《2018版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第十二單元 生物技術(shù)實(shí)踐 第二講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用學(xué)案 新人教版》由會(huì)員分享，可在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)《2018版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第十二單元 生物技術(shù)實(shí)踐 第二講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用學(xué)案 新人教版（26頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 第二講　微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 [考綱展示] 1．微生物的分離和培養(yǎng)　2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定　3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用　4.微生物在其他方面的應(yīng)用 授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第277頁(yè) 一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1．培養(yǎng)基 (1)概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 (2)營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源和生長(zhǎng)因子。 (3)類(lèi)型：根據(jù)物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基；根據(jù)功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 2．無(wú)菌技術(shù) (1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。 (2)關(guān)鍵：防止外來(lái)雜菌的入侵。

2、 (3)方法 3．大腸桿菌的純化培養(yǎng) (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計(jì)算→稱(chēng)量→溶化→滅菌→倒平板。 (2)純化大腸桿菌 ①關(guān)鍵的步驟是接種。 ②純化培養(yǎng)方法：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布法。 ③純化培養(yǎng)原理：在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的菌落，即可獲得較純的菌種。 二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù) 1．分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起催化作用。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基能促進(jìn)分解尿素的細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)，從而將目的菌分離。 2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋

3、涂布平板法。 3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→制備培養(yǎng)基→微生物的培養(yǎng)與觀(guān)察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。 三、分解纖維素的微生物的分離 1．纖維素酶 (1)組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 2．菌種篩選 (1)方法：剛果紅染色法。 (2)原理 　　　　　　　　　纖維素分解菌 　　　　　　　　　　　↓ →紅色復(fù)合物紅色消失、出現(xiàn)透明圈。 即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。 3．篩選流程 土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境 　↓ 選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解 　　 菌的數(shù)量 　↓

4、 梯度稀釋 　↓ 涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 　 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈 1．無(wú)菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒和紫外線(xiàn)消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。 2．培養(yǎng)基的制備包括計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。 3．大腸桿菌的純化包括平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。平板劃線(xiàn)法要求多次劃線(xiàn)，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。 4．微生物的計(jì)數(shù)要求制作多個(gè)平板，且每個(gè)平板上能長(zhǎng)出30～300個(gè)菌落。

5、 5．尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。 有關(guān)微生物培養(yǎng)的易混易錯(cuò)點(diǎn) 兩種常用剛果紅(CR)染色法的比較 方法 先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng) 在倒平板時(shí)就加入剛果紅 過(guò)程 培養(yǎng)基長(zhǎng)出菌落―→覆蓋CR溶液(質(zhì)量濃度為1 mg/mL)倒去CR溶液―→加入NaCl溶液(物質(zhì)的量濃度為1 mol/L)倒掉NaCl溶液―→產(chǎn)生透明圈 配制CR溶液(質(zhì)量濃度為10 mg/mL)―→滅菌―→按照1 mL CR溶液/200 mL培養(yǎng)基比例混勻―→倒平板―→培養(yǎng)―→透明圈 優(yōu)點(diǎn) 顯示出的顏

6、色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用 操作簡(jiǎn)便，不存在菌落的混雜問(wèn)題 授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第278頁(yè) 考點(diǎn)一　培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù) [核心考點(diǎn)通關(guān)] 一、微生物的培養(yǎng)基 1．微生物的培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)要素 來(lái)源 功能 碳源 無(wú)機(jī)碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無(wú)機(jī)物 ①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物 ②既是碳源又是能源(有機(jī)碳源) 有機(jī)碳源 糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等 氮源 無(wú)機(jī)氮源 無(wú)機(jī)氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等 合成含氮的代謝產(chǎn)物 有機(jī)氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白質(zhì)、

7、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物 生長(zhǎng)因子 維生素、氨基酸、堿基 ①酶和核酸的組成成分 ②參與代謝過(guò)程中的酶促反應(yīng) 2.按物理狀態(tài)分類(lèi) 培養(yǎng)基種類(lèi) 特點(diǎn) 用途 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn) 固體培養(yǎng)基 加凝固劑(如瓊脂) 微生物分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏 半固體培養(yǎng)基 觀(guān)察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)、鑒定 3.按功能分類(lèi) 種類(lèi) 制備方法 原理 用途 舉例 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì) 依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的特殊需求或抗性而設(shè)計(jì) 從眾多微生物中分離所需的微生物 加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化

8、學(xué)藥品 產(chǎn)生特定的顏色或其他變化 鑒別不同種類(lèi)的微生物 用伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌 二、消毒與滅菌 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍 消毒 較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對(duì)人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫的液體 化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強(qiáng)烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 燃燒滅菌法 接種工具 干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器 三、大腸桿菌的純化 1．原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)

