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1、灰樹花工廠化栽培和開發(fā)研究技術(shù)總結(jié),A前言B材料與方法C結(jié)果與討論,前言,灰樹花(Crifolafrondosa)是經(jīng)常發(fā)生于我國東北地區(qū)、高寒地帶的一種優(yōu)質(zhì)食用菌,有獨(dú)特的營養(yǎng)和風(fēng)味?;覙浠ㄗ訉?shí)體形似盛開的蓮花,扇形菌蓋重重疊,又名舞茸、粟子蘑、蓮花菇。鮮嫩的子實(shí)體香味濃郁,味道鮮美,口感極佳,其營養(yǎng)豐富,富含灰樹花多糖、維生素、多種必需氨基酸和微量元素,經(jīng)常食用可預(yù)防和治療肝臟系統(tǒng)及胃腸道疾病。同時(shí)在日本從子實(shí)體提取的灰樹花多糖用作抗癌藥品。,所以灰樹花是一種具有很高開發(fā)價(jià)值的珍稀食藥用菌。日本料理盛行此菇。灰樹花野生量極少,幾乎不能形成商品。1974年日本進(jìn)行人工栽培獲得成功,80年代研
2、究成功了工廠化周年性栽培。我國最早于1983年由浙江慶元引種栽培,目前仍保留在依靠自然條件栽培,一年一次的手工操作家庭作坊式生產(chǎn)水平。由于受氣溫影響,產(chǎn)量不穩(wěn)定,雜菌污染,嚴(yán)重導(dǎo)致成品率低、品質(zhì)差,無法同國際的同行業(yè)進(jìn)行競爭。,目前國內(nèi)尚無工廠化栽培灰樹花的先例。本項(xiàng)目旨在開發(fā)研究灰樹花在食用菌新品種,通過引種和DNA種性鑒定及生物育種技術(shù),選育出適于工廠化栽培的灰樹花品種,研究制訂安全、衛(wèi)生的標(biāo)準(zhǔn)化工廠化生產(chǎn)工藝。通過對鮮菇保鮮技術(shù)的研究、延長鮮菇的貯藏時(shí)間,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。同時(shí)進(jìn)行灰樹花在品種生產(chǎn)示新,實(shí)現(xiàn)新時(shí)期農(nóng)民增收。,材料與方法,一、供試灰樹花品種資源二、灰樹花品種DNA提取及RAP
3、D反應(yīng)三、培養(yǎng)料配方四、栽培容器五、灰樹花菇生育條件六、原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測定,供試灰樹花品種資源,供試杏鮑菇品種資源分別從日本、韓國、美國、臺(tái)灣、福建、等國家及地區(qū)收集、引進(jìn),共11個(gè)品種,編號為“灰1號”至“灰11號”。保藏培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200克,葡萄糖20克,瓊脂19-20克,水1000毫升,磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀2克。,灰樹花品種DNA提取及RAPD反應(yīng),選擇“灰2號”、“灰3號”、“灰4號”、“灰9號”、“灰14號”菌種,編號依次為1,2,3,4,5。菌株經(jīng)PDY液體培養(yǎng)后,過濾收集各個(gè)菌株的菌絲體,采用CTAB方法提取各菌株的DNA,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定,稀釋后
4、進(jìn)行RAPD。,DNAmarker選用上海鼎國生物技術(shù)發(fā)展中心DGL2000,共采用32個(gè)上海生工生物技術(shù)公司的RAPD隨機(jī)引物進(jìn)行RAPD擴(kuò)增,其中共有21個(gè)引物有擴(kuò)增條帶。以其中的18個(gè)隨機(jī)擴(kuò)增引物擴(kuò)增的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)片段的有無,用NT-SYS程序中的Simqual軟件算出菌株間遺傳相關(guān)性;用平均連鎖聚類分析方法(UnweightedPairGroupMethodArithmeticClusteringUPGMA)進(jìn)行聚類分析,構(gòu)建樹狀圖譜。,培養(yǎng)料配方試驗(yàn),一、木屑32.5%;棉籽殼32.5%;麩皮15%;玉米粉10%;泥土10%二、木屑37.5%棉籽殼37.5%;麩皮15%;玉米粉10%;保
5、水劑適量三、玉米芯25%;棉籽殼25%;木屑25%;麩皮15%;玉米粉10%;保水劑適量,栽培容器試驗(yàn),大袋:4132cm中袋:4124cm小袋:4817cm大瓶:1100毫升小瓶:850毫升,灰樹花菇生育條件試驗(yàn)培養(yǎng)條件生育條件,溫度:22-23C濕度:70-75%CO2:2500ppm光照:無培養(yǎng)時(shí)間:3035天,溫度:22-23C濕度:85-90%CO2:1500ppm光照:300LUX左右培養(yǎng)時(shí)間:1520天,原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測定結(jié)果,隨機(jī)抽取灰樹花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽殼、米糠、木屑送上海市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所測重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量,同時(shí)跟蹤
