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1、2014屆高考生物 第1講 基因工程解題高效訓練 新人教版選修3 第一講基因工程 [課堂考點集訓] 考點一　基因工程的操作工具 1．基因工程在操作過程中需要限制酶、DNA連接酶、載體三種工具。以下有關基本工具的敘述，正確的是(　　) A．所有限制酶的識別序列均由6個核苷酸組成 B．所有DNA連接酶均能連接黏性末端和平末端 C．真正被用作載體的質粒都是天然質粒 D．原核生物內的限制酶可切割入侵的DNA分子而保護自身 解析：選D　大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成，也有少數(shù)限制酶的識別序列由4、5或8個核苷酸組成；DNA連接酶包括E·coli DNA連接酶和T4D

2、NA連接酶，前者只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端連接起來；在基因工程操作中真正被用作載體的質粒，都是在天然質粒的基礎上進行過人工改造的。 2．(2013·東城模擬)基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是－G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是－↓GATC－。根據(jù)圖判斷下列操作正確的是(　　) A．目的基因和質粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和質粒均用限制酶Ⅰ切割 C．質粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．質粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 解析：選D　目的基因若用限制酶Ⅰ切割時，只能在目的基因的

3、一側切開，而不能將其切下；質粒若用限制酶Ⅱ切割，兩種標記基因均將被破壞，所以只能用限制酶Ⅰ切割質粒。 考點二　基因工程與蛋白質工程 3．(2013·廣東四校聯(lián)考)將人的干擾素基因通過基因定點突變，使干擾素第17位的半胱氨酸改變成絲氨酸，改造后的干擾素比天然干擾素的抗病毒活性和穩(wěn)定性顯著提高，此項技術屬于(　　) A．蛋白質工程　　　　　　 B．細胞工程 C．胚胎工程 D．生態(tài)工程 解析：選A　蛋白質工程是利用基因工程手段，包括基因的定點突變和基因表達對蛋白質進行改造，以期獲得性質和功能更加完善的蛋白質分子。由題意知該技術屬于蛋白質工程。 4．(2013·長沙模擬)下列關于蛋白質

4、工程和基因工程的比較，不合理的是(　　) A．基因工程原則上只能生產自然界已存在的蛋白質，而蛋白質工程可以對現(xiàn)有蛋白質進行改造，從而制造一種新的蛋白質 B．蛋白質工程是在基因工程的基礎上發(fā)展起來的，蛋白質工程最終還是要通過基因修飾或基因合成來完成 C．當?shù)玫娇梢栽冢?0℃條件下保存半年的干擾素后，在相關酶、氨基酸和適宜的溫度、pH條件下，干擾素可以大量自我合成 D．基因工程和蛋白質工程產生的變異都是可遺傳的 解析：選C　利用蛋白質工程生產蛋白質產品應通過改造相應基因后，再經(jīng)基因表達大量產生。 考點三　基因工程的操作與應用 5．(2012·福建高考)肺細胞中的let -7基因表達減

5、弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術將let -7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。 　 請回答： (1)進行過程①時，需用________酶切開載體以插入let -7基因。載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為____________。 (2)進行過程②時，需用____________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。 (3)研究發(fā)現(xiàn)，let -7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據(jù)圖分析，可從細胞中提取________進行分子雜交，以直接檢測l

6、et -7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中________________(RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。 解析：(1)過程①為基因表達載體的構建，該過程涉及的工具酶為限制性核酸內切酶和DNA連接酶，需用限制酶切開載體以插入let -7基因。完整的基因表達載體包括啟動子、目的基因、終止子和標記基因等，而啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點。(2)進行過程②時，用胰蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于細胞的傳代培養(yǎng)。(3)從圖中可以看出，RASmRNA和let -7基因轉錄的miRNA配對形成雜交分子，從而抑制了癌基因RAS的表達，故可以提取RNA進行分