9、菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。 2．純化微生物的接種方法 比較項(xiàng)目 平板劃線(xiàn)法 稀釋涂布平板法 關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn) ①一系列的梯度稀釋?zhuān)? ②涂布平板法操作 注意事項(xiàng) 每次劃線(xiàn)前后均需灼燒接種環(huán) 稀釋度要足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以增加稀釋度 菌體獲取 在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體 從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體 優(yōu)點(diǎn) 可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落 既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 缺點(diǎn) 不能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板 3.平板劃線(xiàn)操作的

10、注意事項(xiàng) (1)操作第一步即取菌種之前及每次劃線(xiàn)之前都需要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表： 第一次操作 每次劃線(xiàn)之間 劃線(xiàn)結(jié)束 目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線(xiàn)后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線(xiàn)的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，使每次劃線(xiàn)菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 (2)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 (3)第二次及其以后的劃線(xiàn)操作總是從上一次劃線(xiàn)末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 (4)劃線(xiàn)時(shí)

11、最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。 (5)劃線(xiàn)用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。 [針對(duì)訓(xùn)練] 1．甲、乙兩同學(xué)學(xué)習(xí)完微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后，要利用所學(xué)知識(shí)研究水中微生物的情況。 Ⅰ.甲同學(xué)為了檢測(cè)飲用水中是否含有某種細(xì)菌，配制如下培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)： 蛋白胨 10 g 乳糖 5 g 蔗糖 5 g K2HPO4 2 g 蒸餾水 1 000 mL 將pH調(diào)到7.2 (1)該培養(yǎng)基所含有的碳源有________，其功能是 ________________________________________________________________________

12、 ________________________________________________________________________。 (2)該培養(yǎng)基所含有的氮源有________，其功能是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)該培養(yǎng)基除含碳源、氮源外，還有微生物需要的其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是_______________

13、_________________________________________________________。 (4)用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，還需要控制哪些理化條件？________________________________________________________________________。 Ⅱ.乙同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀(guān)察。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題。 (1)乙同學(xué)配制的培養(yǎng)基為_(kāi)_______(物理性質(zhì))培養(yǎng)基，其中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌提供了________和________。 (2)

14、對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)該采用的方法是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)為了盡快觀(guān)察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于______________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種______________作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 解析：Ⅰ.對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、H

15、、O、N的化合物既是碳源，又是氮源，因此蛋白胨既可作為碳源，又可作為氮源。培養(yǎng)微生物需要控制的理化條件有溫度、氧氣濃度和pH等。Ⅱ.調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況，就要計(jì)數(shù)，用固體培養(yǎng)基；蛋白胨來(lái)源于動(dòng)物原料，含有維生素、糖和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在培養(yǎng)基中主要是作為氮源。實(shí)驗(yàn)室的滅菌方法一般有灼燒滅菌法(適合于接種工具的滅菌)、干熱滅菌法(適合于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌)、高壓蒸汽滅菌法(適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌)。要想使微生物快速地繁殖，就要將培養(yǎng)基置于適宜的條件下，特別是溫度，所以要置于恒溫培養(yǎng)箱中，對(duì)照實(shí)驗(yàn)就是要設(shè)置一個(gè)接種了無(wú)菌水的培養(yǎng)基進(jìn)行比較。 答案：Ⅰ.(1)蔗糖、乳糖、蛋白

16、胨　主要用于提供能量以及構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物　(2)蛋白胨　主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物　(3)水、無(wú)機(jī)鹽　(4)溫度、氧氣濃度等 Ⅱ.(1)固體　氮源(碳源不作要求)　碳源　(2)高壓蒸汽滅菌　(3)恒溫培養(yǎng)箱　無(wú)菌水 考點(diǎn)二　微生物的計(jì)數(shù)方法 [核心考點(diǎn)通關(guān)] 1．兩種計(jì)數(shù)方法的比較 比較項(xiàng)目 間接計(jì)數(shù)法(稀釋涂布平板法) 直接計(jì)數(shù)法(顯微計(jì)數(shù)法) 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌 利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容

17、積的樣品中微生物的數(shù)量 公式 每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M C：某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)； V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)； M：稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)：每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù) 缺點(diǎn) 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落 不能區(qū)分細(xì)胞死活 結(jié)果 比實(shí)際值偏小 比實(shí)際值偏大 2.設(shè)置對(duì)照和重復(fù) 比較項(xiàng)目 對(duì)照 重復(fù) 目的 排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響 排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響 實(shí)例 空白對(duì)照：確定培養(yǎng)基制作是否合格 同一稀釋度涂布至少3個(gè)平板 [易混易錯(cuò)] “選擇菌落數(shù)

