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1、恩諾沙星檢測試劑盒說明書 酶聯(lián)免疫法定量檢測恩諾沙星 產(chǎn)品簡介 RIDASCREEN? Enrofloxacin/Quinolones（訂貨號：R3113R）恩諾沙星檢測試劑盒， 采用競爭性酶聯(lián)免疫法定量測定尿液、血清種的恩諾沙星藥物殘留。 試劑盒中含有酶聯(lián)免疫檢測所需的所有試劑，包括標(biāo)準(zhǔn)品。 試劑盒足夠進(jìn)行96次檢測（包括標(biāo)準(zhǔn)測定）。 定量分析需要使用微孔板酶標(biāo)儀。 檢測時(shí)間： 樣品制備（以10個(gè)樣品為例）.................大約30 分鐘 檢測過程（孵育時(shí)間）....................大約1小時(shí)15分鐘 檢測限： 尿

2、液、血清.................................................5ppb 回收率： 80 - 110 % （與標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)） 特異性： RIDASCREEN? Enrofloxacin/Quinolones恩諾沙星檢測試劑盒的特異性根據(jù)與相關(guān)物質(zhì)的交叉反應(yīng)確定。 恩諾沙星 ........................................................... 100 % 諾氟沙星，麻保沙星，氧氟沙星...................... > 100 % 達(dá)氟沙星...........

3、.................................................... 67 % 環(huán)丙沙星............................................................... 41 % 沙氟沙星................................................................. 9 % 1. 用途 RIDASCREEN? Chinolone恩諾沙星檢測試劑盒采用了競爭性酶聯(lián)免疫法定量測定雞蛋、牛肉、豬肉、羊肉、雞肉、火雞、魚和蝦中的恩諾沙星藥物殘留。 2

4、. 檢測原理 檢測的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對氟喹諾酮抗體的捕獲抗體。加入標(biāo) 準(zhǔn)品、樣品溶液、恩諾沙星酶連接物及氟喹諾酮抗體。游離的氟喹諾酮與恩諾沙星 酶連接物競爭氟喹諾酮抗體結(jié)合位點(diǎn)（競爭性酶聯(lián)免疫分析），同時(shí)氟喹諾酮抗體 也與微孔板上固定的捕獲抗體結(jié)合。沒有結(jié)合的恩諾沙星酶連接物在洗滌步驟中被 除去。將底物/發(fā)色劑加入到孔中并且孵育。結(jié)合的酶連接物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為 藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在 450 nm 處測量。吸 光度值與樣品中的氟喹諾酮濃度成反比。 3. 試劑盒組份 每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行 96次檢測（包括標(biāo)準(zhǔn)測定），

5、盒中的組份如下： 1 x 96孔微孔板（12 條每條8孔） 包被有針對氟喹諾酮抗體的捕獲抗體 6 x 標(biāo)準(zhǔn)品 （每瓶 1.3 ml） 0 ppb（零標(biāo)準(zhǔn)品），0.5 ppb，1.5 ppb，3 ppb，6 ppb，18 ppb 恩諾沙星甲醇溶液 即用型 1 x 酶連接物（6 ml）...............................紅色瓶蓋 過氧化物酶標(biāo)記的恩諾沙星 即用型 1 x 氟喹諾酮抗體液（6 ml） ........................黑色瓶蓋 即用型 1 x 發(fā)色劑（10 ml）....................

6、......棕色瓶蓋 （底物/發(fā)色劑溶液），紅色 含有四甲聯(lián)苯胺 1 x 反應(yīng)終止液（14 ml）...............................黃色瓶蓋 含1N的硫酸 1 x 洗滌緩沖液（鹽） 用于制作 10 mM的磷酸鹽緩沖液，pH 7.4 含有0.05 % Tween 20 4. 操作者應(yīng)該注意之事項(xiàng) 本試劑盒建議由經(jīng)過了培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行操作使用。請嚴(yán)格按照說明書的步驟和要求進(jìn)行檢測使用。 反應(yīng)終止液為1 N硫酸（R36/38，S2-26）。 5. 儲存條件 保存試劑盒于2-8°C，不要冷凍。 將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供

7、的干燥劑一起重新密封儲存于 2-8℃ 條件下。 底物/發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 對過了有效期（見試劑盒標(biāo)簽）的試劑盒不再提供任何質(zhì)量保證。 不能交叉使用不同批號的盒中試劑。 6. 試劑變質(zhì)的跡象 ? 紅色的底物/發(fā)色劑在使用前發(fā)現(xiàn)顏色變藍(lán) ? 零標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6 （E450 nm < 0.6） 7. 樣品處理 7.1 尿液和血清 尿液、血清 — 取30ul尿樣/血清+270洗滌緩沖液混合后，取50ul進(jìn)行分析 稀釋倍數(shù)………………………………………….10 檢測限……………………………………………

8、5 ng/g (ppb) 定量檢測限…………………………………….. ..5 ng/g (ppb) 8. 檢測步驟 8.1. 檢測前的準(zhǔn)備 使用之前將所有試劑回溫至室溫（20-25°C）。 洗滌緩沖液是PBS-Tween緩沖液，為此試劑盒中提供了一袋洗滌緩沖液鹽（參見4.）。使用1 l 蒸餾水溶解一袋洗滌緩沖液鹽制得洗滌緩沖液。制備好的洗滌緩沖液可在2-8°C下保存大約4－6周時(shí)間。 或者： 用100 ml蒸餾水溶解袋中的洗滌緩沖液鹽，得到10倍的洗滌緩沖液鹽濃縮液，此溶液能在室溫（20-25°C）下儲存8－12周。使用時(shí)，用9份蒸餾水溶解1份此濃縮液得到洗滌緩沖液。 8

9、.2. 檢測操作 檢測必須在室溫（20-25°C）條件下進(jìn)行！ 仔細(xì)進(jìn)行洗板的操作非常重要。在使用中不要讓微孔出現(xiàn)干燥。 0. 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測所需數(shù)量的孔條插入微孔板架，均做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)， 記錄下標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。 1. 將 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)品及處理好的樣品溶液加到相應(yīng)的微孔中。不同樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的添加請換用新的移液頭。 2. 向每一個(gè)微孔中加入50 μl酶連接物溶液（紅色瓶蓋）。 3. 向每一個(gè)微孔中加入 50 μl 抗體溶液（黑色瓶蓋），充分混合，在室溫（20 - 25°C）條件下孵育 1小時(shí)。 4. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打 3 次）以保證完全除去孔中的液體。加入 250 μl 洗滌緩沖液（參見 10.1.），再次倒掉微孔中液體。上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。 5. 向每一個(gè)微孔中加入 100 μl 底物/發(fā)色劑（棕色瓶蓋），充分混合并在室溫 （20 - 25 °C）條件下暗處孵育 15分鐘。 6. 向每一個(gè)微孔中加入 100 μl 反應(yīng)終止液（黃色瓶蓋），充分混合。在加入反 應(yīng)終止液后30分鐘內(nèi)于450 nm處測量吸光度值。