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1、專題1 基因工程1.2 基因工程的基本操作程序 比較DNA復(fù)制PCR技術(shù)區(qū)別解旋方式解旋酶催化DNA在高溫作用下變性解旋場所細(xì)胞內(nèi)(主要在細(xì)胞核內(nèi))細(xì)胞外(主要在PCR擴增儀內(nèi)) 區(qū)別酶DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐熱的DNA聚合酶(Taq聚合酶)溫度條件細(xì)胞內(nèi)溫和條件需控制溫度，在較高溫度下進行合成的對象DNA分子DNA片段或基因聯(lián)系模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進行物質(zhì)合成原料：均為四種脫氧核苷酸酶：均需要DNA聚合酶進行催化引物：均需要引物，使DNA聚合酶從引物的3端開始連接脫氧核苷酸 受體細(xì)胞方法植物細(xì)胞(體細(xì)胞)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞

2、穩(wěn)定維持和表達基因槍法：是單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法，但是成本較高花粉管通道法：這是我國科學(xué)家獨創(chuàng)的一種方法，是一種十分簡便經(jīng)濟的方法 動物細(xì)胞(受精卵)顯微注射法：含有目的基因的表達載體提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物微生物細(xì)胞(原核細(xì)胞) Ca2處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制 比較起始(終止)密碼子啟動(終止)子本質(zhì)三個相鄰堿基DNA片段位置位于mRNA上位于DNA上作用啟動(終止)翻譯啟動(終止)轉(zhuǎn)錄 類型步驟檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平檢測第一步目的基因是否進入受體細(xì)胞DNA分子雜交(DNA和DNA之間)是否成功顯示出雜交帶第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交技術(shù)(DNA和mRNA之間)是否成功顯示出雜交帶第三步目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)抗原抗體雜交是否成功顯示出雜交帶 個體水平鑒定需要做抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進行活性比較，以確定二者的功能活性是否相同等