18、在30～300的平板”的兩個(gè)提醒 用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí)，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)易出現(xiàn)以下誤解： (1)只得到1個(gè)菌落數(shù)在30～300的平板是錯(cuò)誤的。錯(cuò)誤的原因是不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。 (2)得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況： ①不同平板間差異較大，如得到3個(gè)平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”，這也是不正確的，因?yàn)椤?4”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實(shí)驗(yàn)找出原因。 ②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。 可見(jiàn)

19、，并不是只要得到3個(gè)“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無(wú)較大差異，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作合格，才能按照計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。 [針對(duì)訓(xùn)練] 2．圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂蒧_______色。 (2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13

20、、156、462、178和191。 該過(guò)程采取的接種方法是________，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_(kāi)_______×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較 ________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_(kāi)_______，突變基因表達(dá)的蛋白含________個(gè)氨基酸。 解析：(1)脲酶由分解尿素的細(xì)菌產(chǎn)生，故需用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選該類(lèi)微生物。分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶可以將尿素分解

21、成氨，故培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，菌落周?chē)鷮⒊霈F(xiàn)紅色。(2)稀釋涂布平板法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)，在計(jì)數(shù)時(shí)一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。每克樣品中的菌株數(shù)＝(C/V)×M。因培養(yǎng)基上兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落，故統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往較實(shí)際數(shù)目少；而用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，死亡的、活的菌體都計(jì)數(shù)在內(nèi)。(3)乙圖顯示，mRNA在箭頭以前有273個(gè)核苷酸(為91個(gè)密碼子)，箭頭處增加的70個(gè)核苷酸與后續(xù)的AG剛好組成24個(gè)密碼子，后面的UGA為終止密碼。突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含91＋24＝115(個(gè))氨基酸。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)稀釋涂布平板

22、法　1.75　少　(3)UGA　115 考點(diǎn)三　微生物的篩選與鑒別 [核心考點(diǎn)通關(guān)] 1．微生物的鑒別方法 (1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別。 (2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說(shuō)明該種微生物能夠分解尿素。 (3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來(lái)篩選分解纖維素的微生物。 2．篩選微生物的三種方法 (1)單菌落挑取法：利用平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落

23、挑取的方法獲得目的微生物。 (2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。 (3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。 3．篩選微生物的兩個(gè)實(shí)例比較 比較項(xiàng)目 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離 分解纖維素的微生物的分離 方法 利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng) 利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng) 原理 只有分解尿素的細(xì)菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會(huì)而大量繁殖 鑒別 在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指

24、示劑變紅說(shuō)明菌落中的菌體為分解尿素的細(xì)菌 剛果紅染色法，周?chē)霈F(xiàn)透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落 [針對(duì)訓(xùn)練] 3．金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類(lèi)肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板(培養(yǎng)基中添加適量血液)上生長(zhǎng)時(shí)，可破壞菌落周?chē)募t細(xì)胞，使其褪色。圖為定性檢測(cè)鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題： (1)按細(xì)胞結(jié)構(gòu)分類(lèi)，金黃色葡萄球菌屬于________生物，從培養(yǎng)過(guò)程分析，金黃色葡萄球菌可進(jìn)行________呼吸。 (2)7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分包括________________，用7.5%

25、 NaCl肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)的主要目的是____________________________。 (3)操作中在血平板上的接種方法是________，接種操作前后需要對(duì)接種工具進(jìn)行________滅菌。 (4)在制備血平板時(shí)需將pH調(diào)節(jié)至________(填“微酸性”或“微堿性”)后滅菌，待培養(yǎng)基________后，再加入適量血液。按培養(yǎng)基功能分類(lèi)，血平板屬于________培養(yǎng)基。 (5)經(jīng)多次規(guī)范操作、重復(fù)實(shí)驗(yàn)，血平板上均出現(xiàn)________的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應(yīng)商仍認(rèn)為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對(duì)本操作進(jìn)行完善，完善的方案是_______

26、_________________________。 解析：(1)金黃色葡萄球菌是一種細(xì)菌，屬于原核生物。培養(yǎng)過(guò)程無(wú)密閉處理，故它進(jìn)行有氧呼吸。(2)7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基可為微生物提供生長(zhǎng)所需要的碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽。用7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)是為了增加高度耐鹽性的金黃色葡萄球菌的數(shù)量。(3)圖示用的接種工具是接種環(huán)，說(shuō)明在血平板上接種的方法是平板劃線(xiàn)法。接種工具在接種前后都要進(jìn)行滅菌處理。(4)金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)環(huán)境為弱堿性，培養(yǎng)基在滅菌前要先調(diào)節(jié)pH，因金黃色葡萄球菌能破壞紅細(xì)胞，使其褪色，血平板上出現(xiàn)周?chē)嬖谕该魅Φ木?，說(shuō)明有金黃色葡萄球菌，故血平板是鑒別

