《吉林大學(xué)《儀器分析》4-高效液相色譜法》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《吉林大學(xué)《儀器分析》4-高效液相色譜法（42頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 第四章 高效液相色譜法 High Performance Liquid Chromatography 定 義 ： 以 液 體 作 為 流 動 相 的 色 譜 法 稱 為 液 相 色 譜 法高 效 液 相 色 譜 法 （ HPLC） ： 20世 紀(jì) 60年 代 末 70年 代技 術(shù) ： 高 壓 泵 、 高 效 固 定 相 和 高 靈 敏 度 檢 測 器特 點(diǎn) ： 速 度 快 、 效 率 高 、 靈 敏 度 高 、 操 作 自 動 化一 、 概 述4.1 高效液相色譜法簡介 1高 效 液 相 色 譜 法 與 經(jīng) 典 液 相 色 譜 法 比 較 高 速 ： H PLC分 離 效 率 高 ， 速 度

2、 快 ， 一 次 幾 分 鐘 和 幾 十 分 鐘就 可 完 成 。 色 譜 柱 的 壽 命 長 ， 可 達(dá) 兩 年 以 上 。 高 效 ： H PLC高 壓 (26 MPa)下 操 作 ， 填 料 顆 粒 小 (250 m)，規(guī) 則 均 勻 的 固 定 相 ， 傳 質(zhì) 阻 力 小 ， 柱 效 高 (N = 400060000 塊 /m)， 分 離 效 率 高 。 高 靈 敏 度 ： 現(xiàn) 代 高 效 液 相 色 譜 儀 普 遍 配 有 高 靈 敏 度 檢 測 器 ，使 分 析 靈 敏 度 比 經(jīng) 典 色 譜 有 大 提 高 （ 紫 外 檢 測 器 最 小 檢 測限 可 達(dá) 10 -9 g； 熒

3、光 檢 測 器 最 小 檢 測 限 可 達(dá) 10-1110-13 g。 高 自 動 化 ： H PLC進(jìn) 樣 量 小 (xx0 L)。 帶 有 自 動 進(jìn) 樣 裝 置 和工 作 站 。 2 高 效 液 相 色 譜 法 與 氣 相 色 譜 法 的 比 較 適 用 范 圍 GC適 用 于 沸 點(diǎn) 低 、 熱 穩(wěn) 定 性 好 、 中 小 分 子 量 的 化 合 物 ，HPLC不 受 此 種 限 制 。 氣 相 色 譜 一 般 都 在 較 高 溫 度 下 進(jìn) 行 ，而 高 效 液 相 色 譜 法 則 經(jīng) 常 可 在 室 溫 條 件 下 工 作 。 流 動 相 GC流 動 相 僅 運(yùn) 載 樣 品 ， 不

4、 起 分 離 作 用 ， 但 無 毒 ， 易 于處 理 。 而 HPLC流 動 相 除 了 運(yùn) 載 樣 品 外 ， 還 有 分 離 作 用 ， 可改 變 流 動 相 組 成 ， 進(jìn) 行 有 效 的 分 離 。 但 流 動 相 一 般 有 毒 ， 費(fèi)用 高 。 色 譜 柱 GC柱 很 長 ， 特 別 是 毛 細(xì) 管 柱 可 長 至 幾 十 米 至 上 百 米 ， 柱 效很 高 (理 論 塔 板 數(shù) N = 104106)。 HPLC柱 較 短 ， 一 般 為 1525 cm， 柱 效 (理 論 塔 板 數(shù) N = 103104)， 低 于 GC柱 。 檢 測 器 與 GC相 比 ， HPLC檢

