《分析化學(xué)課件：第21章 高效液相色譜法》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《分析化學(xué)課件：第21章 高效液相色譜法（22頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、分析化學(xué)分析化學(xué)第第章章 高效液相色譜法高效液相色譜法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC 70年代迅速發(fā)展年代迅速發(fā)展 不揮發(fā)有機物約占不揮發(fā)有機物約占70% 80年代以來年代以來HPLC 文獻量文獻量 21%（89年）年） 儀器銷售量儀器銷售量 25%（12 億）（億）（89年）年） 應(yīng)用領(lǐng)域應(yīng)用領(lǐng)域 拓展（化工、環(huán)保、臨床、藥品、生命）拓展（化工、環(huán)保、臨床、藥品、生命） 超過超過 GCGC第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC211 高效液相

2、儀高效液相儀212 固定相和流動相固定相和流動相213 色譜峰擴展及其影響因素色譜峰擴展及其影響因素214 高效液相色譜法和主要分離類型高效液相色譜法和主要分離類型215 超臨界流色譜超臨界流色譜第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC1 高效液相色儀高效液相色儀2 固定相和流動相固定相和流動相 3 高效液相色譜法和主要分離類型高效液相色譜法和主要分離類型4 超臨界流體色譜超臨界流體色譜第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀單柱塞泵結(jié)構(gòu)示意圖單柱塞泵結(jié)構(gòu)示意圖

3、 第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 1、儀器結(jié)構(gòu) HPLC與與GC比較比較 a. 柱柱 長長:10:105050cm cm 內(nèi)徑內(nèi)徑:2:25 5mmmm 微柱微柱 填充柱填充柱 微微 HPLC 柱柱 0.51.0 m m 毛細管毛細管 HPLC 柱柱 100500 m 納級納級 HPLC 柱柱 10100 m 拉制拉制 HPLC 柱柱 50200m 開管開管 HPLC 柱柱 510m第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 2、掌握要點、掌握要點 微柱的優(yōu)越性微柱的優(yōu)越性：1 1、消耗少（樣、流動

4、相、固定相）消耗少（樣、流動相、固定相）2 2、靈敏（溶質(zhì)在柱上稀釋比下降）、靈敏（溶質(zhì)在柱上稀釋比下降）3 3、分離效率高（可裝長柱）、分離效率高（可裝長柱）4 4、操作條件易選擇、操作條件易選擇5 5、其它分離聯(lián)用易、其它分離聯(lián)用易第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 2、掌握要點、掌握要點b b、檢測系統(tǒng)、檢測系統(tǒng) 常用常用UV光度檢測（包括它的現(xiàn)代方法）光度檢測（包括它的現(xiàn)代方法） 引人注目：熒光檢測引人注目：熒光檢測 選擇性選擇性 10-910-11 g/ml 質(zhì)譜檢測質(zhì)譜檢測 通用性通用性 10-8 g/ml 蛋白質(zhì)分析蛋白質(zhì)分析 生

5、物質(zhì)譜生物質(zhì)譜第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 2、掌握要點、掌握要點C C、梯度林洗裝置梯度林洗裝置 作用：作用： 讓流動相的組成隨時間而改變，以調(diào)讓流動相的組成隨時間而改變，以調(diào)節(jié)流動相的極性、離子強度或節(jié)流動相的極性、離子強度或pHpH，使樣品使樣品組分的相對保留值得以改變，從而提高分組分的相對保留值得以改變，從而提高分離效率。離效率。 與與GCGC的程序升溫技術(shù)比較的程序升溫技術(shù)比較第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 21-1 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 2、掌握要點、掌握要點 1 1、固定相分類、固定相分類 材料的剛性材

6、料的剛性 ( ( 剛性固體、硬質(zhì)凝膠）剛性固體、硬質(zhì)凝膠） 固相填料的疏松（薄殼型微珠載體，全多孔型載體）固相填料的疏松（薄殼型微珠載體，全多孔型載體） 形狀（球形、無定形）形狀（球形、無定形） 2 2、流動相、流動相 選擇溶劑要求選擇溶劑要求 第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法212 固定相和流動相固定相和流動相 1 分配色譜（分配色譜（LLC） 2 吸附色譜吸附色譜 （LSC） 3 鍵合相色譜鍵合相色譜 4 離子交換色譜離子交換色譜 5 離子對色譜離子對色譜 6 凝膠滲透色譜凝膠滲透色譜 分離原理分離原理 分離類型選擇分離類型選擇 正相色譜與反相色譜的概念正相色譜與反相色譜的概念