27、培養(yǎng)基。(5)為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)論的嚴(yán)謹(jǐn)性，應(yīng)增加空白對(duì)照組。 答案：(1)原核　有氧 (2)碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽　增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量 (3)平板劃線(xiàn)法　灼燒 (4)微堿性　冷卻　鑒別 (5)周?chē)嬖谕该魅Α≡O(shè)置不加鮮牛奶但其他操作均相同的對(duì)照組 授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第281頁(yè) 練全國(guó)高考真題——知考查重點(diǎn) 1．(2016·高考全國(guó)卷Ⅰ)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)； ②制作無(wú)菌

28、平板； ③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問(wèn)題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是________。 (2)步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是____________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均

29、值，該做法________(填“正確”或“不正確”)。 解析：(1)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨可為培養(yǎng)基中的微生物提供氮源；制備固體培養(yǎng)基需加入瓊脂。(2)該實(shí)驗(yàn)的目的是了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況，所以需在教室不同高度的位置分別用平板收集微生物即開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間。(3)該實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照組不應(yīng)出現(xiàn)菌落，若空白對(duì)照組出現(xiàn)了菌落，則說(shuō)明此次調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)組的污染情況不能確定，故不能用實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組菌落數(shù)的差值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而應(yīng)重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　瓊脂 (2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間 (3)污染　不正確

30、 2．(2016·高考全國(guó)卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜溶液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用________對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的理由是_________________________________。 (2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有________________和________________。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出________________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量

31、的__________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，由于泡菜濾液中菌的濃度高，因此需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)淠康氖菍⒕奂谝黄鸬娜樗峋稚⒊蓡蝹€(gè)細(xì)胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單菌落。(2)乳酸菌代謝過(guò)程中可產(chǎn)生乳酸，若在培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，則碳酸鈣既可以中和乳酸，又可以在乳酸菌菌落的周?chē)霈F(xiàn)明顯透明圈，據(jù)此可以用于乳酸菌的鑒別。(3)乳酸菌在－20 ℃長(zhǎng)期保存時(shí)，為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷細(xì)胞，在菌液中常需要加入一定量的甘油。 答案：(1)無(wú)菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 (2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具

32、有透明圈 (3)甘油 3．(2015·高考全國(guó)卷Ⅰ)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題： (1)顯微觀(guān)察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈_______染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以________為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 (3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用______

33、__法進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個(gè)溫度中，________℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞________℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 解析：(1)脂肪可用蘇丹Ⅲ染液(或蘇丹Ⅳ染液)進(jìn)行染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，不能用水蒸氣蒸餾法提取，應(yīng)用萃取法加以提取。(2)能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物種子的腐爛物的土壤中，為了選擇培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基上應(yīng)以油脂作為唯一碳源。(3)測(cè)定培養(yǎng)液中的微生物的菌體數(shù)，可在顯

34、微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)；而要測(cè)定活菌數(shù)，則可利用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。(4)酶量需要最多的溫度下，其酶活力最小，即酶活力最小的溫度應(yīng)為45 ℃。三個(gè)溫度下酶活力最大的溫度是40 ℃，但40 ℃不一定是該酶的最適溫度，故應(yīng)圍繞40 ℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 答案：(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　萃取法 (2)油脂 (3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　稀釋涂布平板 (4)45　40 4．(2014·高考新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅰ)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問(wèn)題： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。

35、 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)表)： 酵母膏 無(wú)機(jī)鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示無(wú)。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

36、 ______________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)

37、合物，但并不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。用含有剛果紅的纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，由于纖維素被分解，紅色復(fù)合物無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(3)培養(yǎng)基甲未使用瓊脂，為液體培養(yǎng)基，不能用于分離單菌落。含有纖維素和剛果紅(CR)的培養(yǎng)基可分離和鑒別纖維素分解菌。 答案：(1)纖維二糖　葡萄糖 (2)紅　透明圈 (3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR—纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 5．(2014·高考新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅱ)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量

38、，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； 然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和

39、37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)_______________________________________________________________________。 (2)該小組采用平板劃線(xiàn)法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)________滅菌，在第二次及以后的劃線(xiàn)時(shí)，總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)。這樣做的目的是________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到

