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植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較,,全能性,,增殖,,固體,,液體,,蔗糖,,動物血清,,細胞株、細胞系,,細胞或細胞分泌蛋白,1,溫故而知新——植物體細胞雜交（馬鈴薯番茄）,融合的原生質體AB,,再生出細胞壁,植物細胞的融合,雜種細胞AB,人 工 誘 導,動物細胞可以融合嗎？ 如果可以，兩者相同嗎？,2,2.2.2動物細胞融合 與單克隆抗體,帶著問題走進課堂？,2.2 動物細胞工程,3,自主閱讀，p52第2自然段，思考下列問題：,什么叫動物細胞融合 ？ （概念要點）,① 兩個或多個動物細胞 ② 一個細胞（雜交單核細胞）,動物細胞融合,4,動物細胞融合過程示意圖,不同DNA的兩個細胞,,,,,滅活的病毒,,,,,,,,,,有絲分裂,,兩個完整的雜交細胞,,,,5,一、動物細胞融合（細胞雜交）,1、概念：,指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。,2、結果：,形成單核的雜交細胞,3、原理：,細胞膜的流動性,,,4、誘導方式,,物理法：離心、振動、電激,化學法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,6,思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？,因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂 質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅 活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。,7,5、過程：,動物細胞A 動物細胞B,,誘導，融合,2個完整的雜交細胞AB,有絲分裂,,（膜融合、質融合）,,（核融合）,,注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞,8,6、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。,7、應用：成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體,9,思考題,1.植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？,酶解法，如纖維素酶或果膠酶,2.動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？,無需，因為動物細胞無細胞壁,3.植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？,離心、電激等物理方法；PEG等化學方法,4.動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？,能 還可以利用滅活的病毒進行誘導,5.植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織培養(yǎng)形 成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？,不能,,,,10,植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較,獲得雜種植株,細胞膜的流動性,細胞膜的流動性 細胞的全能性,去除細胞壁后誘導原生質體融合,使細胞分散后誘導細胞融合,物理（離心、振蕩、電刺激） 化學（聚乙二醇）,物理、化學方法（同左） 滅活的病毒,主要用于制備,單克隆抗體,11,2.動物細胞融合的概念,動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞稱為雜交細胞。,,,,12,1、抗體 1.1 概念： 抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白 。 1.2 來源： B淋巴細胞。,二、單克隆抗體,13,B淋巴細胞與抗體的關系：,１．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產生抗體。 ２．動物體內的B淋巴細胞可以產生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。 ３．每一個淋巴細胞只能產生一種抗體。,自主閱讀P52：傳統的抗體的生產方法及 缺陷是什么？怎樣解決這個問題？,14,2.1 、單克隆 由一個細胞經過無性繁殖(多次有絲分裂)形成的一個細胞群，叫一個克隆，即單克隆。,2、單克隆抗體的概念,2.2 、單克隆抗體 由一個效應B淋巴細胞經過無性繁殖形成的一個細胞群產生的化學性質單一，特異性強的抗體，即單克隆抗體。,要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群。,15,3、原理：雜交瘤細胞具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數量的單一抗體。,4、過程,B淋巴細胞 骨髓瘤細胞,誘導融合,B-B細胞,,B-瘤細胞,瘤-瘤細胞,,選擇培養(yǎng),雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）,,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,雜交瘤細胞,,體外培養(yǎng),單克隆抗體,16,6.單克隆抗體的應用：,特異性強、靈敏度高、產量大,①作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與特異性結合 優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速,②用于,運載藥物：制成“生物導彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,,5、單克隆抗體的特點：,17,思考問題：,1、本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理,這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體,2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？,?,18,知識結構,兩個過程,,動物細胞培養(yǎng)過程,單克隆抗體制備過程,三個“一”,,一個誘導細胞融合的新方法 －－滅活的病毒,一個新細胞－－雜交瘤細胞,一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢,,,,19,1、動物細胞融合的目的中最重要的是 （ ） A.克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產雜種細胞 2、 動物細胞融合過程中所用的誘導劑——滅活的病毒，抗原性和感染力的有無是 （ ） A.失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力,B,課堂練習,D,20,3、“生物導彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細胞 C.產生特定抗體的B淋巴細胞 D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物,D,,4、科學家們用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交瘤細胞，經培養(yǎng)可產生大量克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是 （ ） A.經過免疫的T淋巴細胞 B.未經過免疫的T淋巴細胞 C.經過免疫的B淋巴細胞 D.未經過免疫的B淋巴細胞,C,21,5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞 誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞， 在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是 （ ） ①淋巴細胞 ②小鼠骨髓瘤細胞 ③B淋巴細胞自身融合細胞 ④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞 ⑤雜交瘤細胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③,C,,,,6.動物細胞融合和植物原生質融合決定于 ( ) A.細胞膜的流動性 B．細胞膜的選擇透過性 C.細胞質的流動性 D．細胞質酶的活性,A,22,