5、測 器 種 類 較 多 。 制 備 色 譜 GC難 以 制 備 樣 品 ， 因 為 進(jìn) 樣 量 小 ， 難 以 收 集 或 被 破 壞 。HPLC可 進(jìn) 行 制 備 ， 即 制 備 色 譜 。 一 高 效 液 相 色 譜 儀 的 結(jié) 構(gòu) 4.2 高 效 液 相 色 譜 儀 一 般 分 為 4個(gè) 主 要 部 分 ： 高 壓 輸 液 系 統(tǒng) 、 進(jìn) 樣 系 統(tǒng) 、 分離 系 統(tǒng) 和 檢 測 系 統(tǒng) 。 此 外 還 配 有 輔 助 裝 置 ： 如 梯 度 洗脫 、 自 動 進(jìn) 樣 及 數(shù) 據(jù) 處 理 等 。工 作 過 程 如 下 ： 首 先 高 壓 泵 將 貯 液 器 中 流 動 相 溶 劑 經(jīng) 過

6、 進(jìn) 樣 器 送 入色 譜 柱 ， 然 后 從 控 制 器 的 出 口 流 出 。 當(dāng) 注 入 欲 分 離 的 樣品 時(shí) ， 流 經(jīng) 進(jìn) 樣 器 貯 液 器 的 流 動 相 將 樣 品 同 時(shí) 帶 入 色 譜柱 進(jìn) 行 分 離 ， 然 后 依 先 后 順 序 進(jìn) 入 檢 測 器 ， 記 錄 儀 將 檢測 器 送 出 的 信 號 記 錄 下 來 ， 由 此 得 到 液 相 色 譜 圖 。 數(shù) 據(jù) 分 析系 統(tǒng)輸 液 系 統(tǒng) 進(jìn) 樣 系 統(tǒng) 分 離 系 統(tǒng)檢 測 系 統(tǒng)HPLC的 系 統(tǒng) 組 成 數(shù) 據(jù) 處 理 系 統(tǒng) 1. 高 壓 輸 液 系 統(tǒng) ： 一 般 由 儲 液 罐 、 高 壓 輸 液

7、泵 、 過 濾 器 、 壓 力 脈 動 阻 力 器 等 組成 ， 其 中 高 壓 輸 液 泵 是 核 心 部 件 。高 壓 泵 應(yīng) 滿 足 如 下 要 求 ： 流 量 恒 定 ， 無 脈 動 ， 并 有 較 大 的 調(diào) 節(jié) 范 圍 。 能 抗 溶 劑 的 腐 蝕 ， 耐 酸 、 耐 堿 。 有 較 高 的 輸 送 壓 力 。 一 般 分 離 ， 6.0 10 4 Pa壓 力 ； 高 效 分離 ， 要 求 達(dá) 到 1.53.0 107 Pa的 壓 力 或 更 高 。 泵 的 死 體 積 要 小 ， 便 于 迅 速 更 換 溶 劑 和 進(jìn) 行 梯 度 淋 洗 。 常 用 的 輸 液 泵 分 為 恒

8、 流 泵 和 恒 壓 泵 兩 種 : 恒 流 泵 是 在 一 定 操 作 條 件 下 ， 輸 出 流 量 恒 定 ， 與色 譜 柱 引 起 阻 力 變 化 無 關(guān) 。 恒 壓 泵 能 保 持 輸 出 壓 力 恒 定 ， 其 流 量 隨 色 譜 系 統(tǒng)阻 力 而 變 化 ， 保 留 時(shí) 間 的 重 現(xiàn) 性 差 。 目 前 恒 流 泵 正 逐 漸 取 代 恒 壓 泵 ， 恒 流 泵 又 稱 機(jī) 械泵 ， 又 分 機(jī) 械 注 射 泵 和 機(jī) 械 往 復(fù) 泵 兩 種 ， 應(yīng) 用 最 多的 是 機(jī) 械 往 復(fù) 泵 。 在 分 離 過 程 中 ， 使 流 動 相 的 組 成 、 極 性 、 pH 等 按

