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1、氨芐西林與紅霉素聯(lián)用的體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究 【摘要】 目的：研究繁殖期殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用的可能性，降低細(xì)菌內(nèi)毒素的釋放量，改善臨床感染癥狀。方法:采用微生物井式擴(kuò)散法，在無菌條件下，用藤黃八疊球菌作菌懸液，氨芐西林、紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品為模型藥物，測定兩者合用后的抑菌圈。結(jié)果:兩種抗生素聯(lián)用后的抑菌圈與氨芐西林單用的抑菌圈相當(dāng)（P>0.05）。結(jié)論:抑菌劑與繁殖期殺菌劑聯(lián)用并不降低繁殖期殺菌劑的殺菌效能，聯(lián)用時(shí)應(yīng)以同時(shí)合用或殺菌劑后使用抑菌劑為宜。 【關(guān)鍵詞】 氨芐西林，紅霉素，抑菌圈，藤黃八疊球菌 繁殖期殺菌劑在殺滅細(xì)菌的同時(shí)會(huì)引起內(nèi)毒素大量釋放，導(dǎo)致臨床癥狀加?。?］。繁殖期

2、殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用歷來被認(rèn)為是抗生素的不合理用藥［2］，原因是抑菌劑抑制細(xì)菌的生長無法使繁殖期殺菌劑起到殺菌作用，從而使聯(lián)用失去意義。繁殖期殺菌劑主要是β內(nèi)酰胺類抗生素，包括青霉素類和頭孢菌素類，發(fā)揮抗菌作用時(shí)與細(xì)胞外膜上的青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，細(xì)胞壁合成受阻，最后細(xì)菌破裂死亡。抑菌劑主要是大環(huán)內(nèi)酯類，其抗菌機(jī)制是抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成致細(xì)菌死亡。到目前為止，尚未見有實(shí)驗(yàn)研究證明繁殖期殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用不合理。 　　1 材料 氨芐西林標(biāo)準(zhǔn)品（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，4109402），紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，1303072001 14），10 μL微量進(jìn)樣器（上海醫(yī)用激光儀器廠）

3、，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海醫(yī)療器械七廠），藤黃八疊球菌（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，28001）。 　　2 方法 　　2.1 Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基及滅菌緩沖液（pH=6.8）的制備［3］ 　　2.2 菌懸液的制備［4］ 取已分離出的單個(gè)菌落接種于試管斜面上，在30 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h。取上述菌種，分別接種于2個(gè)扁瓶斜面上，置30 ℃恒溫箱培養(yǎng)，一斜面培養(yǎng)24 h（代表生長期相同組)；另一斜面分別間隔6 h接種2次培養(yǎng)至24 h（代表生長期不同組)；各用100 mL滅菌緩沖液將已培養(yǎng)好的斜面菌苔洗下，備用。 　　2.3 菌碟的制備［4］ 將Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基適量加熱融化后，冷至

4、50 ℃左右，在無菌條件下加入細(xì)菌懸液適量（1%，菌懸液體積100/培養(yǎng)基體積%），搖勻后趁熱吸取18 mL注入水平臺(tái)上的玻璃培養(yǎng)皿（Ф=9 cm）中，待冷凝后用角膜環(huán)鉆（Ф=3 mm）在同一圓周上打若干個(gè)孔, 孔距適當(dāng), 倒置備用。 　　2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品適量，用滅菌水溶解制備貯備液（100 μg/mL)，取貯備液適量用水稀釋至紅霉素為2 μg/mL、 4 μg/mL；氨芐西林為0.5 μg/mL、1.0 μg/mL濃度備用。取4 μg/mL 紅霉素、1.0 μg/mL 氨芐西林各1 mL混合使紅霉素的濃度為2 μg/mL，氨芐西林的濃度為0.5 μg/m

5、L（混合液）。 　　2.5 實(shí)驗(yàn)方法［5］ 無菌條件下在菌碟孔中分別點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量為10 μL，平行實(shí)驗(yàn)菌碟為6 個(gè)，置恒溫箱中（30 ℃）培養(yǎng)16～18 h后取出，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。 　　2.5.1 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對生長期相同細(xì)菌的影響 依“2.2”、“2.3”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打四個(gè)孔，分別注入10 μL滅菌水、2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林及混合液，依“2.5”法試驗(yàn)?！　?.5.2 不同濃度紅霉素對氨芐西林殺菌效果的影響 依“2.3” 、“2.4”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打六個(gè)孔，適當(dāng)稀釋使含氨芐西林均為0.5 μg/m

