《高中生物 專題一課題二 基因工程的基本操作程序課件1 新人教版選修3》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物 專題一課題二 基因工程的基本操作程序課件1 新人教版選修3（54頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、1.2 1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四個(gè)步驟基因工程基本操作的四個(gè)步驟1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測(cè)與鑒定、目的基因的檢測(cè)與鑒定一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取( (一一) )、目的基因主要是、目的基因主要是_編碼蛋白質(zhì)的基因編碼蛋白質(zhì)的基因請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?1 1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取2 2、利用、利用PC

2、RPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成、人工合成請(qǐng)閱讀請(qǐng)閱讀P9P9第一和二兩段第一和二兩段一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取1.1.基因文庫基因文庫1)1)基因組文庫基因組文庫2)2)部分基因文庫部分基因文庫 ( (cDNAcDNA 文庫文庫) )基因組文庫的構(gòu)建基因組文庫的構(gòu)建（2 2）. .基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法通過對(duì)受通過對(duì)受體菌的培體菌的培養(yǎng)而儲(chǔ)存養(yǎng)而儲(chǔ)存基因基因 cDNA文庫的構(gòu)文庫的構(gòu)建建-反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使錄成的信使RNARNA為模為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單

3、鏈的單鏈DNADNA，然后在然后在酶的作用下合成雙酶的作用下合成雙鏈鏈DNADNA，從而獲得所從而獲得所需的基因。需的基因。目的基因的目的基因的mRNAmRNA單鏈單鏈DNADNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶DNADNA聚合酶聚合酶雙鏈雙鏈DNADNA( (目的基因目的基因) )基因組文庫和部分基因組文庫基因組文庫和部分基因組文庫(cDNA文庫文庫)比較比較怎樣從基因文庫中得怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基到我們所需的目的基因呢因呢? ?依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色體上的位置基因在染色體上的位置

4、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNAmRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性從基因文庫中得到目的基因的方從基因文庫中得到目的基因的方法法2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 概念概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件：條件：_、 _、 _._.等等原理：原理：_方式：以方式：以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合

5、酶指數(shù)指數(shù)2 2n n要有一段已知的目的基因的核苷酸序列（引物）要有一段已知的目的基因的核苷酸序列（引物）過程：過程：a a、DNADNA變性變性（90-9590-95）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火退火（復(fù)性復(fù)性55-6555-65）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與物與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。 c c、延伸延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的合成與模板互補(bǔ)的_。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈3、人工合成法：、人

6、工合成法：基因較小，核苷酸序列已知，可以基因較小，核苷酸序列已知，可以利用利用DNA合成儀人工合成合成儀人工合成二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 基因工程的核心基因工程的核心1、目的：、目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?；蚰軌虮磉_(dá)和發(fā)揮作用。2 2、基因表達(dá)載體的組成：、基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)+ +目的基因目的基因+ +啟動(dòng)子啟動(dòng)子+ +終止子終止子+ +標(biāo)記基因標(biāo)記基因它們各自它們各自的作用是的作用是什么什么?啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：位于基因的首端的

7、位于基因的首端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，它是片斷，它是RNARNA聚合酶聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄錄出出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的尾端的位于基因的尾端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，能片斷，能終終止止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因標(biāo)記基因的作用是為了的作用是為了鑒定鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)因，從而將有目的基因的細(xì)胞胞篩選篩選出來出來載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)

8、制原點(diǎn)兩部分和復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在載體片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu)分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又既用到限制酶切割載體，又用到用到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動(dòng)子、終止子啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意注意1）以下

9、說法正確的是）以下說法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接 D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來C C2）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 A、能復(fù)制能復(fù)制 （ ） B、有、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)多個(gè)限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀它是環(huán)狀DNA3

10、）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來 B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、 人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶4）有關(guān)基因工程的敘述正確的是）有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （ ） A、限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用 B、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可

11、為合成目的基因提供蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料資料三將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（一）轉(zhuǎn)化：（一）轉(zhuǎn)化： （二）方法（二）方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱?dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)1 1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：（1）農(nóng)桿

