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1、發(fā) 酵 車 間 消 毒 培 訓(xùn) 一 、 消 毒 與 滅 菌消 毒 與 滅 菌 在 發(fā) 酵 工 業(yè) 中 均 廣 泛 應(yīng) 用 。1、 消 毒 ： 。 是 指 用 物 理 或 化 學(xué) 的 方 法 殺 死物 體 上 的 病 原 微 生 物 ， 一 般 只 能 殺 死 營 養(yǎng)細(xì) 胞 而 不 能 殺 死 細(xì) 菌 芽 孢 。2、 滅 菌 ： 是 指 用 物 理 或 化 學(xué) 的 方 法 殺 滅 或除 掉 傳 播 媒 介 上 的 所 有 微 生 物 （ 包 括 芽孢 ） ， 使 之 達(dá) 到 無 菌 程 度 。 在 生 產(chǎn) 上 習(xí) 慣叫 做 消 毒 但 它 與 消 毒 是 的 嚴(yán) 格 意 義 上 的 區(qū)別 。 二

2、 、 滅 菌 方 法 滅 菌 的 方 法 主 要 有 ： 干 熱 滅 菌 法 、 濕 熱 滅 菌法 、 化 學(xué) 藥 品 滅 菌 法 、 過 濾 除 菌 法 、 過 濾 除 菌 法 。根 據(jù) 滅 菌 的 對 象 和 要 求 選 用 不 同 的 方 法 。1 干 熱 滅 菌 法 干 熱 滅 菌 法 是 指 在 干 燥 高 溫 條 件 下 ， 將 微 生 物殺 死 。 干 熱 對 微 生 物 有 氧 化 、 蛋 白 質(zhì) 變 性 和 電 解質(zhì) 濃 縮 引 起 中 毒 的 作 用 ， 其 中 氧 化 作 用 是 主 要 的 。干 熱 滅 菌 必 須 高 溫 ， 工 業(yè) 生 產(chǎn) 中 采 用 的 條 件 是

3、 攝氏 160 ， 1h。 主 要 使 用 于 需 要 保 持 干 燥 的 器 械 、容 器 的 滅 菌 。 生 產(chǎn) 實(shí) 例 ： 在 接 種 操 作 和 鏡 檢 涂 片時(shí) 用 的 灼 燒 滅 菌 法 就 是 最 簡 單 的 干 熱 滅 菌 法 ， 在投 罐 前 的 空 消 （ 125 、 30min)也 屬 于 干 熱 滅 菌 ， 所 以 在 空 消 之 前 必 須 先 把 PH、 溶 氧 電 極 拔 掉 ， 否 則 會(huì) 大 大削 減 其 使 用 壽 命 。 濕 熱 滅 菌 法 濕 熱 滅 菌 是 借 助 蒸 汽 釋 放 的 熱 能 和 水 的 參 與 ，能 使 微 生 物 細(xì) 胞 中 蛋 白

4、 質(zhì) 、 酶 、 核 酸 分 子 內(nèi) 部 的 化 學(xué)鍵 （ 特 別 是 氫 鍵 ） 受 破 壞 ， 特 別 是 蛋 白 質(zhì) 發(fā) 生 不 可 逆的 凝 固 性 變 性 ， 使 微 生 物 死 亡 。 蒸 汽 在 冷 凝 時(shí) 釋 放 出大 量 潛 熱 ， 具 有 強(qiáng) 大 的 穿 透 力 ， 尤 其 適 用 于 大 量 培 養(yǎng)基 及 發(fā) 酵 設(shè) 備 的 滅 菌 。 溫 熱 滅 菌 與 干 熱 滅 菌 相 比 具 有 以 下 特 點(diǎn) ：(1)濕 熱 滅 菌 時(shí) ， 菌 體 蛋 白 質(zhì) 吸 收 熱 量 容 易 變 性 凝 固 ；(2)濕 熱 的 穿 透 力 比 干 熱 大 （ 如 表 1所 示 ）(3)