9、一 定程 序 連 續(xù) 變 化 ， 使 樣 品 中 各 組 分 能 在 最 佳 條 件 下 出峰 ， 保 留 時(shí) 間 短 、 擁 擠 不 堪 甚 至 重 疊 的 組 分 和 保 留時(shí) 間 過 長 而 峰 形 扁 平 的 組 分 獲 得 很 好 的 分 離 。通 過 逐 漸 改 變 流 動 相 的 組 成 增 加 洗 脫 能 力 ， 梯 度 洗 脫裝 置 將 兩 種 或 三 種 、 四 種 溶 劑 按 一 定 比 例 混 合 進(jìn) 行二 元 或 三 元 、 四 元 梯 度 洗 脫 。 梯 度 洗 脫 的 優(yōu) 點(diǎn) ： 改 善 峰 形 ； 提 高 柱 效 ； 減 少 分 析 時(shí) 間 ； 使 強(qiáng) 烈 滯

10、留 的 組 分 不 容 易 殘 留 在 柱 上 ， 保 持 良 好 的 柱 性 能（ 但 進(jìn) 行 下 次 分 析 時(shí) ， 更 換 流 動 相 達(dá) 到 平 衡 時(shí) 間 長 ） 。 梯 度 洗 脫 與 氣 相 色 譜 的 程 序 升 溫 十 分 類 似 ， 兩 者 的 目 的 相同 ， 不 同 的 是 程 序 升 溫 是 通 過 改 變 柱 溫 ， 而 液 相 色 譜 的 梯度 洗 脫 是 通 過 改 變 流 動 相 的 組 成 、 極 性 、 pH 來 達(dá) 到 改 變 k的 目 的 。 在 高 效 液 相 色 譜 中 ， 常 用 的 進(jìn) 樣 方 式 ：高 壓 閥 進(jìn) 樣 ： 優(yōu) 點(diǎn) 是 能 用

11、于 高 壓 ， 適 于 大 體 積 進(jìn) 樣 ， 重 現(xiàn) 性好 ； 缺 點(diǎn) 是 進(jìn) 樣 閥 進(jìn) 樣 時(shí) 需 排 掉 一 部 分 試 樣 ， 不 同 的 進(jìn) 樣量 需 用 不 同 的 定 量 管 ， 同 時(shí) 峰 的 擴(kuò) 展 也 比 注 射 進(jìn) 樣 大 。微 量 注 射 器 進(jìn) 樣 ： 也 可 由 微 量 注 射 器 注 入 取 樣 環(huán) 少 量 樣 品 ，即 采 用 較 大 體 積 取 樣 環(huán) 而 進(jìn) 少 量 試 樣 ， 進(jìn) 樣 量 由 注 射 器 控制 ， 試 樣 不 充 滿 取 樣 環(huán) ， 只 填 充 一 部 分 體 積 。2. 進(jìn) 樣 系 統(tǒng) 3. 分 離 系 統(tǒng) -色 譜 柱 色 譜 柱 是

12、 液 相 色 譜 的 心 臟 部 件 ， 它 包 括 柱 管 與 固定 相 兩 部 分 。 柱 管 材 料 有 玻 璃 、 不 銹 鋼 、 鋁 、 銅 及內(nèi) 襯 光 滑 的 聚 合 材 料 的 其 它 金 屬 。 玻 璃 管 耐 壓 有 限 ，故 金 屬 管 用 得 較 多 。 一 般 色 譜 柱 長 1530 cm， 內(nèi) 徑為 45 mm， 凝 膠 色 譜 柱 內(nèi) 徑 312 mm， 制 備 柱 內(nèi) 徑較 大 ， 可 達(dá) 25 mm 以 上 。 固 定 相 表 面 多 孔 固 定 相 全 多 孔 微 粒 固 定 相直徑210 m，孔徑2100 nm， 比表面積x0 x00 m 2/g。現(xiàn) 在