12、菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 農(nóng)桿菌特點(diǎn)：農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力數(shù)單子葉植物沒有感染能力原理：原理：Ti質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的色體的DNA上。上。過程：過程：優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)（2）基因槍法基因槍法（3）花粉管通道法花粉管通道法2 2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法程序：程序：目的基因表達(dá)載體提純目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵） 顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物

13、3 3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少方法：方法： 用用Ca2+處理細(xì)胞處理細(xì)胞 感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞 表表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞吸收細(xì)胞吸收DNA分子分子四、目的基因的檢測(cè)與鑒定四、目的基因的檢測(cè)與鑒定檢查是否成功檢查是否成功（一）、檢測(cè)（一）、檢測(cè)1 1、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因.首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA.用含目的基因的用含目的基因的DNA片段用

14、放射性同位素片段用放射性同位素等作標(biāo)記等作標(biāo)記,以此做探針以此做探針.使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯若顯示出雜交帶示出雜交帶,表明染色體已插入染色體表明染色體已插入染色體DNA中中（1）方法方法: :DNADNA分子雜交分子雜交（2）過程）過程:歸納步驟DNADNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒

15、有互補(bǔ)堿基序在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 P P1515思考與探究思考與探究（二）、鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平）（二）、鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平）2 2、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA3 3、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法: :分分 子子 雜雜 交交方法方法: :抗原抗體雜交抗原抗體雜交過程過程:用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交雜交,若若出現(xiàn)雜交帶出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因

16、轉(zhuǎn)錄出了表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA歸納步驟歸納: 基因工程的基本操作程序1.1.獲取目的基因獲取目的基因u從基因文庫從基因文庫u利用利用PCRPCRu化學(xué)方法人工合成化學(xué)方法人工合成2.2.構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體u目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因3.3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞u農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法4.4.目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定u檢測(cè)：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯檢測(cè)：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯u鑒定：鑒定：練習(xí)練習(xí)1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴(kuò)大可耕地面積，為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食

17、產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。了耐鹽水稻新品系。（1）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所分子所用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的 處，處，DNA連接酶作用于連接酶作用于 處。（填處。（填“a”或或“b”）練習(xí)練習(xí)1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴(kuò)大可耕地面積，增為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了

18、耐鹽受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。水稻新品系。（2）將重組）將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和 法。法。（3）由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要）由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用利用 技術(shù)，該技術(shù)的核心是技術(shù)，該技術(shù)的核心是 和和 。（4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的要用放射性同位素標(biāo)記的 作探針進(jìn)行分子雜交作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用檢測(cè)，又要用 方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。的耐

19、鹽性。答案：（答案：（1）a a （2）基因槍）基因槍法（花粉管通道法）法（花粉管通道法）（3）植物組織培養(yǎng)（）植物組織培養(yǎng)（1分）分） 脫分化脫分化（去分化）（去分化） 再分化再分化（4）耐鹽基因（目的基因）耐鹽基因（目的基因） 一定一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中） 1）以下說法正確的是）以下說法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連

20、接個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接 D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來C C2）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 A、能復(fù)制能復(fù)制 （ ） B、有、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)多個(gè)限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀它是環(huán)狀DNA3）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來 B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、 人

21、工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶4）有關(guān)基因工程的敘述正確的是）有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （ ） A、限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用 B、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料資料5）基因工程是在）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 （ ） A、人工合成目的基因人工合成目的基

22、因 B、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)目的基因的檢測(cè)和表達(dá)( (四四) )目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定檢查是否成功檢查是否成功檢測(cè)檢測(cè)鑒定鑒定檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交（注意與上不

23、同之處）（注意與上不同之處）抗原抗體雜交抗原抗體雜交1 1、原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)、原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非非編碼區(qū)編碼區(qū)非非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 RNARNA聚合酶（聚合酶（能以能以DNADNA為模板合成為模板合成RNARNA ）結(jié)合位點(diǎn)）結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：位于基因位于基因前端前端的一段特殊的的一段特殊的DNADNA片斷，它片斷，它是是RNARNA聚合酶聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出基因轉(zhuǎn)錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的位于基因的

