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1、呂文婷 侯婷 黑紅亞 姚海巖 侯碧玉 肖飛燕,靜脈注射加替沙星在家兔體內(nèi)的藥代動力學(xué),實驗?zāi)康?1.學(xué)會測定家兔血藥濃度的方法 2.掌握HPLC的使用 3.掌握藥代動力學(xué)參數(shù)的計算,實驗原理,加替沙星為第三代喹諾酮類藥物。 喹諾酮類藥物是一種DNA旋轉(zhuǎn)酶抑制劑, 它作用于細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶, 干擾DNA超螺旋結(jié)構(gòu)的解旋, 從而阻礙DNA的復(fù)制, 而呈現(xiàn)殺菌作用。 該類藥物的共同特點是: 抗菌作用強大, 抗菌譜較廣, 主要對抗革蘭陰性菌,對革蘭陽性菌也有相當(dāng)作用。在體內(nèi)的分布較廣, 可進(jìn)入大多數(shù)藥物不能進(jìn)入的骨、關(guān)節(jié)和前列腺組織等。 加替沙星在體內(nèi)符合二房室模型,實驗材料與儀器,1.1藥物與試劑

2、鹽酸加替沙星。 甲醇( 色譜純), 醋酸銨, 10%高氯酸溶液, 重蒸水，均為分析純試劑。,實驗材料與儀器,1.2動物 健康家兔1只,實驗材料與儀器,1.3儀器 高效液相色譜儀 旋渦混合器 離心機 手術(shù)器械,實驗方法,2.1色譜條件 色譜柱為ODS柱, 流動相：水相為15mmol/L醋酸銨，醋酸調(diào)pH為3.0, 有機相為乙腈。 水相-有機相( 78:22) , 流速1.0ml/ min, 檢測波長為293nm, 柱溫為40。,,實驗方法,2.2樣品的采集 取健康家兔進(jìn)行稱重,麻醉, 股動脈插管作取血用。 將加替沙星注射液按每30mg/kg從耳緣靜脈給藥 停止給藥后分別于2,

3、5, 10, 15,30,45,60,90,120min時進(jìn)行血液采集, 裝入無菌微量離心管中。 每次取血o.5ml，每管血液中加入1滴肝素抗凝。 離心(4000r/min)15min. 取血漿0.2ml，備用。,,實驗方法,2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 稱取100mg加替沙星標(biāo)準(zhǔn)品，加入100ml甲醇，配成1mg/ L母液; 用母液加甲醇。分別稀釋成500，250，125，62.5，31.2，15.6，7.8，3.9ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,實驗方法,2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 取10ul標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入90ul空白血漿，分別稀釋成 50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78，0.39ug

4、/ml 加 10%高氯酸溶液0.1ml, 混勻, 渦旋震蕩3min， 12000rpm離心10min 取上清液120ul轉(zhuǎn)移至另一離心管內(nèi)，取20l 進(jìn)樣 以加替沙星濃度C(g/ ml) 對相應(yīng)峰面積A回歸, 得回歸方程。,實驗方法,2. 3.3 樣品處理 取兔血漿0.1ml, 加 10%高氯酸溶液0.1ml, 混勻, 渦旋震蕩3min，12000rpm離心10min 取上清液120ul轉(zhuǎn)移至另一離心管內(nèi)，取20l 進(jìn)樣。 計算加替沙星峰面積A,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線求得各時間點的血藥濃度。,實驗方法,2.3.4用Kinetica 4.4計算藥代動力學(xué)參數(shù),,實驗結(jié)果,2.4.1.標(biāo)準(zhǔn)曲線,實驗結(jié)果,實

5、驗結(jié)果,2.4.2 血藥濃度-時間曲線,實驗結(jié)果,2.4.3,實驗結(jié)果,2.4.4 c-t圖像（kinetica4.4自動生成，權(quán)重：1/c2,c為計算值）,實驗結(jié)果,2.5.5 藥代動力學(xué)參數(shù),,討論,實驗結(jié)果可得加替沙星在體內(nèi)消除符合二房室模型，與文獻(xiàn)相符。但求出的藥代動力學(xué)參數(shù)和文獻(xiàn)有較大差異，原因可能是： 1. 給藥劑量不一樣，導(dǎo)致與劑量有關(guān)的參數(shù)不一樣，如AUC，C0等。 2. 文獻(xiàn)用的軟件是3p87，我們用的是kinetica4.4.不同軟件計算方法不一樣，可能算出來的結(jié)果也不一樣。 3. 擬合時可以選擇不同的權(quán)重系數(shù)，權(quán)重系數(shù)有1,1/c,1/c2等。常用的有1和1/c2(kinetica還有測量值和計算值之分)，不同權(quán)重系數(shù)的結(jié)果差異很大，沒有可比性。因此可能有更合適的方法可以用來擬合。,討論,此外，實驗中的注意事項有： 1. 動物實驗取血時要防止凝血，取血時間點要準(zhǔn)確。 2. 用HPLC測定時，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品要在同一臺儀器上測。 3. 每次進(jìn)樣量要固定。平行操作減少誤差。 4. 色譜柱使用前要活化，更換流動相后要平衡30min-1h。實驗結(jié)束后要用甲醇沖柱子。,,Thank you！,