13、 最 廣 泛 采 用 的 填 料 是 全 多 孔 微 粒 硅 膠12 m直徑1025 m 化 學(xué) 鍵 合 固 定 相 化 學(xué) 鍵 合 相 色 譜 柱 雖 然 可 將 固 定 液 機(jī) 械 地 涂 附 在 上 述 表 面 多 孔 硅 膠 或全 多 孔 硅 膠 上 作 固 定 相 ， 但 有 許 多 缺 點(diǎn) ， 因 此 現(xiàn) 在 多采 用 化 學(xué) 鍵 合 固 定 相 。 化 學(xué) 鍵 合 固 定 相 是 在 表 面 多 孔或 全 多 孔 硅 膠 表 面 上 利 用 化 學(xué) 反 應(yīng) 法 通 過 化 學(xué) 鍵 把 有機(jī) 分 子 結(jié) 合 在 載 體 表 面 。 鍵 合 類 型 ： 疏 水 基 團(tuán) ： 如 C8、

14、 C18； 極 性 基 團(tuán) ： 如 丙 氨 基 (-C 3H6NH2)、 氰 乙 基 (-C2H4CN)； 離 子 交 換 基 團(tuán) ， 如 陰 離 子 交 換 （ -NR3Cl） 、 陽 離 子（ -SO3H） ； 鍵 合 途 徑 ： SiOC 鍵 型 SiOSiC 鍵 型 (最 常 用 ) SiC 鍵 型 Si-OH ROH Si-O-R H2O Si-OH R3SiCl Si-O-SiR3 HCl Si-OHSOCl2 Si-Cl(+SO2+HCl) Si-R(+MgCl2)RMgCl o 煤 油H 2OCH 3CNCH 3OH 流 動 相 正 相 色 譜 極 性 ： 流 動 相 固 定

15、相 反 相 色 譜 極 性 ： 流 動 相 固 定 相a 流 動 相 純 度 要 高 ， 與 固 定 相 不 相 溶 ， 不 發(fā) 生 化 學(xué) 反 應(yīng)b 價(jià) 格 便 宜 ， 毒 性 小 ， 易 于 純 化c 對 試 樣 溶 解 度 適 宜 ， 不 發(fā) 生 沉 淀d 粘 度 小e 與 檢 測 器 匹 配極 性 順 序 ： 水 乙 腈 甲 醇 四 氫 呋 喃 環(huán) 己 烷 煤 油 4. 檢 測 系 統(tǒng) 在 液 相 色 譜 中 ， 有 兩 種 基 本 類 型 的 檢 測 器 : 溶 質(zhì) 性 檢 測 器 ： 僅 對 被 分 離 組 分 的 物 理 或 化 學(xué) 特 性有 響 應(yīng) ， 有 紫 外 UVD、 熒

16、 光 FD、 二 極 管 陣 列 檢 測 器DAD等 。 總 體 檢 測 器 ： 對 試 樣 和 洗 脫 液 總 的 物 理 或 化 學(xué) 性 質(zhì)有 響 應(yīng) ， 有 示 差 折 光 檢 測 器 RID、 電 化 學(xué) 檢 測 器 ECD、蒸 發(fā) 光 散 射 檢 測 器 ELSD和 質(zhì) 譜 檢 測 器 MSD等 。 藥 典 中 的 液 相 色 譜 檢 測 器 常 用 的 檢 測 器 :(1) 紫 外 光 度 檢 測 器 ： 是 一 種 選 擇 性 濃 度 檢 測 器 ， 僅對 那 些 在 紫 外 波 長 有 吸 收 的 物 質(zhì) 有 響 應(yīng) 。 作 用 原 理 ： 基 于 待 測 試 樣 對 特 定

17、波 長 的 紫 外 光 有 選 擇性 的 吸 收 ， 試 樣 濃 度 與 吸 光 度 的 關(guān) 系 服 從 比 爾 定 律 。 結(jié) 構(gòu) ：1 低 壓 汞 燈 2 透 鏡 3 遮 光 板 4 測 量 池 5 參 比 池 6 紫 外 濾 光 片 7 雙 紫 外 光 敏 電 阻 現(xiàn) 在 多 數(shù) 采 用 氘 燈 作 為 紫 外 光 源 燈 流 動 池 光 電 二 極 管RS 樣 品 入 口Hg 254Zn 214Cd 229D2 可 變 UV 檢 測 器 To amplifier 優(yōu) 點(diǎn) ： 靈 敏 度 高 （ 最 小 檢 測 度 109 g/mL） ， 對 溫 度 和流 速 不 敏 感 ， 可 用 于

