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ICS67.050 X 04 DB37 山東省地方標(biāo)準(zhǔn) DB37/T XXXXX—XXXX 食品中四氯蟲酰胺殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 Determination of tetrachlorantraniliprole residue in foods—Liquid chromatography - tandem mass spectrometry - XX - XX發(fā)布 XXXX - XX - XX實(shí)施 山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 DB37/T XXXXX—XXXX 前言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1—2009給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由青島海關(guān)提出、歸口并組織實(shí)施。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：青島海關(guān)技術(shù)中心、黃島海關(guān)。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：崔淑華、郭慶龍、張謙、王宇、劉宏玉、劉成帥、崔偉佳、逄昔莎、裴萍。 10 食品中四氯蟲酰胺殘留量的測定　液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 1　 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中四氯蟲酰胺殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、玉米、甘藍(lán)、番茄、蘋果、干辣椒、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中溴氰蟲酰胺殘留量的測定，其它食品可參照執(zhí)行。 2　 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB 2763　食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)　食品中農(nóng)藥最大殘留限量 GB/T 6682　分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3　 原理 試樣經(jīng)乙腈提取，分散固相萃取凈化（油脂含量高的樣品須先用乙腈飽和正己烷去脂和冷凍去脂）后，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。 4　 試劑和材料 除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。 4.1　 試劑 4.1.1　 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色譜純。 4.1.2　 甲醇（CH3OH，67-56-1）：色譜純。 4.1.3　 正己烷（C6H14，110-54-3）：色譜純。 4.1.4　 乙酸銨（C2H7NO2，631-61-8）：色譜純。 4.1.5　 氯化鈉（NaCl，7647-14-5）：用前在450 ℃灼燒4 h，冷卻后密封備用。 4.1.6　 無水硫酸鎂（MgSO4，7487-88-9）：用前在650 ℃灼燒4 h，貯藏干燥器中，冷卻后備用。 4.2　 溶液配制 4.2.1　 乙腈飽和正己烷溶液：取適量乙腈加入正己烷中，劇烈振搖，靜置至出現(xiàn)明顯分層，棄去乙腈層備用。 4.2.2　 乙酸銨溶液（5 mmol/L）：稱取0.385 g乙酸銨用水溶解并定容至1 L。 4.3　 標(biāo)準(zhǔn)品 四氯蟲酰胺（Tetrachlorantraniliprole，C17H10BrCl4N5O2，CAS號：1101384-14-6），純度≥95.5 %。 4.4　 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 4.4.1　 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液 準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg），用乙腈溶解，配制成濃度為1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，該儲備溶液-18 ℃保存，保存期為一年。 4.4.2　 標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇配制成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，該溶液4 ℃保存，保存期為一個月。 4.4.3　 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 根據(jù)需要準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用樣品空白基質(zhì)溶液配制成0.000 5、0.001、0.002、0.005、0.01、0.02 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。該溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。 4.5　 材料 4.5.1　 N-丙基乙二胺（Primary secondary amine，PSA）：粒度40～60 μm。 4.5.2　 十八烷基硅烷鍵合相（C18）：粒度40～60 μm。 4.5.3　 有機(jī)濾膜：0.22 μm。 5　 儀器和設(shè)備 5.1　 液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。 5.2　 高速組織搗碎機(jī)。 5.3　 高速粉碎機(jī)。 5.4　 勻漿機(jī)。 5.5　 天平：感量0.01 mg和0.01 g。 5.6　 振蕩器。 5.7　 超聲波儀。 5.8　 離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于8 000 r/min。 5.9　 渦旋混合器。 5.10　 具塞離心管：50 mL，10 mL。 6　 試樣制備與保存 6.1　 大米、玉米、干辣椒 取500 g代表性樣品，用高速粉碎機(jī)處理至粉狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 ℃以下保存。 6.2　 甘藍(lán)、番茄、蘋果 取500 g代表性樣品，用勻漿機(jī)制成勻漿，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 ℃以下保存。 6.3　 豬肉、雞肝 取500 g代表性樣品，用高速組織搗碎機(jī)制成糊狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 ℃以下保存。 6.4　 牛奶、雞蛋 取500 g代表性樣品，充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 ℃以下保存。 7　 分析步驟 7.1　 提取 7.1.1　 大米、玉米 稱取4 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加5 mL水混勻，放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。 7.1.2　 甘藍(lán)、番茄、蘋果 稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中。準(zhǔn)確加入20 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。 7.1.3　 干辣椒 稱取4 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加15 mL水混勻，放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。 7.1.4　 豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋 稱取4 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加5 mL水混勻（檢測牛奶時(shí)，不需加水），放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。