7、子雜交，以直接檢測let -7基因是否轉錄。 答案：(1)限制性核酸內切(或限制)　啟動子 (2)胰蛋白 (3)RNA　RAS蛋白 [課下綜合檢測] 一、選擇題 1．下列關于基因工程的敘述中，正確的是(　　) A．DNA連接酶和RNA聚合酶催化生成的化學鍵相同 B．DNA連接酶對“縫合”序列不進行特異性識別，無專一性催化特點 C．受體細菌若能表達質粒載體上抗性基因，即表明重組質粒成功導入 D．培育轉基因油菜，需對受體細胞進行氯化鈣處理 解析：選A　DNA連接酶和RNA聚合酶催化生成的化學鍵都是磷酸二酯鍵；酶具有專一性的特點，對于有黏性末端的DNA片段，DNA連接酶只識別連

8、接含有相同黏性末端的DNA片段；有些受體細菌體內本身就含有與質粒上相同的抗性基因，故抗性基因的表達不能作為成功導入的標志；用氯化鈣處理大腸桿菌，可增加大腸桿菌細胞壁的通透性，利于重組質粒的導入，對于植物細胞而言，氯化鈣不起作用。 2.(2012·杭州質檢)右圖表示用化學方法合成目的基因Ⅰ的過程。據(jù)圖分析下列敘述正確的是(　　) A．過程①需要DNA連接酶 B．過程②需要DNA限制性核酸內切酶 C．目的基因Ⅰ的堿基序列是已知的 D．若某質粒能與目的基因Ⅰ重組，則該質粒和Ⅰ的堿基序列相同 解析：選C　題圖所示為化學方法合成目的基因的過程。①②過程依賴堿基互補配對。質粒和目的基因的堿基序

9、列一般不相同。 3．我國轉基因抗蟲棉是在棉花細胞中轉入Bt毒蛋白基因培育出來的，它對棉鈴蟲具有較強的抗性。下列敘述錯誤的是(　　) A．Bt毒蛋白基因是從蘇云金芽孢桿菌中分離的 B．Bt毒蛋白基因可借助花粉管通道進入棉花細胞中 C．培育的轉基因棉花植株需要做抗蟲的接種實驗 D．用DNA聚合酶連接經(jīng)切割的Bt毒蛋白基因和載體 解析：選D　Bt毒蛋白基因是從蘇云金芽孢桿菌中分離出來的抗蟲基因；Bt毒蛋白基因可借助花粉管通道進入棉花細胞中；培育的轉基因棉花植株需要做抗蟲的接種實驗；切割下來的Bt毒蛋白基因和載體的連接是靠DNA連接酶來完成的。 4．下列有關基因工程技術的原理或實質的敘述

10、，合理的有(　　) ①基因診斷的基本原理是DNA分子雜交；②基因治療的原理是將正?；驅氩∪梭w內，使該基因的表達產物發(fā)揮功能；③DNA探針技術的原理是探針與樣品中變性處理的DNA單鏈配對雜交；④構建基因表達載體的實質是基因突變；⑤PCR技術的實質是體外復制特定DNA片段的核酸合成技術 A．一項　　　　　　　　　 B．兩項 C．三項 D．四項 解析：選D　①②③⑤四項均合理，而④錯誤，構建基因表達載體的實質是基因重組。 5．下圖表示蛋白質工程的操作過程，下列說法不正確的是(　　) A．蛋白質工程中對蛋白質分子結構的了解是非常關鍵的工作 B．蛋白質工程是完全擺脫基因工程技術

11、的一項全新的生物工程技術 C．a、b過程分別是轉錄、翻譯 D．蛋白質工程中可能構建出一種全新的基因 解析：選B　蛋白質工程中了解蛋白質分子結構如蛋白質的空間結構、氨基酸的排列順序等，對于合成或改造基因至關重要；蛋白質工程的進行離不開基因工程，對蛋白質的改造是通過對基因的改造來完成的；圖中a、b過程分別是轉錄、翻譯過程；蛋白質工程中可能根據(jù)蛋白質的結構構建出一種全新的基因。 6．動物基因工程前景廣闊，最令人興奮的是利用基因工程技術使哺乳動物成為乳腺生物反應器，以生產所需要的藥品，如轉基因動物生產人的生長激素。科學家培養(yǎng)轉基因動物成為乳腺生物反應器時(　　) A．僅僅利用了基因工程技術