18、 梯 度 洗 脫 ；缺 點(diǎn) ： 只 能 用 于 對 紫 外 光 有 吸 收 組 分 的 測 定 ， 溶 劑 的 選擇 受 限 制 。 在 高 效 液 相 色 譜 中 應(yīng) 用 最 廣 ， 約 占 70%。 適 于 梯 度洗 脫 ， 對 流 動 相 速 度 變 化 不 敏 感 ， 流 動 相 組 成 的 變 化 對檢 測 器 響 應(yīng) 幾 乎 無 影 響 。 對 于 在 紫 外 -可 見 光 區(qū) 無 強(qiáng) 吸 收 的 組 分 ， 需 要 經(jīng) 過衍 生 化 ， 才 可 以 用 紫 外 檢 測 器 ， 如 糖 類 、 氨 基 酸 、 類 脂化 物 。 不 能 用 在 紫 外 -可 見 光 有 吸 收 的

19、溶 劑 作 流 動 相 。 溶 劑 透 過 波 長 下 限 溶 劑 透 過 波 長 下 限水 180 n-庚 烷 197甲 醇 210 環(huán) 乙 胺 200n-丙 醇 二 酸 205 四 氯 化 碳 265乙 腈 190 氯 仿 245TH F 230 苯 280丙 酮 330 甲 苯 285乙 酸 甲 酯 260 二 氯 甲 烷 232乙 酸 乙 酯 260 四 氯 乙 烯 280硝 基 甲 烷 380 1,2-二 氯 乙 烷 225常 用 溶 劑 透 過 波 長 限 ： (2) 光 二 極 管 陣 列 檢 測 器 ： 是 一 種 更 為 先 進(jìn) 的 檢 測 器 。 從 氘 燈 輻 射 通 過

20、 移 動 部 件 （ 光 閘 ） ， 直 接通 過 吸 收 池 、 狹 縫 、 光 柵 ， 分 光 后 分 別 照 射 約 千 個(gè) 二 極 管 陣 列 檢 測 器 上 ，約 10 ms給 出 一 次 信 號 ， 保 證 保 留 時(shí) 間 極 短 的 色 譜 組 分 的 光 譜 圖 不 失 真 。因 此 數(shù) 據(jù) 重 現(xiàn) 性 好 ， 靈 敏 度 高 ， 適 于 痕 量 分 析 。 氘 燈 棱 鏡 池 子 全 息 光 柵 二 極 管 陣 列512 Diodes190 - 950 nm 優(yōu) 點(diǎn) ： 獲 得 吸 收 值 是 保 留 時(shí) 間 和 波 長 函 數(shù) 的 類 似 于 等高 線 的 三 維 圖 ；

21、由 于 獲 得 多 種 信 息 ， 使 每 一 個(gè) 組 分 在整 個(gè) 波 長 范 圍 內(nèi) 的 光 譜 信 息 大 大 增 加 ， 及 時(shí) 得 出 每 一組 分 的 色 譜 圖 相 應(yīng) 的 光 譜 數(shù) 據(jù) ， 確 定 最 佳 選 擇 性 和 靈敏 度 的 波 長 ； 可 以 與 色 譜 工 作 站 聯(lián) 用 ， 對 每 一 個(gè) 峰 從程 序 庫 中 進(jìn) 行 檢 索 來 確 定 該 化 合 物 。 例 如 ： 菲 的 三 維 譜 圖 如 下 熒 光 檢 測 器 ：是 利 用 某 些 試 樣 具 有 熒 光 特 性 來 檢 驗(yàn) 的 。 許 多 有 機(jī) 化 合 物具 有 天 然 熒 光 活 性 ， 其

