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1、2019/7/3,1,第一篇 微生物學(xué)基礎(chǔ),第3章 消毒與滅菌 第一節(jié) 物理消毒滅菌法 第二節(jié) 化學(xué)消毒滅菌法 第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,2019/7/3,2,無菌操作基本技術(shù),滅菌 接種,2019/7/3,3,滅菌(sterilization)：殺滅或去除物體上所有微生物的方法，包括芽胞。 消毒(disinfection)：指殺死物體上病原微生物的方法，芽胞或非病原微生物可能仍存活。 用于消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。 防腐(antisepsis)：體外防止或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。細(xì)菌一般不死亡。 用于防腐的藥品稱為防腐劑(antiseptics)。,第一節(jié) 常用

2、術(shù)語和概念,2019/7/3,4,抑菌(bacteriostasis):抑制細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)繁殖的方法。 常用的抑菌劑（bacteriostat）是一些抗生素， 能可逆性抑制細(xì)菌的繁殖，但不直接殺死細(xì)菌 無菌(asepsis):指沒有活菌的意思。 無菌操作 (antiseptic technique)：指防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。 清潔和凈化：減少微生物數(shù)量或活性的方法。,2019/7/3,5,第二節(jié) 消毒滅菌方式 一、物理消毒滅菌法,熱力滅菌法 干熱滅菌法 濕熱滅菌法 光線與射線 過濾除菌 超聲波消毒法 干燥與低溫抑菌法,2019/7/3,6,干熱滅菌法：使微生物脫水干燥和大分子

3、變性死亡,焚燒 燒灼 干烤：通常加溫160180保持2h 紅外線滅菌,2019/7/3,7,濕熱滅菌法,在同一溫度下濕熱的殺菌效果比干熱好，因?yàn)椋?溫?zé)釡缇鷷r(shí)菌體蛋白質(zhì)易變性； 濕熱穿透力大； 濕熱蒸汽有潛熱存在。,2019/7/3,8,巴氏消毒法（pasteurization）,61.162.8 30min 71.7 1530秒 殺死液體中的病原菌或某些特定微生物。 消毒牛奶、酒類等食品。,2019/7/3,9,煮沸消毒法,煮沸100經(jīng)5min可殺死一切細(xì)菌的繁殖體，一般消毒以煮沸10min為宜。 芽胞需12小時(shí)才能殺死。 用于一般外科器械、膠管和注射器、飲水和食具的消毒。,2019/7/3

4、,10,流通蒸汽滅菌法,細(xì)菌繁殖體需15-30min才能殺死，但芽胞不會(huì)被全部殺死。 間歇滅菌法 本法是利用反復(fù)多次的流通蒸汽滅菌，以達(dá)到滅菌的目的。 只適用于不耐熱（100以內(nèi)）的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如某些培養(yǎng)基的滅菌。,2019/7/3,11,高壓蒸汽法 Autoclaving,壓力：1.05kg/cm2 溫度：121.3 時(shí)間：1530min 效果 殺死一切微生物，包括芽胞 耐高熱、不怕潮濕的物品,2019/7/3,12,燃料加熱壓力鍋式高壓滅菌器,2019/7/3,13,光線與射線,日光和紫外線 殺菌波長(zhǎng)：240280nm，最適：260nm 殺菌機(jī)制：破壞核酸結(jié)構(gòu) 用于物體表面和空氣消毒 電離射線

5、和微波 射線、高能量的電子束（陰極射線） 不升高溫度且穿透力強(qiáng) 適于忌熱物品的滅菌或消毒,2019/7/3,14,濾過除菌（filter）,常用不能加熱滅菌的血清或液體 不能除去病毒、支原體和型細(xì)菌 常用的除菌濾器 蔡氏（Seitz）濾器 玻璃濾器 薄膜濾器,2019/7/3,15,超聲波消毒法：殺菌不徹底，主要用于破碎細(xì)菌，提取菌體組分。 腌制 干燥與低溫抑菌法：主要用于保存食品、 保存菌種。 真空干燥法,2019/7/3,16,二、化學(xué)消毒滅菌法,2019/7/3,17,消毒劑的作用機(jī)理,使細(xì)胞膜通透性受損； 使菌體蛋白變性和凝固，失去生物活性，導(dǎo)致細(xì)菌死亡； 破壞或改變蛋白質(zhì)與核酸功能基