12、 B．不需要乳腺蛋白基因的啟動子 C．利用基因槍法將人的生長激素基因導入受精卵中 D．需要進入泌乳期才能成為“批量生產藥物的工廠” 解析：選D　科學家培養(yǎng)轉基因動物時涉及基因工程、胚胎工程等現(xiàn)代生物技術；生產生長激素時需要將人的生長激素基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起，通過顯微注射法導入哺乳動物的受精卵中，培養(yǎng)至適宜的胚胎階段，移植到母體內，使其生長發(fā)育成轉基因動物。 7．下列關于基因工程的敘述，錯誤的是(　　) A．目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物 B．限制性核酸內切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶 C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活

13、性 D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞和促進目的基因的表達 解析：選D　目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物；基因工程中常用的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶；大腸桿菌為原核生物，不含有內質網(wǎng)和高爾基體等細胞器，不能對蛋白質進行加工，其合成的胰島素原無生物活性。運載體中的抗性基因為標記基因，其作用是有利于篩選含重組DNA的細胞，但不能促進目的基因的表達。 8．降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學機構為了研發(fā)一種活性高、半衰期長的新型降鈣素，從預期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條

14、72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖： 獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ(識別序列和切割位點 ↓ －GAATTC－)和BamHⅠ(識別序列和切割位點 ↓ － GGATCC－)雙酶切后插入大腸桿菌質粒中。 下列有關分析錯誤的是(　　) A．Klenow酶是一種DNA聚合酶 B．合成的雙鏈DNA有72個堿基對 C．EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是保證目的基因和運載體的定向連接 D．篩選重組質粒需要大腸桿菌質粒中含有標記基因 解析：選B　合成的單鏈DNA有72個堿基，從題圖看出兩條

15、單鏈并未左右兩端對齊配對，只通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，因此獲得的雙鏈DNA有堿基對72＋72－18＝126個堿基對。 二、非選擇題 9．(2012·新課標全國卷)根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題： (1)限制性內切酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有________和________。 (2)質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如下： AATTC……G G……CTTAA 為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有

16、的特點是_____________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。 (4)反轉錄作用的模板是________，產物是________。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用________技術。 (5)基因工程中除質粒外，________________和________________也可作為運載體。

17、(6)若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是________________________。 解析：(1)DNA分子經(jīng)限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種——黏性末端和平末端。(2)為了保證目的基因與運載體相連，用另一種限制酶切割后形成的黏性末端必須與EcoRⅠ切割形成的黏性末端相同。(3)DNA連接酶有大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶兩類。(4)反轉錄的模板是mRNA，產物是DNA。大量擴增反轉錄產物常采用PCR技術。(5)在基因工程中使用的載體除質粒外，還有噬菌體、動植物病毒等。(6)經(jīng)Ca2＋處理后的大腸桿菌才能夠吸收周圍環(huán)境中

18、的DNA分子。 答案：(1)黏性末端　平末端　(2)切割產生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產生的相同　(3)大腸桿菌　T4　(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR　(5)噬菌體　動植物病毒　(6)未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱 10．如圖表示運用基因工程技術生產胰島素的三條途徑。據(jù)圖結合所學知識回答下列問題： (1)為了便于將含有目的基因的細胞篩選出來，所選擇的質粒上應該具有__________________。 (2)培育轉基因羊的過程中，科研人員通過感染或____________技術將重組質粒M轉移到受體細胞A中，受體細胞A應該是_____

19、___細胞。③過程中還用到了__________________技術。 (3)受體細胞B應該是萵苣的________(填“體細胞”“卵細胞”或“受精卵)，導入該細胞后，需對該細胞進行培養(yǎng)，經(jīng)________過程形成愈傷組織。 (4)萵苣為雙子葉植物，過程②常用的方法是________________；過程⑥常用的方法是用________來處理大腸桿菌，使其易于吸納重組質粒M。 解析：(1)質粒上有標記基因，便于篩選。(2)由于受精卵全能性最高，且體積較大便于操作，因此培育轉基因羊時，常用顯微注射技術將重組質粒導入受精卵，然后用動物細胞培養(yǎng)技術獲得早期胚胎，然后用胚胎移植技術將早期胚胎植入