22、中 帶 有 芳 香 基 團(tuán) 的 化 合 物 具 有 熒光 活 性 很 強(qiáng) 。 一 定 條 件 下 ， 熒 光 強(qiáng) 度 與 物 質(zhì) 濃 度 成 正 比 。熒 光 檢 測 器 是 一 種 選 擇 性 檢 測 器 ， 適 合 于 含 有 -共 軛 體 系的 大 分 子 、 結(jié) 構(gòu) 復(fù) 雜 的 化 合 物 ， 如 稠 環(huán) 芳 烴 、 甾 族 化 合物 、 酶 、 氨 基 酸 、 維 生 素 、 色 素 、 蛋 白 質(zhì) 等 物 質(zhì) 的 測 定 。最 小 檢 測 限 可 達(dá) 10-11 10-13 g， 可 以 用 梯 度 洗 脫 。 (4) 示 差 折 光 檢 測 器 ： 是 一 種 中 等 靈 敏 度

23、 (106 g/mL)的 通 用 型 檢 測 器 。是 利 用 純 流 動 相 和 含 有 待 測 組 分 的 流 動 相 之 間 折 射 率 的差 別 進(jìn) 行 檢 測 的 ?？?分 為 三 類 ： 反 射 式 ； 折 射 式 （ 偏 振 式 ） 和 干 涉 式 。 常用 前 兩 種 。優(yōu) 點(diǎn) ： 靈 敏 度 適 宜 ， 操 作 簡 便 是 一 種 通 用 型 的 檢 測 器 ；缺 點(diǎn) ： 對 溫 度 變 化 敏 感 ， 不 能 用 于 梯 度 洗 脫 。應(yīng) 用 范 圍 ： 聚 合 物 、 糖 。 還 用 于 分 析 以 紫 外 檢 測 和 熒 光檢 測 器 無 法 檢 測 的 樣 品 。 (

24、5) 蒸 發(fā) 光 散 射 檢 測 器 （ ELSD） 結(jié) 構(gòu) 光 源 檢 測 器 霧 化 散 射 光 蒸 發(fā) 柱 檢 測 H PLCN2 ELSD是 90年 代 研 制 的 ， 是 利 用 在 一 定 條 件 下 粒 子 的 數(shù) 量 不 變 ，光 散 射 強(qiáng) 度 正 比 于 由 溶 質(zhì) 濃 度 決 定 的 粒 子 的 大 小 而 進(jìn) 行 測 量 的 。 ELSD原 理 是 基 于 光 線 通 過 微 小 的 粒 子 時(shí) 產(chǎn) 生 光 散 射 現(xiàn) 象 。 由 色譜 柱 分 離 的 組 分 隨 流 動 相 進(jìn) 入 霧 化 器 中 被 高 速 的 載 氣 流 （ 氮 氣 或 空氣 ） 噴 成 一 種

25、薄 霧 ， 進(jìn) 入 蒸 發(fā) 器 后 蒸 發(fā) 成 蒸 氣 ， 再 被 光 阱 捕 集 ， 以防 止 反 射 。 蒸 氣 態(tài) 的 溶 劑 通 過 光 路 后 ， 光 線 反 射 到 檢 測 器 后 被 記 錄成 基 線 。 云 霧 狀 溶 質(zhì) 顆 粒 通 過 光 路 時(shí) ， 使 光 線 散 射 后 被 光 電 倍 增 管收 集 得 到 樣 品 信 號 。 ELSD是 示 差 折 光 檢 測 器 的 新 型 替 代 品 ， 樣 品 主 要 用 于 不 產(chǎn) 生 熒光 和 又 無 紫 外 吸 收 的 有 機(jī) 物 如 糖 類 、 高 級 脂 肪 酸 、 磷 脂 、 甘 油 三 酯 、維 生 素 、 甾 類