將10 mL上清液轉(zhuǎn)移至50 mL具塞離心管中，加入10 mL乙腈飽和正己烷，渦旋振蕩2 min，靜置分層，棄去正己烷層，再加入10 mL乙腈飽和正己烷重復(fù)操作一次，然后將離心管置于-18 ℃冷凍30 min后，迅速取出2 mL提取液，待凈化。 7.2　 凈化 稱取0.15 g無水硫酸鎂，0.10 g PSA和0.10 g C18置于10 mL離心管，吸取2 mL上述提取液至此離心管中，渦旋1 min，8 000 r/min離心5 min。取上清液過0.22 μm有機(jī)微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。 7.3　 測定 7.3.1　 液相色譜參考條件 條件如下： a) 色譜柱：C18柱，柱長150 mm，內(nèi)徑2.1 mm，粒徑3 μm，或等效柱； b) 流速：0.25 mL/min； c) 進(jìn)樣量：5 μL； d) 柱溫：30 ℃； e) 流動相及梯度洗脫條件見表1。 表1　 流動相及梯度洗脫條件 時(shí)間 min 甲醇 % 乙酸銨溶液 % 0 25 75 0.5 25 75 2.5 90 10 6.0 90 10 6.1 25 75 10 25 75 7.3.2　 質(zhì)譜參考條件 條件如下： a) 電離方式：電噴霧電離（ESI）； b) 毛細(xì)管電壓：3.5 kV； c) 干燥氣溫度：350 ℃； d) 輔助氣（鞘氣）溫度：350 ℃； e) 霧化氣、干燥氣、輔助氣（鞘氣）均為高純氮?dú)?，使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求； f) 掃描方式：負(fù)離子掃描； g) 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測，參數(shù)見表2； h) 多反應(yīng)監(jiān)測條件。 表2　 多反應(yīng)監(jiān)測條件 中文名稱 英文名稱 母離子 m/z 子離子 m/z 駐留時(shí)間 /s 裂解電壓/V 碰撞能量/eV 四氯蟲酰胺 tetrachlorantraniliprole 535.8 499.7 0.2 120 3 201.9a 0.2 120 4 a 為定量子離子 7.3.3　 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 按濃度由小到大的順序，依次分析基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到相應(yīng)的峰面積。以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 7.3.4　 試樣溶液的測定 將試樣溶液注入液相色譜-質(zhì)譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中四氯蟲酰胺的濃度。如果試樣溶液濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，須用乙腈稀釋試樣溶液至線性范圍后再進(jìn)行測定。在上述儀器條件下，四氯蟲酰胺的參考保留時(shí)間為5.0 min。標(biāo)準(zhǔn)品的MRM總離子流圖和選擇離子流圖參見附錄A中圖A.1、圖A.2。 7.3.5　 定性 如果樣品的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液一致，定性離子對的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應(yīng)的被測物。 表3　 定性測定時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差 相對離子豐度 ＞50 % 20 %～50 % 10 %～20 % ≤10 % 允許的相對偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.4　 空白試驗(yàn) 除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。 8　 分析結(jié)果的表述 試樣中四氯蟲酰胺的含量按式（1）計(jì)算： (1) 式中： X ——試樣中四氯蟲酰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）； ρ——從基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣測定液中四氯蟲酰胺的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）； V ——試樣測定液的最終定容體積，單位為毫升（mL）； m ——最終樣液所代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。 注： 計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，保留兩位有效數(shù)字。 9　 精密度 9.1　 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄C的要求。 9.2　 在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄D的要求。 10　 定量限和回收率 10.1　 定量限 大米、玉米、干辣椒、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中四氯蟲酰胺定量限為0.005 mg/kg，甘藍(lán)、番茄、蘋果中四氯蟲酰胺定量限為0.002 mg/kg。 10.2　 回收率 不同樣品中四氯蟲酰胺添加水平及回收率參見附錄B。 A A 附　錄　A （資料性附錄） 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品譜圖 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM總離子流圖見圖A.1，選擇離子流圖見圖A.2。 圖A.1　 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM總離子流圖 圖A.2　 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM選擇離子流圖 B B 附　錄　B （資料性附錄） 樣品的添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 樣品的添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表B.1。 表B.1　 樣品的添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 樣品名稱 添加濃度/（mg/kg） 回收率范圍/% 大米 0.005 83.4～103.1 0.04 87.6～106.4 0.2 78.9～91.3 玉米 0.005 84.7～101.4 0.01 81.2～97.9 0.02 86.8～108.5 甘藍(lán) 0.002 90.7～113.9 0.2 88.2～104.3 2 95.5～112.8 番茄 0.002 88.5～107.3 0.2 82.4～97.6 2 79.9～90.4 蘋果 0.002 92.1～113.2 0.8 89.4～108.2 2 93.6～106.9 干辣椒 0.005 87.3～112.8 5 79.6～103.5 7 81.7～98.9 豬肉 0.005 85.9～116.4 0.2 83.2～96.0 2 80.3～104.1 雞肝 0.005 85.6～116.8 0.01 81.4～100.5 0.15 78.3～96.2 牛奶 0.005 84.0～111.1 0.05 92.5～106.3 0.6 80.9～107.0 雞蛋 0.005 78.1～115.7 0.15 82.4～102.2 0.2 84.6～107.1 C C 附　錄　C （規(guī)范性附錄） 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求見表C.1。 表C.1　 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求 被測組分含量 mg/kg 精密度 % ≤0.001 36 ＞0.001≤0.01 32 ＞0.01≤0.1 22 ＞0.1≤1 18 ＞1 14 D D 附　錄　D （規(guī)范性附錄） 實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性要求 實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性要求見表D.1。 表D.1　 實(shí)驗(yàn)室間再現(xiàn)性要求 被測組分含量 mg/kg 精密度 % ≤0.001 54 ＞0.001≤0.01 46 ＞0.01≤0.1 34 ＞0.1≤1 25 ＞1 19 _________________________________