7、第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法213 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型4 離子交換色譜離子交換色譜陰離子交換色譜 ：XRY Y + RX 陽離子交換色譜中 ：X RY Y+ RX 第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 213 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型離子交換的平衡式可用下式表達離子交換的平衡式可用下式表達：RBr + A RAr + B平衡常數(shù)或分離系數(shù)：平衡常數(shù)或分離系數(shù)： Kd = BAr / ABr和離子交換和離子交換劑相結(jié)合的劑相結(jié)合的洗脫離子洗脫離子BA為溶液中的試樣組分離子為溶液中的試樣組分離子B為流動相

8、為流動相-洗脫離子洗脫離子溶液中的試樣組分離子溶液中的試樣組分離子第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 213 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型4.離子交換色譜離子交換色譜5 離子對色譜離子對色譜A+水相B水相 （AB）有機相 KAB =A+B-有機相 / A+水相 B-水相 k =A+B-有機相 / A+水相= KAB B-水相 萃取平衡常數(shù)萃取平衡常數(shù)溶質(zhì)的分配系數(shù)溶質(zhì)的分配系數(shù)溶質(zhì)組分溶質(zhì)組分配對陰離子配對陰離子第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 213 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型正相離子對分配色譜：正相離子對分配色

9、譜： 水溶液作為固定水溶液作為固定 液，對離子存在于含液，對離子存在于含水固定相中，水固定相中， 有機溶劑為流動相有機溶劑為流動相. .反相離子對分配色譜：反相離子對分配色譜： 有機溶劑作為固定液，對離子存在于含水有機溶劑作為固定液，對離子存在于含水流動相中流動相中.第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 213 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型5.離子對色譜離子對色譜1、超臨界流體、超臨界流體 指物質(zhì)在高于指物質(zhì)在高于臨界點，即高臨界點，即高于其臨界壓力于其臨界壓力和臨界溫度時和臨界溫度時的一種物態(tài)。的一種物態(tài)。 相圖相圖 S L GS L G第第21章章 高效

10、液相色譜高效液相色譜 法法214 超臨界流體色譜超臨界流體色譜第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 214 超臨界流體色譜超臨界流體色譜2 2、超臨界流體色譜（、超臨界流體色譜（SFCSFC）特點特點 超臨界流體的超臨界流體的特點特點超臨界流體的密度、擴散系數(shù)和粘度超臨界流體的密度、擴散系數(shù)和粘度等性質(zhì)剛好介于氣體和液體之間等性質(zhì)剛好介于氣體和液體之間物態(tài)物態(tài) 密度密度 粘度粘度 擴散系數(shù)擴散系數(shù)D (gml-1) (PaS) (cm2s-1)氣體，氣體， (0.6-2.0)10-3 (1-3)105 0.10.40.1MPa,15-30超臨界流體，超臨界流體，0.2-0.5 (1-3

11、)105 0.7103Tc, Pc液體，液體， 0.6-1.6 (0.2-3)103 (0.2-2)10515-30 超臨界流體色譜（超臨界流體色譜（SFCSFC）特點特點 比比HPLC具有更高的分離效率。具有更高的分離效率。 SFC使用溫度較低，可以分離熱使用溫度較低，可以分離熱穩(wěn)定性差、高分子量的化學(xué)物。穩(wěn)定性差、高分子量的化學(xué)物。 SFC還可以與還可以與GC和和HPLC的大多的大多數(shù)的通用型或選擇型的檢測器相數(shù)的通用型或選擇型的檢測器相匹配匹配。第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 214 超臨界流體色譜超臨界流體色譜3、 儀器儀器第第21章章 高效液相色譜法高效液相色譜法 21

12、4 超臨界流體色譜超臨界流體色譜3、應(yīng)用、應(yīng)用 超臨界流體的特殊性，使得它有自己特點，是超臨界流體的特殊性，使得它有自己特點，是GC和和HPLC 的重要補充的重要補充，它可以分離分析氣相色，它可以分離分析氣相色譜和高效液相色譜難以分離檢測組分，或使分離分譜和高效液相色譜難以分離檢測組分，或使分離分析更為方便和有效。析更為方便和有效。 超臨界流體色譜法被廣泛地應(yīng)用于超臨界流體色譜法被廣泛地應(yīng)用于聚合物、油聚合物、油脂類物質(zhì)、環(huán)境樣品、天然產(chǎn)物、藥物等脂類物質(zhì)、環(huán)境樣品、天然產(chǎn)物、藥物等物質(zhì)的分物質(zhì)的分離分析。離分析。第第21章章 高效液相色譜高效液相色譜 法法 214 超臨界流體色譜超臨界流體色譜