24、尾端尾端的一段特殊的的一段特殊的DNADNA片斷，片斷，能能終止終止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄不能轉(zhuǎn)錄為不能轉(zhuǎn)錄為mRNAmRNA，不能不能 編碼蛋白質(zhì)。編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNARNA，能能 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核 苷酸序列苷酸序列. .包括啟動(dòng)子和終止子包括啟動(dòng)子和終止子非非編碼區(qū)編碼區(qū)非非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子2 2、真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)、真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼

25、區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子含子啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子：內(nèi)含子： 外顯子：外顯子： 真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，：有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的包括位于編碼區(qū)上游的RNARNA 聚

26、合酶結(jié)合位點(diǎn)（啟動(dòng)子）。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)（啟動(dòng)子）。原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由都由能夠編碼蛋白質(zhì)的能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_區(qū)組成的區(qū)組成的3 3、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思思考考編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長(zhǎng)嗎？細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長(zhǎng)嗎？連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼限制酶限制酶基因組基因組DNADNA基因重組基因重組轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌體外包裝體外包裝1)

27、1)基因組文庫基因組文庫(Genomic library) (Genomic library) 是指將某種生物體的是指將某種生物體的全部基因組全部基因組DNADNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長(zhǎng)度范圍的切割成一定長(zhǎng)度范圍的DNADNA片段，片段，再與合適的載體在體外重組后，再與合適的載體在體外重組后，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，這個(gè)群體就稱為該生物基因組文庫。群體就稱為該生物基因組文庫。其目的是分離有用的目的基因和其目的是分離有用的目的基因和保存某種生物的全部基因。保存某種生物的全部基因。一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸?/p>

28、中直接獲取（一）從基因文庫中直接獲取1.1.基因文庫基因文庫一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取1.1.基因文庫基因文庫cDNAcDNA文庫文庫( ( 互補(bǔ)互補(bǔ)DNA)DNA)：由由mRNAmRNA經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成經(jīng)體外反轉(zhuǎn)錄后形成的互補(bǔ)的互補(bǔ)DNADNA片段，這些片段片段，這些片段叫做這種生物的叫做這種生物的cDNAcDNA文庫文庫 2)2)部分基因文庫部分基因文庫 ( (cDNAcDNA 文庫文庫) )基因重組基因重組反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶mRNAmRNAcDNAcDNA RNARNA聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列

29、中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。并與其結(jié)合。 轉(zhuǎn)錄開始后，轉(zhuǎn)錄開始后，RNARNA聚合酶沿聚合酶沿DNADNA分子移動(dòng)，并分子移動(dòng)，并以以DNADNA分子的一條鏈為模板合成分子的一條鏈為模板合成RNARNA。 轉(zhuǎn)錄完畢后，轉(zhuǎn)錄完畢后，RNARNA鏈釋放出來，緊接著鏈釋放出來，緊接著RNARNA聚聚合酶也從合酶也從DNADNA模板鏈上脫落下來。模板鏈上脫落下來。逆轉(zhuǎn)錄法逆轉(zhuǎn)錄法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA目的基因目的基因化學(xué)合成法化學(xué)合成法肽鏈氨基酸序列肽鏈氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因合成合成逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基

30、因文庫的構(gòu)建方法一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取（一）從基因文庫中直接獲取人工合成法（人工合成法（真核生物真核生物）推測(cè)推測(cè)推測(cè)推測(cè)單鏈單鏈DNADNA合成合成2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法：直接分離法直接分離法供體細(xì)胞中的供體細(xì)胞中的DNADNA許多許多DNADNA片段片段運(yùn)載體運(yùn)載體限制酶限制酶受體細(xì)胞受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入導(dǎo)入外源外源DNADNA擴(kuò)增擴(kuò)增目的基因目的基因分離分離( (鳥槍法鳥槍法) )一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取多用于原核生物多用于原核生物一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取（一）從基因文庫中直接獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取按照外源按照外源DNADNA片段的來源：片段的來源：u從特定組織提取的染色體從特定組織提取的染色體基因組基因組DNADNA - -基因組基因組DNADNA文庫（總）文庫（總）umRNAmRNA反轉(zhuǎn)錄成的反轉(zhuǎn)錄成的cDNAcDNA拷貝拷貝-cDNAcDNA文庫（部分）文庫（部分）基因文庫的目的基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因?；蛭膸斓姆诸惢蛭膸斓姆诸?/p>