6、檢測用上述原料栽培的灰樹花產(chǎn)品的重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量。,結(jié)果與分析,一、灰樹花品種資源的收集、選育二、灰樹花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究三、灰樹花工廠化栽培容器研究四、灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件五、灰樹花工廠化生產(chǎn)病蟲害防治技術(shù)研究六、灰樹花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù)七、灰樹花品種生產(chǎn)示范,灰樹花品種資源的收集、選育,表1:不同灰樹花品種栽培比較,圖一:隨機(jī)引物7擴(kuò)增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker,菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標(biāo)記依次為2kb,1600bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100
7、bp,圖二:隨機(jī)引物8擴(kuò)增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker,菌株5,菌株4,菌株3,菌株2,菌株1分子量標(biāo)記依次為2kb,1600bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp,圖三:隨機(jī)引物42擴(kuò)增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker,菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標(biāo)記依次為2kb,1600bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp,圖四:不同灰樹花品種DNA遺傳相關(guān)性聚類樹狀圖譜,灰樹花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究,表2:不同培養(yǎng)料配方的灰樹花產(chǎn)質(zhì)量,灰樹花工廠化栽培容器研
8、究,表3:不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰樹花的產(chǎn)量,表4:不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰樹花的產(chǎn)量,灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件,溫度:菌絲體生長:23+1;原基形成子實(shí)體生長(開片)1617濕度:菌絲體生長:培養(yǎng)料含水量63+2%;空氣相對濕度70%左右。原基形成:空氣相對濕度8085%;子實(shí)體生長(開片):空氣相對濕度8590%CO2濃度:菌絲體生長3000ppm以下;原基形成子實(shí)體生長(開片)1000ppm以下,原基形成:子實(shí)體生長(開片):1000ppm以內(nèi)。CO2濃度過高,開片不良,易造成鹿角狀畸形子實(shí)體。光照:菌絲體生長不需要光照;菌絲體長滿容器后50100勒克司,弱光誘導(dǎo)7天左右。
9、原基形成300勒克司左右;子實(shí)體生長(開片)5001000勒克司。光照不足,光照色澤淡,產(chǎn)量低。,灰樹花工廠化生產(chǎn)病蟲害防治技術(shù)研究,通過采用脈動(dòng)式真空高壓蒸汽滅菌技術(shù),徹底殺滅培養(yǎng)基質(zhì)中的病原菌,大大改善了固體培養(yǎng)料滅菌的效果使菌種生產(chǎn)成品率大大提高。采用低溫等離子空氣滅菌技術(shù)及空氣層流凈化技術(shù),在生產(chǎn)工序中主要的場所,科學(xué)合理放置5臺(tái)等離子動(dòng)態(tài)空氣潔凈器,不僅能直接達(dá)到滅菌除塵的目的,并能去除空氣中有害、有毒氣體和異物,在機(jī)器開啟的情況下,能夠進(jìn)行正常作業(yè),無須采用熏蒸和其他化學(xué)消毒方法。不僅保證了接種的成品率,而且保障操作人員安全衛(wèi)生。,因?yàn)榛覙浠ǖ墓S化生產(chǎn)在國內(nèi)尚無先例,我們經(jīng)過反復(fù)
10、試驗(yàn)證明:在灰樹花黑色蜂窩狀原基形成之前,是感染空氣中細(xì)菌和綠霉菌污染的關(guān)鍵時(shí)間,為此我們利用灰樹花生育階段的生長優(yōu)勢并給以最適應(yīng)灰樹花生長發(fā)育的條件,在灰樹花菌絲體生長階段完成之后,適時(shí)進(jìn)行弱誘導(dǎo),使之菌絲墊形成特色并充分扭結(jié)成黑色蜂窩狀原基后,打開瓶蓋給予充足的空氣。栽培過程中,通過調(diào)節(jié)栽培室空氣濕度控制工藝,有效地降低了10%左右的雜菌侵染率。,灰樹花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù),表5主要材料及產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果,灰樹花品種生產(chǎn)示范,選擇上海郊區(qū)的南匯匯侖食用菌公司作為生產(chǎn)示范基地,分別于2003年和2004年進(jìn)行了袋栽灰樹花工廠化生產(chǎn)技術(shù)示范。生產(chǎn)示范試驗(yàn)基地菇房設(shè)施采用了彩鋼板夾芯保溫菇房,并配備了溫度、濕度、光照、通氣自動(dòng)控制系統(tǒng),超聲波加濕器,制冷及加熱系統(tǒng)。栽培容器采用透氣聚丙烯塑料袋。進(jìn)行了二次生產(chǎn)示范試驗(yàn)。試驗(yàn)選用“灰3號”菌種,配方2,生產(chǎn)2760袋。在適宜灰樹花生長的溫度、濕度、光照、通氣條件下培養(yǎng)、出菇,示范試驗(yàn)結(jié)果灰樹花原基分化率為90%,平均每袋產(chǎn)量達(dá)到250克,達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)。,