20、母體子宮，發(fā)育為新個體。(3)培育卵細胞得到的是單倍體植物，受精卵位于植物的胚珠內，不易獲取，因此常將重組質粒導入分裂能力較強的體細胞中。(4)土壤農桿菌易侵染雙子葉植物；用鈣離子處理大腸桿菌，可使大腸桿菌細胞處于感受態(tài)，易于重組質粒進入細菌體內。 答案：(1)標記基因　(2)顯微注射　受精卵　動物細胞培養(yǎng)、胚胎移植　(3)體細胞　脫分化　(4)農桿菌轉化法　鈣離子 11．(2012·江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切

21、位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題： (1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由________連接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是________末端，其產物長度為________________________________________________________________________。 (3)若圖1中虛線方框內的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有________種不同長度

22、的DNA片段。 (4)若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是________。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是__________________________________________ ____________________________________。 解析：(1)一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間是通過“—脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖—”相連的。(2)從SmaⅠ的識別序列和酶

23、切位點可知，其切割后產生的是平末端，圖1中DNA片段有兩個SmaⅠ的識別序列，故切割后產生的產物長度為534＋3＝537(bp)、796－3－3＝790(bp)和658＋3＝661(bp)的三個片段。(3)圖示方框內發(fā)生堿基對的替換后，形成的d基因失去了1個SmaⅠ的識別序列，故D基因、d基因用SmaⅠ完全切割所得產物中除原有D基因切割后的3種長度的DNA片段外，還增加一種d基因被切割后出現(xiàn)的長度為537＋790＝1 327(bp)的DNA片段。(4)目的基因的兩端都有BamHⅠ的識別序列，質粒的啟動子后抗生素A抗性基因上也有BamHⅠ的識別序列，故應選用的限制酶是BamHⅠ，此時將抗生素B抗

24、性基因作為標記基因，故篩選時培養(yǎng)基中要添加抗生素B。經(jīng)過同種限制酶切割后會產生相同的未端，部分目的基因與質粒反向連接而導致基因無法正常表達。 答案：(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamH Ⅰ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接 [教師備選題庫] 1．(2011·浙江高考)將ada(腺苷酸脫氨酶基因)通過質粒pET28b導入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是(　　) A．每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質粒 B．每個重組質粒至少含一個限制性核酸內切酶識別位點 C．

25、每個限制性核酸內切酶識別位點至少插入一個ada D．每個插入的ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子 解析：選C　每個限制酶識別位點處只能插入一個ada，插入的ada成功表達，說明每個插入的ada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子。 2．(2011·四川高考)北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個氨基酸的重復序列，該序列重復次數(shù)越多，抗凍能力越強。下圖是獲取轉基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關敘述正確的是(　　) A．過程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序 B．將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達的新基因，不能得到抗凍性增強的抗凍蛋白 C．過程②構成的重組質粒

26、缺乏標記基因，需要轉入農桿菌才能進行篩選 D．應用DNA探針技術，可以檢測轉基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達 解析：選B　過程①為逆轉錄過程獲得目的基因，缺少相應內含子，所以用這種方法獲得的基因不能用于比目魚基因組測序。將多個抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達的新基因，得到的蛋白質其抗凍性并不增強。重組質粒上有標記基因，并不是轉入農桿菌才能篩選，而是用農桿菌轉化法，有利于重組質粒導入受體細胞。應用DNA探針技術，可以檢測目的基因是否在受體細胞中存在，并不能檢測其是否表達。 3．(2010·全國卷Ⅱ)下列敘述符合基因工程概念的是(　　) A．B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中