6、L，紅霉素分別0.5、1.0、1.5、2.0 μg/mL，依“2.5”法試驗(yàn)。 　　2.5.3 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用方式對氨芐西林殺菌效果的影響 依“2.2”、“2.3”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打六個(gè)孔，從1～6依次編號(hào)，分別注入10 μL滅菌水、2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林、混合液、0.5 μg/mL氨芐西林、2 μg/mL 紅霉素，置恒溫箱中（30 ℃）培養(yǎng)6 h后，在5、6號(hào)孔中分別再注入10 μL 2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林后，繼續(xù)培養(yǎng)至16～18 h后取出，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。 　　2.5.4 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對

7、放置不同時(shí)間細(xì)菌懸液的影響 將細(xì)菌懸液分別在4 ℃冰箱中放置0 d、3 d、7 d后，分別依“2.5.3”法試驗(yàn)。 　　3 結(jié)果 　　3.1 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對生長期相同細(xì)菌的影響 結(jié)果見表1。由表1可知繁殖期殺菌劑氨芐西林與生長期抑菌劑紅霉素混合溶液的抑菌圈與氨芐西林單獨(dú)使用時(shí)的抑菌圈比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<0.55，P＞0.05），兩者聯(lián)用不論在細(xì)菌生長期是否一致都與單獨(dú)使用的殺菌效力相當(dāng)。表1 氨芐西林與紅霉素單用、聯(lián)用后的抑菌圈直徑（略） 　　3.2 不同濃度紅霉素對氨芐西林殺菌效果的影響 結(jié)果見表2。由表2可知，合用不同濃度的紅霉素對氨芐

8、西林的殺菌效果影響不同，濃度小于1 μg/mL時(shí)，抑菌圈略大，濃度大于1μg/mL時(shí)，抑菌圈相近，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<1.655，P>0.05）。表2 不同濃度紅霉素與氨芐西林聯(lián)用的抑菌圈直徑（略） 　　3.3 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用方式對氨芐西林殺菌效果的影響 結(jié)果見表3。由表3可知，紅霉素與氨芐西林的合用方式不同，效果也不同。同時(shí)合用或先用氨芐西林后用紅霉素效果相近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<0.55，P＞0.05)；但是若先用紅霉素后用氨芐西林則效果降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t>6.5，P<0.001）。表3 氨芐西林與紅霉素不同聯(lián)用方式的抑藥圈

9、直徑（略）注：*表示與0.5 μg/mL氨芐西林組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.001） 　　3.4 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對放置不同時(shí)間細(xì)菌懸液的影響 由表4可知，細(xì)菌懸液放置7 d對實(shí)驗(yàn)結(jié)果（統(tǒng)計(jì)結(jié)論）幾無影響且細(xì)菌生長期相同與否對實(shí)驗(yàn)結(jié)果也無影響，但7d時(shí)t值（4.27、3.28）小于3d時(shí)t值（9.78、6.5），故細(xì)菌懸液放置時(shí)間不宜超過3 d。表4 氨芐西林與紅霉素放置不同時(shí)間的抑菌圈直徑（略）注：*表示與0.5 μg/mL氨芐西林組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01） 　　4 討論 以往認(rèn)為，繁殖期殺菌劑和生長期抑菌劑不能聯(lián)用，但本文

10、體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與傳統(tǒng)理論的結(jié)論相反，其作用機(jī)制及臨床驗(yàn)證有待進(jìn)一步研究。臨床感染的情況復(fù)雜，細(xì)菌往往不處在同一生長狀態(tài)，繁殖期殺菌劑可以殺滅繁殖期的細(xì)菌，抑菌劑可以抑制生長期細(xì)菌的繁殖，并且聯(lián)合應(yīng)用可降低細(xì)菌內(nèi)毒素的釋放量， 改善臨床癥狀，從而達(dá)到良好的治療目的?？紤]到聯(lián)用方式對殺菌效果有影響，一旦聯(lián)用應(yīng)以同時(shí)合用或先使用殺菌劑后使用抑菌劑為宜。 【參考文獻(xiàn)】 ［1］徐能武, 袁建成, 肖光夏, 等. β內(nèi)酰胺類抗生素誘導(dǎo)革蘭氏陰性菌釋放內(nèi)毒素對其療效的影響［J］.中國抗生素雜志, 2000, 25(2): 112116. 　?。?］李 端. 藥理學(xué)［M］.第4版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1999: 299300. 　?。?］中華人民共和國藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典(二部)［S］.2000版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000: 附錄 ⅪP8286. 　?。?］陳 剛. 治療藥物監(jiān)測理論與實(shí)踐［M］.第1版. 北京: 人民軍醫(yī)出版社, 1988: 168170, 469470. 　　［5］盛 杰. 微生物法測定血清中氨芐青霉素的濃度［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 1992, 12(2): 5355. 7 / 7文檔可自由編輯打印