型、專屬型）適用范圍廣（通用型、專屬型） 紫外檢測器紫外檢測器n檢測原理檢測原理朗伯比爾朗伯比爾 (Lam

24、bert-Beer) (Lambert-Beer) 定律，響應(yīng)信號（吸定律，響應(yīng)信號（吸光度）與濃度成正比光度）與濃度成正比A A= =ClCln特點(diǎn)特點(diǎn)靈敏度較高（靈敏度較高（1010-6-61010-9-9 g/ml g/ml），噪音低，線性范），噪音低，線性范圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破壞樣品，應(yīng)用廣圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破壞樣品，應(yīng)用廣（分析、制備）（分析、制備）n局限：局限：僅限于紫外吸收的物質(zhì)檢測，流動相的截止僅限于紫外吸收的物質(zhì)檢測，流動相的截止波長應(yīng)小于檢測波長。波長應(yīng)小于檢測波長。 n專屬型、濃度型檢測器專屬型、濃度型檢測器紫外檢測器紫外檢測器n固定波長檢測器固定波長

25、檢測器 ：254nm254nmn可變波長檢測器：可變波長檢測器：光源：光源：氘燈（和鎢燈），氘燈（和鎢燈）， 200200400400（800800）nmnmn光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器 光源：光電二極管，光源：光電二極管，200200900 nm900 nm紫外檢測器紫外檢測器紫外檢測器紫外檢測器熒光檢測器熒光檢測器檢測原理：檢測原理：n化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為光，稱為熒光熒光n熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度 ( (F F) ) 與激發(fā)光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度 ( (I I0 0) ) 及熒光物質(zhì)濃度及熒光物質(zhì)濃度 ( (

26、C C) ) 之間的關(guān)系為：之間的關(guān)系為： F F=2.3=2.3Q QK KI I0 0C Cl l nQ Q為量子產(chǎn)率，為量子產(chǎn)率，K K為熒光效率，為熒光效率，為摩爾吸光系數(shù)，為摩爾吸光系數(shù)，l l為光徑長度。為光徑長度。n特點(diǎn)：特點(diǎn)：選擇性好，專屬型檢測器選擇性好，專屬型檢測器靈敏度比紫外檢測器高（檢測限靈敏度比紫外檢測器高（檢測限1010-10-10 g/ml g/ml）n激發(fā)波長激發(fā)波長( ( exex) )和發(fā)射波長和發(fā)射波長( ( emem) )的選擇的選擇熒光檢測器熒光檢測器u通用型檢測器通用型檢測器u檢測沒有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)檢測沒有紫外吸收的有機(jī)物質(zhì)蒸發(fā)光散射檢測器n1)

27、 可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品n2) 流動相低溫霧化和蒸發(fā)，對熱不穩(wěn)定和揮發(fā)性化合物亦有較高靈敏度n3) 廣泛的梯度和溶劑兼容性，無溶劑峰干擾n4) 輔助載氣提高了檢測靈敏度，保持檢測池內(nèi)的n清潔，避免污染n5) 高精度霧化和蒸發(fā)溫度控制，保證高精度檢測；n6) 可與任何HPLC系統(tǒng)連接蒸發(fā)光散射檢測器優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)n和高效液相色譜連接時需要信號轉(zhuǎn)換n價格昂貴n使用不便，需要配置高壓氮?dú)饣蚩諝?，且實驗中產(chǎn)生廢氣有害。蒸發(fā)光散射檢測器缺點(diǎn)缺點(diǎn)第四節(jié)第四節(jié) 高效液相色譜分析方法高效液相色譜分析方法n定性分析方法定性分析方法n定量分析方法：外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法定量分析方法：外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法主要內(nèi)容主要內(nèi)容n化學(xué)鍵合相色譜法的原理，分類n化學(xué)鍵合相色譜法的固定相、流動相n化學(xué)鍵合相色譜法的分離條件n液相組成及各種檢測器的適用范圍n定量分析方法