40、的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中________的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)_______的利用率。 解析：(1)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，可依據(jù)是否產(chǎn)生菌落確定培養(yǎng)基的滅菌效果是否理想。由樣品中菌株數(shù)計(jì)算公式：(C÷V)×M知：1 mL水樣中菌株數(shù)為(38÷0.1)×100＝3.8×104，故每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×107。(2)利用接種環(huán)接種時(shí)，接種環(huán)需灼燒滅菌。利用平板劃線(xiàn)法分離細(xì)菌時(shí)，在第二次及以后劃線(xiàn)時(shí)，總是從上一次劃線(xiàn)

41、的末端開(kāi)始，可以將聚集的菌體逐步稀釋以便得到單個(gè)菌落。(3)稀釋涂布平板法是用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，故培養(yǎng)后產(chǎn)生的菌落應(yīng)隨機(jī)分布在培養(yǎng)基表面，即B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)液體培養(yǎng)基通過(guò)振蕩可提高溶氧量，同時(shí)使菌體與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，從而提高細(xì)菌的生長(zhǎng)速度。 答案：(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107 (2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落 (3)B (4)溶解氧　營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 6．(2013·高考新課標(biāo)全國(guó)卷Ⅱ)臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的

42、實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。 回答下列問(wèn)題： (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當(dāng)稀釋?zhuān)胈_______法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長(zhǎng)，布滿(mǎn)平板。 (3)為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素A________；含B的濾紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素B_____

43、___；含C的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小，說(shuō)明________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； 含D的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群珹的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。 (4)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素________。 解析：(1)將細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基上的方法

44、有平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。(2)由(1)獲取的致病菌單菌落，經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋?zhuān)猛坎挤ń臃N至固體培養(yǎng)基表面進(jìn)一步培養(yǎng)。(3)在檢測(cè)致病菌對(duì)抗生素的敏感性實(shí)驗(yàn)中，若含A種抗生素的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明周?chē)闹虏【劳?，該致病菌?duì)A種抗生素敏感；若含B種抗生素的濾紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明致病菌對(duì)B種抗生素不敏感；若含C種抗生素的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小，說(shuō)明該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱；若含D種抗生素的濾紙片周?chē)该魅σ脖群珹的小，說(shuō)明A、B、C、D四種抗生素的殺菌效果最顯著的為A。透明圈中出現(xiàn)的菌落為耐藥菌。(4)根據(jù)(3)中分析，為達(dá)到抗菌目的最好選用抗生素A。 答案：(1)劃

45、線(xiàn)　稀釋涂布(或涂布) (2)涂布 (3)敏感　不敏感　該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱　耐藥菌 (4)A 練各地市模擬——知命題熱點(diǎn) 7．(2017·山東濰坊模擬)地球上植物產(chǎn)生的纖維素中有40%～60%被土壤中的某些微生物利用，從土壤中分離并研究這些微生物有利于人們更有效地利用植物秸稈中的纖維素。請(qǐng)回答： (1)分離纖維素分解菌，宜從________________的土壤中取樣。纖維素分解菌之所以能夠利用纖維素，是因?yàn)槠浼?xì)胞內(nèi)含有_____________________________。 (2)培養(yǎng)基除含有碳源、氮源、水和多種無(wú)機(jī)鹽外，還應(yīng)含有____________。其

46、中，碳源主要為_(kāi)______________________________________。 對(duì)配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，目的是_______________________。 (3)纖維素分解菌純化培養(yǎng)中常用的接種方法有________________。在添加剛果紅的培養(yǎng)基上，可通過(guò)是否產(chǎn)生________來(lái)篩選纖維素分解菌。 (4)從纖維素分解菌中提取纖維素酶，可采用________法，如果采用________法對(duì)該細(xì)菌進(jìn)行固定，也可不經(jīng)過(guò)酶的提取和分離等操作即可實(shí)現(xiàn)纖維素發(fā)酵。 解析：(1)腐殖質(zhì)較多的土壤中富含纖維素，篩選纖維素分解菌應(yīng)該從這樣的環(huán)境中進(jìn)行取樣。纖維素分解

47、菌細(xì)胞內(nèi)含有纖維素酶，能夠?qū)⒗w維素分解為葡萄糖而加以利用。(2)微生物的生長(zhǎng)需要碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等，有的還需要某些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(生長(zhǎng)因子)。篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中的碳源主要為纖維素。對(duì)培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌的目的是殺死細(xì)菌的芽孢。(3)纖維素分解菌純化培養(yǎng)中常用的接種方法有平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。纖維素與剛果紅染液反應(yīng)呈紅色，纖維素分解菌能夠分解培養(yǎng)基中的纖維素，從而使添加剛果紅染液的培養(yǎng)基出現(xiàn)透明圈，可以通過(guò)透明圈的產(chǎn)生與否來(lái)篩選纖維素分解菌。(4)纖維素酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，從纖維素分解菌中提取纖維素酶，可采用電泳法(或凝膠色譜法)。采用包埋法對(duì)該微生物細(xì)胞進(jìn)行固定，可不經(jīng)過(guò)酶