6、團(tuán)，使菌體酶蛋白失去酶的活性。,2019/7/3,18,二、化學(xué)消毒滅菌法,（一）高效消毒劑 （high-level disinfectants） 1.含氯消毒劑；2.過氧化物消毒劑； 3.醛類消毒劑；4.環(huán)氧乙烷 （二）中效消毒劑 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒劑；2.醇類消毒劑 （三）低效消毒劑 （low-level disinfectants） 1.季銨鹽類；2.氯已定；3.高錳酸鉀,2019/7/3,19,固體二氧化氯消毒劑,2019/7/3,20,第三節(jié) 消毒滅菌的運(yùn)用,（一）高危器械物品 用時(shí)需進(jìn)入無菌組織 的物品。所有這些物品都

7、應(yīng)該滅菌。 （二）中危器械物品 用時(shí)不進(jìn)入無菌組織 但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接觸未損傷皮膚但 不進(jìn)入無菌組織和不接觸黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。 （四）快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械,一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌,2019/7/3,21,（二）室內(nèi)空氣消毒滅菌 1.物理消毒法 紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2 m的高效過濾裝置以除去細(xì)菌和帶菌塵埃。 2化學(xué)消毒法 包括化學(xué)消毒劑噴霧和熏蒸：過氧乙酸噴霧、熏蒸；過氧化氫噴霧；二氧化氯溶液噴灑；中草藥點(diǎn)燃煙熏。 （三）手和皮膚的消毒 用肥皂和流動(dòng)水經(jīng)常并正確洗手 病原微生物污染時(shí)

8、應(yīng)用消毒劑消毒。,2019/7/3,22,（四）黏膜的消毒 （五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌 （六）病人污染物品的消毒 （七）飲水的消毒 （八）環(huán)境的消毒,2019/7/3,23,酚類,2019/7/3,24,醇類,2019/7/3,25,重金屬鹽類,2019/7/3,26,氧化劑,2019/7/3,27,表面活性劑,2019/7/3,28,烷化劑,2019/7/3,29,染料,2019/7/3,30,酸堿類,2019/7/3,31,第四節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,消毒劑性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間 75% ethanol 溫度和酸堿度：溫度升高效率增強(qiáng) Anthrax spore2% 戊二醛 20

9、oC: 104 / ml / 15min 56oC: 104 / ml / 1min 細(xì)菌種類和數(shù)量 結(jié)核桿菌、芽胞 被消毒物的性質(zhì),2019/7/3,32,消毒劑選擇原則,效果好 毒力低 便宜,2019/7/3,33,小結(jié),概念：消毒 滅菌 無菌 抑菌 防腐 物理滅菌的方法與應(yīng)用 濕熱法的種類和應(yīng)用 消毒劑的作用原理和應(yīng)用,2019/7/3,34,消毒與滅菌,滅菌 消毒 防腐 抑菌 無菌 熱力滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 化學(xué)消毒劑的種類和作用機(jī)制,2019/7/3,35,問題,什么是消毒、滅菌、無菌、抑菌、防腐？ 物理滅菌有哪些方法？ 濕熱滅菌有哪些方法？分別應(yīng)用何處？ 高壓蒸汽滅菌法原理、應(yīng)用

10、？ 消毒劑作用原理是什么？使用消毒劑有何注意事項(xiàng)？,2019/7/3,36,第五節(jié) 生物安全及無菌操作基本技術(shù),2019/7/3,37,生物安全 biosafety,生物安全 biosafety 避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露，向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。,2019/7/3,38,生物實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室分區(qū) laboratory area 按照生物因污染概率的大小，實(shí)驗(yàn)室可以進(jìn)行合理分區(qū)。 危害程度分級(jí)：根據(jù)生物因子對(duì)個(gè)體和群體的危害程度將其分為4級(jí),2019/7/3,39,生物危害程度,級(jí)（低個(gè)體危害，低群體危害） 不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。

11、級(jí)（中等個(gè)體危害，有限群體危害） 能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。,級(jí),2019/7/3,40,生物危害程度,級(jí) ( 高個(gè)體危害，低群體危害) 能引起人或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能用抗生素抗寄生蟲藥治療的病原體。 級(jí)（高個(gè)體危害，高群體危害） 能引起人或動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接、間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與 動(dòng)物之間傳播的病原體。,級(jí),級(jí),2019/7/3,41,實(shí)驗(yàn)室生物安全