26、 皂 苷 等 物 質(zhì) 的 測 定 。 對 梯 度 洗 脫 和 流 動 相 系 統(tǒng) 溫 度 變化 不 敏 感 ； 可 用 于 梯 度 洗 脫 。 ELSD的 優(yōu) 缺 點(diǎn) ： 通 用 性 強(qiáng) ， 靈 敏 度 高 。 對 流 動 相 系 統(tǒng) 溫 度 變 化 不 敏 感 ， 可 進(jìn) 行 梯 度 洗 脫 。 響 應(yīng) 因 子 具 有 一 致 性 。 響 應(yīng) 值 僅 取 決 于 光 束 中 溶 質(zhì) 顆 粒 的 大 小和 數(shù) 量 ， 檢 測 器 對 有 的 物 質(zhì) 幾 乎 具 有 相 同 的 響 應(yīng) 因 子 。 可 消 除 流 動 相 和 雜 質(zhì) 的 干 擾 ， 提 高 分 辯 率 。 用 于 磷 脂 、 皂

27、 甙 、糖 、 聚 合 物 、 樹 脂 等 無 紫 外 吸 收 或 紫 外 吸 收 系 數(shù) 小 的 化 合 物 檢 測 。 便 于 應(yīng) 用 質(zhì) 譜 分 析 。 因 為 蒸 發(fā) 光 散 射 質(zhì) 量 檢 測 器 與 質(zhì) 譜 條 件 的要 求 是 一 致 的 。 受 樣 品 組 分 和 流 動 相 揮 發(fā) 性 因 素 限 制 。 要 求 樣 品 組 分 應(yīng) 是 非 揮發(fā) 性 或 半 揮 發(fā) 性 的 ， 而 流 動 相 應(yīng) 是 揮 發(fā) 性 溶 劑 。 對 某 些 樣 品 線 性 范 圍 窄 ， 有 時(shí) 不 呈 現(xiàn) 線 性 關(guān) 系 ， 定 量 分 析 復(fù) 雜 。 電 化 學(xué) 檢 測 器 ：安 培 檢 測

28、 器 ： 由 三 電 極 系 統(tǒng) 與 恒 電 位 儀 相 連 接 。 工 作 電 極 為 玻 璃 或 石 墨 電 極 ，輔 助 電 極 是 鉑 絲 ； 從 柱 后 流 出 物 進(jìn) 入 反 應(yīng) 池 ， 在 工 作 電 極 表 面 發(fā) 生 氧 化或 還 原 反 應(yīng) ， 兩 電 極 之 間 有 電 流 通 過 ， 電 流 大 小 與 被 測 物 濃 度 成 正 比 。只 能 檢 測 電 化 學(xué) 活 性 物 質(zhì) 。 該 檢 測 器 選 擇 性 好 ， 靈 敏 度 高 。 如 ： 對 腎 上腺 素 和 去 甲 腎 上 腺 素 ， 檢 測 限 達(dá) 10-12 g。極 譜 檢 測 器 ： 基 于 被 測 組

29、 分 可 在 電 極 上 發(fā) 生 氧 化 還 原 反 應(yīng) 而 設(shè) 計(jì) 的 一 種 檢 測 器 。 可 用于 測 定 具 有 極 譜 活 性 的 物 質(zhì) ， 如 藥 物 、 維 生 素 、 有 機(jī) 酸 、 苯 胺 等 。 它 的靈 敏 度 高 ， 適 于 痕 量 分 析 。電 導(dǎo) 檢 測 器 ： 主 要 用 于 離 子 色 譜 。 原 理 是 基 于 物 質(zhì) 在 某 些 介 質(zhì) 中 電 離 后 所 產(chǎn)生 電 導(dǎo) 變 化 來 測 定 電 離 物 質(zhì) 的 含 量 。 電 導(dǎo) 檢 測 器 對 pH 7時(shí) 不 夠 靈 敏 ， 受 溫 度 影 響 較 大 。 5. 附 屬 系 統(tǒng) 包 括 脫 氣 、 梯