48、的提取和分離等操作實(shí)現(xiàn)纖維素發(fā)酵。 答案：(1)富含纖維素　纖維素酶 (2)某些特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(生長(zhǎng)因子)　纖維素　殺死細(xì)菌的芽孢 (3)平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法　透明圈 (4)電泳(或凝膠色譜)　包埋 8．(2017·四川成都測(cè)試)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉嗜熱菌樣品中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如下圖所示： (1)進(jìn)行①過(guò)程的目的是________，②過(guò)程所使用的接種方法是________法。 (2)從用途上來(lái)說(shuō)，Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，配制時(shí)僅以________作為唯一碳源；從物理狀態(tài)上來(lái)說(shuō)，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基屬于固

49、體培養(yǎng)基，配制時(shí)應(yīng)加入________作為凝固劑。 (3)Ⅰ、Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是________。一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用________法滅菌。 (4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，應(yīng)從Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上挑出________的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上。 解析：(1)分析題圖可知，①過(guò)程是梯度稀釋?zhuān)康氖菍?duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)虎谶^(guò)程是用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。(2)本題實(shí)驗(yàn)的目的是篩選高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，從用途上來(lái)說(shuō)，Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，本培養(yǎng)基以淀粉為唯一碳源；從物理狀態(tài)上來(lái)說(shuō)，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)應(yīng)加入瓊脂作為凝固劑。(3)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH

50、，然后再進(jìn)行滅菌，如果先滅菌再調(diào)節(jié)pH，在調(diào)節(jié)pH時(shí)會(huì)污染培養(yǎng)基；一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。(4)能分解淀粉的嗜熱菌在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)纬赏该魅?，透明圈越大淀粉酶的活性越?qiáng)，所以要從Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上挑出透明圈大的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上。 答案：(1)稀釋　稀釋涂布平板 (2)選擇　淀粉　瓊脂 (3)先調(diào)節(jié)pH，后滅菌　高壓蒸汽滅菌 (4)透明圈大 授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第381頁(yè) 1．據(jù)報(bào)道，從部分企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出葡萄球菌超標(biāo)，“細(xì)菌門(mén)”事件引起公眾的普遍關(guān)注。葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基

51、上形成的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。 (1)某興趣小組欲檢測(cè)某果汁類(lèi)食品中是否含有葡萄球菌，請(qǐng)幫他們完善下列實(shí)驗(yàn)步驟。 ①配制培養(yǎng)基：稱(chēng)取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后調(diào)節(jié)pH，分裝到錐形瓶后進(jìn)行________，在無(wú)菌狀態(tài)下加入卵黃液(100 mL 10%滅菌NaCl溶液中加一個(gè)雞蛋黃，振蕩均勻)搖勻后立即倒平板。 ②接種：取待檢果汁2.5 mL加入22.5 mL滅菌生理鹽水中，制成接種樣液。 實(shí)驗(yàn)組：將接種樣液用________法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上。 對(duì)照組：將________接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上或不

52、接種作為空白對(duì)照。 將上述接種后的培養(yǎng)皿同時(shí)放在36 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)48 h。 ③觀(guān)察：觀(guān)察培養(yǎng)基表面________________________________。 (2)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨為葡萄球菌生長(zhǎng)和繁殖提供________。葡萄球菌能耐受高濃度的NaCl溶液，所以在配制培養(yǎng)基時(shí)加入高濃度的NaCl溶液可以將它分離出來(lái)，此培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (3)若要統(tǒng)計(jì)某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用________法。 解析：(1)由于葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)，所以該實(shí)驗(yàn)的觀(guān)察指標(biāo)為培養(yǎng)基表面是否

53、出現(xiàn)周?chē)腥闈岘h(huán)的菌落。(2)選擇培養(yǎng)基可以使所需要的細(xì)菌生長(zhǎng)，抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)。(3)統(tǒng)計(jì)某土壤樣品中活菌數(shù)目可采用稀釋涂布平板法。 答案：(1)①滅菌　②平板劃線(xiàn)　無(wú)菌生理鹽水?、凼欠癯霈F(xiàn)周?chē)腥闈岘h(huán)的菌落　(2)碳源和氮源　選擇　(3)稀釋涂布平板 2．某興趣小組的同學(xué)為調(diào)查一牛奶制品是否過(guò)期，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：制備培養(yǎng)基→滅菌→接種及培養(yǎng)→菌落觀(guān)察計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答： (1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌提供了________________和________________。 (2)配制培養(yǎng)基時(shí)，原料稱(chēng)量溶解之后，要進(jìn)行________，培養(yǎng)基中為防止雜菌污染，要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)