12、,實(shí)驗(yàn)室及其人員生物安全管理，按國(guó)務(wù)院令(第424號(hào))病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例于2004年11月起施行。 病原微生物，是指能夠使人或者動(dòng)物致病的微生物。實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，是指實(shí)驗(yàn)室從事與病原微生物菌（毒）種、樣本有關(guān)的研究、教學(xué)、檢測(cè)、診斷等活動(dòng)。,2019/7/3,42,生物安全水平分級(jí),生物安全防護(hù)水平（biosafety level，BSL）分為4級(jí)，以表示實(shí)驗(yàn)室的相應(yīng)生物安全防護(hù)水平。 BSL1：防護(hù)水平最低,普通建筑物即可，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池。 BSL-2：實(shí)驗(yàn)室的門有可視窗。在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域外還應(yīng)當(dāng)有供長(zhǎng)期使用的存儲(chǔ)空間。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用專門的工作服；應(yīng)戴乳膠手套。配備高壓蒸汽滅菌

13、器，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜。,BSL-2,2019/7/3,43,BSL1實(shí)驗(yàn)室,防護(hù)水平最低,普通建筑物即可。,2019/7/3,44,生物安全水平分級(jí),BSL3實(shí)驗(yàn)室：自成隔離區(qū)（有出入控制）或?yàn)楠?dú)立建筑物。 BSL4 防護(hù)水平最高。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建造在獨(dú)立的建筑物內(nèi)或建筑物中獨(dú)立的完全隔離區(qū)域內(nèi)，該建筑物應(yīng)遠(yuǎn)離城區(qū)。,2019/7/3,45,生物安全柜,生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是為操作具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的。使用生物安全柜可以減少

14、由于氣溶膠暴露所造成的實(shí)驗(yàn)室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。同時(shí)也能保護(hù)環(huán)境。,2019/7/3,46,一、二級(jí)實(shí)驗(yàn)室不得從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。三級(jí)、四級(jí)實(shí)驗(yàn)室從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。 從事高致病性病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)應(yīng)當(dāng)有名以上的工作人員共同進(jìn)行。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的同一個(gè)獨(dú)立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時(shí)從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度 。,2019/7/3,47,實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)掌握實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護(hù)知識(shí)和實(shí)際操作技能。應(yīng)有符合要求的防護(hù)用品，應(yīng)建立健康檔案；進(jìn)行預(yù)防接種。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有科學(xué)、嚴(yán)格的管理制度，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備、材料等進(jìn)行檢

15、查、維護(hù)和更新，應(yīng)對(duì)廢水、廢氣以及其他廢物進(jìn)行合理處置，防止環(huán)境污染。,2019/7/3,48,未經(jīng)批準(zhǔn)，任何人不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。兒童不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。可能增加獲得性感染的危險(xiǎn)性或感染后可能引起嚴(yán)重后果的人員不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動(dòng)物房。 BSL-2實(shí)驗(yàn)室門上應(yīng)標(biāo)有國(guó)際通用的生物危害警告標(biāo)志，包括通用的生物危險(xiǎn)性標(biāo)志，標(biāo)明傳染因子、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其他人姓名、電話、以及進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求。 實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)保持關(guān)閉。 工作人員進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特別批準(zhǔn)。 與實(shí)驗(yàn)室工作無關(guān)的動(dòng)物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。,（一）實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)入,2019/7/3,49,2019/7/3,50,辦公室,2019/7/3,5

16、1,儀器使用中的相關(guān)危險(xiǎn),2019/7/3,52,生物安全,2019/7/3,53,三、實(shí)驗(yàn)室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任,實(shí)驗(yàn)室感染控制工作包括定期檢查實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實(shí)驗(yàn)室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實(shí)施情況。 實(shí)驗(yàn)室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時(shí)，預(yù)防、控制措施包括：封閉被病原微生物污染的實(shí)驗(yàn)室或可能造成病原微生物擴(kuò)散的場(chǎng)所；開展流行病學(xué)調(diào)查；對(duì)病人進(jìn)行隔離治療，對(duì)相關(guān)人員進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查；對(duì)密切接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察；進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)消毒；對(duì)染疫或者疑似染疫的動(dòng)物采取隔離、撲殺等措施。,2019/7/3,54,監(jiān)督的主要內(nèi)容是監(jiān)督病原微生物實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行國(guó)家有關(guān)法律、行政法規(guī)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和要求的記錄、檔案及報(bào)告的情況。 法律責(zé)任的核心是承擔(dān)造成傳染病傳播、流行或者其他嚴(yán)重后果的法律責(zé)任。,