30、度 洗 脫 、 恒 溫 、 自 動 進(jìn) 樣 、 餾 分 收 集 以及 數(shù) 據(jù) 處 理 等 裝 置 。 其 中 脫 氣 和 梯 度 洗 脫 裝 置 是 高 壓液 相 色 譜 儀 中 尤 為 重 要 的 附 屬 裝 置 。 脫 氣 的 目 的 ： 是 為 了 防 止 流 動 相 從 高 壓 柱 內(nèi) 流 出 ， 釋放 出 氣 泡 進(jìn) 入 檢 測 器 而 使 噪 聲 劇 增 ， 甚 至 不 能 正 常 檢測 ； 溶 解 在 溶 劑 中 的 氣 體 進(jìn) 入 色 譜 柱 時(shí) ， 可 能 與 流 動相 或 固 定 相 發(fā) 生 化 學(xué) 反 應(yīng) ； 溶 解 氣 體 還 會 引 起 某 樣 品的 氧 化 降 解

31、， 帶 來 誤 差 。 通 常 辦 法 是 把 氣 泡 排 出 。 常 用 方 法 ： 低 壓 脫 氣 ， 電 磁 攪 拌 ， 水 泵 抽 真 空 ， 加 熱 。 以 He脫 氣 ， He在 液 體 中 溶 解 度 最 小 。 超 聲 波 脫 氣 。 在 線 真 空 脫 氣 。 由 于 塑 料 膜 管 線的 膜 可 讓 氣 體 透 過 液體 無 法 透 過 ， 所 以 通過 真 空 泵 脫 氣 降 壓 實(shí) 現(xiàn) 在 線 脫 氣 。 4.3 高 效 液 相 色 譜 的 應(yīng) 用定 性 應(yīng) 用 ： 保 留 時(shí) 間 、 相 對 保 留 值 、 保 留 指 數(shù)定 量 應(yīng) 用 ： 外 標(biāo) 法 、 內(nèi) 標(biāo) 法

32、 、 歸 一 化 法聯(lián) 用 技 術(shù) ： HPLC-MS HPLC-MS-MSHPLC-PDADHPLC-IRHPLC-NMR 離 子 色 譜 法 是 色 譜 法 的 一 個(gè) 分 支 ， 是 一 種 比 較 常 用 的 分 析 技 術(shù) 。 它將 色 譜 的 “ 高 效 ” 分 離 技 術(shù) 和 離 子 的 自 動 檢 測 技 術(shù) 相 結(jié) 合 的 一 種 分析 技 術(shù) 。 通 常 從 離 子 交 換 柱 中 流 出 的 各 種 離 子 可 用 電 導(dǎo) 檢 測 器 直 接檢 測 離 子 含 量 。以 雙 柱 型 離 子 色 譜 儀 測 定 水 中 F -為 例 ： 分 離 柱 ： 低 容 量 陰 離

33、子 交 換 樹 脂 ； 抑 制 柱 ： 強(qiáng) 酸 型 陽 離 子 交 換 樹 脂 ； 淋 洗 液 ： Na2CO3 / NaHCO3或 NaOH離 子 色 譜 法 原 理 試 樣 溶 液 與 強(qiáng) 電 解 質(zhì) 淋 洗 液 一 起 ， 流 經(jīng) 低 容 量 離 子 交 換 柱 ， 待測 離 子 順 次 流 入 抑 制 柱 ， 以 中 和 淋 洗 液 ， 電 導(dǎo) 顯 著 降 低 ， 并 使 陰 離子 轉(zhuǎn) 變 為 強(qiáng) 電 離 的 酸 ， 進(jìn) 入 電 導(dǎo) 檢 測 器 進(jìn) 行 檢 測 。 此 時(shí) ， 待 測 離 子的 濃 度 在 一 定 范 圍 內(nèi) 與 溶 液 的 電 導(dǎo) 率 成 線 性 關(guān) 系 ， 可 以 定 量 分 析 。 離 子 色 譜 計(jì) 算 機(jī)積 分 儀記 錄 儀 貯 液 器樣 品 注 入泵分 離 柱抑 制 柱電 導(dǎo) 池 用 電 導(dǎo) 檢 測 器 分 析 陰 離 子