54、皿等進(jìn)行________，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)。 (3)本實(shí)驗(yàn)樣品接種時(shí)最好采用________法。 (4)將接種了牛奶的平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種________作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 (5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，如果統(tǒng)計(jì)到多種菌落，則說(shuō)明 ________________________________________________________________________ ____________________________________________________

55、____________________。 解析：(1)不同的培養(yǎng)基都含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源，所以培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了氮源、碳源。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)，原料稱(chēng)量溶解之后，首先要調(diào)節(jié)pH。為防止雜菌污染，要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，接種后，必須將培養(yǎng)皿進(jìn)行倒置。(3)因?yàn)榇藰悠酚霉腆w培養(yǎng)基接種且需要對(duì)菌落計(jì)數(shù)，所以接種最好采用稀釋涂布平板法。(4)應(yīng)將接種了牛奶的平板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種無(wú)菌水作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(5)如果培養(yǎng)基中統(tǒng)計(jì)到多種菌落，說(shuō)明牛奶已經(jīng)過(guò)期。 答案：(1)氮源

56、　碳源　(2)調(diào)節(jié)pH　高壓蒸汽滅菌　倒置　(3)稀釋涂布平板　(4)恒溫培養(yǎng)箱　無(wú)菌水　(5)樣品中有多種細(xì)菌，已經(jīng)過(guò)期變質(zhì) 3．燒傷病人容易感染綠膿桿菌，引起化膿性感染，比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類(lèi)抗生素都是非常經(jīng)典的抗綠膿桿菌的藥物。臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，從病人身上獲取少量樣本，按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定該病人體內(nèi)的綠膿桿菌對(duì)不同抗生素的敏感性。 (1)獲取綠膿桿菌單菌落：配制適于綠膿桿菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分一般含有________、________、水和無(wú)機(jī)鹽，調(diào)節(jié)pH至7，滅菌處理，待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃時(shí)，在_______

57、_________附近倒平板。經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得單菌落。 (2)檢測(cè)綠膿桿菌對(duì)不同抗生素的敏感性：取該單菌落適當(dāng)稀釋?zhuān)胈_______法接種于固體培養(yǎng)基表面，使其均勻生長(zhǎng)，布滿(mǎn)平板。將分別含等劑量的比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類(lèi)抗生素的同大小的濾紙片均勻置于該平板的不同位置，適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，結(jié)果是含不同抗生素的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，這說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)上述抗生素________；含頭孢菌素的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群懒_培南的小，這說(shuō)明____________________________；含比阿培南、碳青霉烯類(lèi)的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群懒_培南的小，且比阿培南透明

58、圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，請(qǐng)推測(cè)此菌落產(chǎn)生的可能原因：一是________________，二是________________。 (3)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗綠膿桿菌的目的，對(duì)于該患者來(lái)說(shuō)最好應(yīng)選用抗生素____________。 解析：(1)綠膿桿菌為異養(yǎng)型微生物，培養(yǎng)基中需要加入碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等成分。接種時(shí)為防止污染應(yīng)在酒精燈火焰附近的無(wú)菌區(qū)接種。(2)含等劑量、不同種抗生素處理的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)不同種抗生素均敏感。含頭孢菌素的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群懒_培南的小，說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)頭孢菌素的敏感性比對(duì)美羅培南的弱。比阿培南的透明圈中出現(xiàn)一個(gè)菌落的可能原因是被其

59、他雜菌污染或綠膿桿菌產(chǎn)生了耐藥性突變。(3)綠膿桿菌對(duì)美羅培南的敏感性最強(qiáng)，患者服用后抑制綠膿桿菌的效果最好。 答案：(1)碳源　氮源　酒精燈火焰　(2)涂布　敏感　綠膿桿菌對(duì)頭孢菌素的敏感性比對(duì)美羅培南的弱　雜菌污染　抗比阿培南的綠膿桿菌(或綠膿桿菌產(chǎn)生耐藥性突變)形成的菌落　(3)美羅培南 4．(2017·江西贛中南五校聯(lián)考)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)表格和所學(xué)知識(shí)回答下列相關(guān)問(wèn)題。 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示劑 瓊脂 含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾

60、水定容到1 000 mL (1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于________________________________________________________________________。 (2)若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。若要用上述培養(yǎng)基來(lái)篩選出土壤中的尿素分解菌，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分必需怎樣更改？____________，并用____________作為指示劑。 (3)在微生物培養(yǎng)的過(guò)程中，為防止雜菌污染，需要對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和________。 (4)圖1和圖2是培養(yǎng)

