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1、實驗一 毛細(xì)血管采血 白細(xì)胞計數(shù),臨床檢驗基礎(chǔ)實驗,王 梅,江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 臨床檢驗與輸血教研室,第一部分 毛細(xì)血管采血,毛細(xì)血管采血即皮膚采血法，主要用于需血量微小的檢查項 目。所獲得的末稍血不單純是毛細(xì)血管血，實際是是微動脈、微 靜脈和毛細(xì)血管的混合血，并依采血時擠壓的力度不同含有少量 細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。,毛細(xì)血管采血器具,采血筆,,采血筆結(jié)構(gòu)示意圖,采血筆的使用,擰下采血筆前端筆帽,安裝采血針,采血,1、準(zhǔn)備材料 2、選擇采血部位 3、按摩皮膚 4、消毒皮膚 用75%乙醇脫脂棉球擦拭采血部位的皮膚，待干。 5、針刺皮膚 用左手拇指和示指固定繃緊皮膚，右手持采血針自指尖腹

2、內(nèi)側(cè)迅速刺入 6、拭去第一滴血 7、吸血 血液自然流出時，用微量吸管吸血至刻度 8、止血,毛細(xì)血管采血操作步驟,1、采血前準(zhǔn)備 患者、器材 2、選擇采血部位 皮膚完整處采血 3、消毒皮膚 無菌操作、一人一針一管、皮膚消毒應(yīng)待乙醇或碘酊揮發(fā)后采血 4、針刺皮膚 迅速，傷口深度 5、拭去第1滴血 6、吸血與檢測 微量吸管校準(zhǔn)、血液充入管內(nèi)的速度、應(yīng)及時測定,毛細(xì)血管采血注意事項,第二部分 白細(xì)胞計數(shù),原理：血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細(xì)胞，在血 細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)計數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)，換 算成每升血液中白細(xì)胞數(shù)。 試劑： 白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亞甲藍(lán)3

3、滴 加蒸餾水 至100ml,器材：,微量吸管、帶孔吸頭、 改良牛鮑血細(xì)胞計數(shù)板及專用蓋片 1ml刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、 干棉球、光學(xué)顯微鏡,微量吸管的使用,1、將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上，連接緊密不漏氣； 2、拇指和中指夾住吸頭中下端，示指蓋住吸頭小孔，拇、中指輕微擠壓排出適量空氣； 3、將微量吸管插入抗凝血，拇、中指緩慢松勁（松動快血液會吸入吸頭），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有氣泡），吸管呈水平略下垂，松開示指； 4、用干棉球順吸管向下拭盡管外余血（保證血量準(zhǔn)確），輕觸吸管下口吸去多余血量，使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度； 5、將微量吸管插入小試管底部，三指輕微用力

4、慢慢排出血液，用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次，輕搖試管混勻； 6、拔出微量吸管棄入污物桶。,改良牛鮑血細(xì)胞計數(shù)板結(jié)構(gòu),計數(shù)板上下各一個計數(shù)池,血細(xì)胞計數(shù)池的方格,計數(shù)區(qū)域分為9個大方格 四角的大方格各劃分為16個中方格 中央大方格劃分為25個中方格 四角的大方格為白細(xì)胞計數(shù)區(qū) 中央大方格四角和正中5個中方格為紅細(xì)胞計數(shù)區(qū),白細(xì)胞數(shù)/L= N/4 10 106 稀釋倍數(shù),每個大方格的容積= 面積高度=1mm2 0.1mm=0.1mm3 (l),每個大方格的面積= 1mm1mm=1mm2,（N：4個大方格細(xì)胞總數(shù)）,細(xì)胞計數(shù)原則,大方格四邊壓線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下， 弓形移動,（1）加稀釋液

5、用移液管向小試管內(nèi)加入0.38ml白細(xì)胞稀釋液。 （2）采血、稀釋用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，釋放于小試 管底部，用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血，輕搖試管混勻，靜置等其溶血。 （3）清潔計數(shù)板及蓋片（動作輕柔），夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。 （4）充計數(shù)池將小試管輕微振蕩2min，立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細(xì)胞懸液，充入計數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min，使細(xì)胞沉于計數(shù)池底面。 （5）調(diào)試顯微鏡 將計數(shù)板放置載物臺上，轉(zhuǎn)至低倍鏡（10），調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗，調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線，調(diào)節(jié)光亮。 （6）計數(shù) 低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。,白

6、細(xì)胞計數(shù)操作步驟,,,,(1)稀釋液密封保存，防止污染，小試管、計數(shù)板、蓋片均須清潔，以免雜質(zhì)、微粒等被誤認(rèn)為細(xì)胞。 (2)采血時針刺深度必須適當(dāng)，不能過度擠壓，防止組織液滲入或采血時間太長引起血液凝固。 (3)稀釋液和采血量要準(zhǔn)確，充分混勻，充液適量，無不足、外溢和氣泡，細(xì)胞分布均勻。 (4)白細(xì)胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)，大方格間的細(xì)胞數(shù)不得相差10個以上，兩次重復(fù)計數(shù)誤差不得超過10。 (5)白細(xì)胞數(shù)量過高時，可加大稀釋倍數(shù)，白細(xì)胞數(shù)量過低時，可計數(shù)8個大方格的白細(xì)胞數(shù)或取雙倍血量。 (6)調(diào)試顯微鏡 將血細(xì)胞計數(shù)板平放于載物臺，低倍鏡處所充計數(shù)池正中蓋片略上方，向下微調(diào)載物臺（防止壓碎蓋片）至看清計數(shù)區(qū)域內(nèi)分隔線條為止。,白細(xì)胞計數(shù)操作注意事項,實驗報告內(nèi)容,原理 試劑器材 操作步驟 實驗結(jié)果 注意事項 思考題,