27、含有B淋巴細胞中的抗體基因 B．將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿菌，獲得能產生人干擾素的菌株 C．用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產菌株 D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后其DNA整合到細菌DNA上 解析：選B　基因工程又叫基因拼接技術或DNA重組技術，是一種人為的操作過程。A項屬于細胞工程；B項符合基因工程的概念；C項屬于誘變育種；D項是自然發(fā)生的，不是人為操作的，不屬于基因工程。 4．(2010·浙江高考)在用基因工程技術構建抗除草劑的轉基因煙草過程中，下列操作錯誤的是(　　) A．用限制性核酸內切酶切割煙草花葉病毒的核酸 B．用DN

28、A連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體 C．將重組DNA分子導入煙草原生質體 D．用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉基因煙草細胞 解析：選A　限制性核酸內切酶切割的是DNA，而煙草花葉病毒的遺傳物質為RNA；目的基因與載體的連接由DNA連接酶催化連接；受體細胞為植物細胞，所以可以是煙草原生質體；目的基因為抗除草劑基因，所以篩選的時候應該用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉基因細胞。 5．(2011·江蘇高考)請回答基因工程方面的有關問題： (1)利用PCR技術擴增目的基因，其原理與細胞內DNA復制類似(如圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。 ①從理論上推測，第四輪循環(huán)產物中含

29、有引物A的DNA片段所占的比例為________。 ②在第________輪循環(huán)產物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。 (2)設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物(只標注了部分堿基序列)都不合理(如下圖)，請分別說明理由。 ①第1組：______________________________________________________________ ②第2組：_________________________________________________________________ (3)PCR反應體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達

30、式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因為__________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)用限制酶EcoRV、MboⅠ單獨或聯(lián)合切割同一種質粒，得到的DNA片段長度如圖(1 kb即1000個堿基對)，請在指定位置畫出質粒

31、上EcoRV、MboⅠ的切割位點。 解析：(1)①根據(jù)PCR過程的特點繪制PCR過程示意圖如圖所示，由圖可知，由原來的每條母鏈為模板合成的兩個新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時，兩種引物都含有，故第四輪循環(huán)共產生16個DNA分子，其中含有引物A的分子是15個，占15/16。 ②由圖示可知，第一、二輪循環(huán)合成的子鏈長度均不同，根據(jù)半保留復制特點可知，前兩輪循環(huán)產生的四個DNA分子的兩條鏈均不等長，第三輪循環(huán)產生的DNA分子存在等長的兩條核苷酸鏈，如圖。 (2)在第1組引物中，引物Ⅰ的部分堿基序列是CAGGCT，引物Ⅱ的部分堿基序列是AGC

32、CTG，若利用這兩個引物進行DNA擴增，會因其中的部分堿基發(fā)生堿基互補配對而使引物失效。在第2組引物中，引物Ⅰ′的部分堿基序列是AACTG和CAGTT，該引物一旦發(fā)生自身折疊，也將會出現(xiàn)部分堿基發(fā)生堿基互補配對而使引物失效。(3)圖中直接將兩個脫氧核苷酸合成DNA單鏈，這不是DNA聚合酶的功能。DNA聚合酶只能在DNA模板存在的條件下，將單個脫氧核苷酸連續(xù)結合到雙鏈DNA片段的引物鏈上。 (4)根據(jù)圖示，該質粒為環(huán)形質粒。用限制酶EcoRⅤ單獨切割該質粒時，只形成一個片段，說明該質粒上只有1個限制酶EcoRⅤ的識別位點。用限制酶MboⅠ單獨切割該質粒時，形成兩個片段，說明該質粒上有兩個限制酶MboⅠ的識別位點。用限制酶EcoRⅤ和MboⅠ聯(lián)合切割該質粒時，形成三個片段，其中有一個片段的長度與用MboⅠ單獨切割該質粒時產生的片段長度相同(2.5 kb)，另外的兩個片段是5.5 kb和6 kb，這說明限制酶EcoRⅤ的切割位點存在于用MboⅠ單獨切割該質粒時產生的另一片段(11.5 kb)上。 答案：(1)①15/16?、谌? (2)①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部發(fā)生堿基互補配對而失效?、谝铫瘛渥陨碚郫B后會出現(xiàn)局部堿基互補配對而失效　(3)DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連續(xù)結合到雙鏈DNA片段的引物鏈上 (4)見右圖