61、某細(xì)菌的結(jié)果圖，其對(duì)應(yīng)的接種方法分別是：________________和________________，這兩種方法接種后培養(yǎng)基上都可以得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖所形成的________。圖1所用的接種方法可用來(lái)對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測(cè)定微生物數(shù)目的另一種方法是________。 (5)以下過(guò)程中所利用的主要微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌較相似的有________。 A．制作果酒　　　　　 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳 解析：(1)大腸桿菌只能從環(huán)境中攝取有機(jī)物，不能自己合成有機(jī)物，屬于分解者。(2)該培養(yǎng)基中含有指示劑，屬于鑒別培養(yǎng)基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微

62、生物不能，因此可將培養(yǎng)基中的蛋白胨改為尿素用于篩選土壤中的尿素分解菌，并用酚紅作為指示劑，尿素分解菌分解尿素產(chǎn)生了NH3可使酚紅變紅。(3)培養(yǎng)微生物時(shí)，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿需要滅菌，操作者雙手需要進(jìn)行消毒。(4)圖1采用的是稀釋涂布平板法，圖2采用的是平板劃線(xiàn)法。單個(gè)微生物細(xì)胞繁殖所形成的細(xì)胞群叫菌落。(5)A、B、C、D中所用到的微生物主要是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大腸桿菌和乳酸菌都是原核細(xì)胞，結(jié)構(gòu)相似。 答案：(1)分解者　(2)鑒別　將蛋白胨改成尿素　酚紅　(3)滅菌　消毒　(4)稀釋涂布平板法　平板劃線(xiàn)法　菌落　顯微鏡直接計(jì)數(shù)法　(5)BC 5．酒精濃度過(guò)高會(huì)抑制酵母菌的

63、生長(zhǎng)繁殖，影響酒精產(chǎn)量。為此，研究人員將酒精耐受基因轉(zhuǎn)入野生型酵母菌中，經(jīng)篩選得到了耐高濃度酒精的酵母菌。過(guò)程如圖甲所示，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題： (1)通過(guò)篩選得到耐高濃度酒精酵母菌的技術(shù)是________。②、③過(guò)程需要重復(fù)幾次，目的是________________________。某同學(xué)嘗試過(guò)程③的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是________。 (2)為證明分離純化得到的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量，可將等量的________________________和耐高濃度酒精的酵母菌分別接種于含等量葡萄糖的A、B兩組發(fā)酵裝置中，在________℃條件下_

64、_______(填“密閉”或“充氣”)培養(yǎng)。一段時(shí)間后取樣，用________檢測(cè)，若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為_(kāi)_______________________________，則說(shuō)明耐高濃度酒精的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量。 解析：(1)本題通過(guò)篩選得到耐高濃度酒精酵母菌的技術(shù)是基因工程(轉(zhuǎn)基因技術(shù))。②、③過(guò)程需要重復(fù)幾次，目的是進(jìn)一步分離純化獲得耐酒精能力強(qiáng)的酵母菌。某同學(xué)嘗試過(guò)程③的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是稀釋涂布平板法。 (2)為證明分離純化得到的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量，可將等量的野生型酵母菌和耐高濃度酒精的酵母菌分別接種于含等量葡萄糖的A、B兩組發(fā)酵裝置中，在

65、18～25 ℃條件下密閉培養(yǎng)。一段時(shí)間后取樣，用重鉻酸鉀檢測(cè)酒精，若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為B組的灰綠色比A組深，則說(shuō)明耐高濃度酒精的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量。 答案：(1)基因工程(轉(zhuǎn)基因技術(shù))　進(jìn)一步分離純化獲得耐酒精能力強(qiáng)的酵母菌　稀釋涂布平板法　(2)野生型酵母菌　18～25　密閉　重鉻酸鉀　B組的灰綠色比A組深 6．纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)在篩選纖維素分解菌的過(guò)程中，通常用________染色法，這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行篩選。甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于(　　) A．③ B．①② C．②③ D．

66、①②③ (2)乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，與分離醋酸菌相比，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營(yíng)養(yǎng)不同，最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是________。該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目________。 (3)丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過(guò)程中，為了抵制外界酸、堿對(duì)酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加________。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對(duì)照？________________________________________________________________________。 解析：(1)剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(2)牛胃是一個(gè)無(wú)氧的環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌培養(yǎng)條件有所不同。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上只觀(guān)察到一個(gè)菌落，因此活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比實(shí)際的偏小。(3)探究最適溫度可設(shè)置一系列的溫度梯度相互對(duì)照，其他無(wú)關(guān)變量保持相同且適宜。 答案：(1)剛果紅　A　(2)保證無(wú)氧環(huán)境　小(低)　(3)緩沖溶液　不同的溫度梯度之間相互