5、蒸 汽 冷 凝 時(shí) 放 出 大 量 潛 熱 ， 溫 度 上 升 快 ；(4)蒸 汽 制 取 簡 便 、 成 本 低 、 數(shù) 量 大 ， 適 于 工 業(yè) 生 產(chǎn) 。 加 熱 類 別 溫 度 ( ) 加 熱時(shí) 間 (h) 透 過 布 層 的 溫 度 ( ) 結(jié) 論20層 40層 100層干 熱 130-140 4 85 72 70以 下 不 完 全 滅菌溫 熱 105.3 3 101 101 101 完 全 滅 菌高 溫 滅 菌 也 會(huì) 給 培 養(yǎng) 基 帶 來 一 些 不 利 影 響 ， 所 以 在 生 產(chǎn) 中 就 要 求我 們 在 實(shí) 消 時(shí) 一 定 要 嚴(yán) 格 按 工 藝 要 求 來 控 制

6、實(shí) 消 的 溫 度 和 時(shí) 間 。超 溫 超 時(shí) 對 培 養(yǎng) 基 的 破 壞 主 要 有 兩 種 情 況 ： 一 造 成 培 養(yǎng) 基 成 分 相互 作 用 ； 二 造 成 熱 穩(wěn) 定 性 差 的 原 材 料 嚴(yán) 重 破 壞 。 前 者 在 降 低 培 養(yǎng)基 質(zhì) 量 的 同 時(shí) 還 會(huì) 引 起 培 養(yǎng) 基 褐 變 、 沉 淀 ， 褐 變 反 應(yīng) 包 括 類 黑 色素 褐 變 （ 主 要 是 氨 基 化 合 物 與 羰 基 化 合 物 在 加 熱 條 件 下 生 成 棕 紅色 的 色 素 ） ， 焦 糖 化 褐 變 （ 糖 在 沒 有 含 氨 基 化 合 物 存 在 下 ， 加 熱到 其 熔 點(diǎn)

7、逐 步 形 成 焦 糖 ） ， 糖 類 破 壞 后 易 和 有 機(jī) 氮 源 結(jié) 合 ， 產(chǎn) 生 氨 基 糖 ， 對 微 生 物 產(chǎn) 生 一 定 的 毒 性 ， 嚴(yán) 重 時(shí) 將 抑 制 微 生 物 的 生長 發(fā) 育 破 壞 整 個(gè) 發(fā) 酵 所 以 在 一 、 二 步 種 子 罐 時(shí) ， 一 旦發(fā) 現(xiàn) 料 液 發(fā) 黑 會(huì) 發(fā) 現(xiàn) 其 菌 量 很 少 ， 產(chǎn) 糖 或 產(chǎn) 酸 會(huì) 大 受抑 制 甚 至 造 成 代 謝 停 滯 ， 嚴(yán) 重 時(shí) 不 得 不 倒 罐 。 沉 淀 主要 是 在 加 熱 情 況 下 ， 培 養(yǎng) 基 中 的 鈣 鐵 離 子 等 成 分 易 與磷 酸 鹽 碳 酸 鹽 發(fā) 生 反 應(yīng)

8、 生 成 無 機(jī) 物 沉 淀 和 無 機(jī) 物 如 多肽 類 沉 淀 。 后 者 會(huì) 使 玉 米 漿 和 酵 母 膏 中 的 微 量 元 素 、蛋 白 質(zhì) 及 糖 類 遭 到 破 壞 ， 通 常 解 決 方 案 如 下 ： 分 開滅 菌 。 對 培 養(yǎng) 基 中 糖 類 等 不 耐 高 溫 的 成 份 與 培 養(yǎng) 基 其它 成 分 分 開 滅 菌 ， 冷 卻 后 再 混 合 比 如 我 們 的 二 步 糖 采取 流 加 而 不 是 放 在 一 起 實(shí) 消 ； 將 培 養(yǎng) 基 中 的 鈣 鐵 等 離子 成 分 與 磷 酸 鹽 分 別 滅 菌 可 以 避 免 發(fā) 生 沉 淀 反 應(yīng) 低溫 滅 菌 ，

9、低 溫 滅 菌 幾 乎 對 培 養(yǎng) 基 中 的 營 養(yǎng) 成 分 沒 有 破壞 。 如 我 們 一 步 的 糖 。 培 養(yǎng) 基 在 達(dá) 到 完 全 滅 菌 時(shí) ， 滅菌 溫 度 和 滅 菌 時(shí) 間 對 維 生 素 C培 養(yǎng) 基 養(yǎng) 分 破 壞 的 比 較 ： 滅 菌 溫度 (%) 110 110 115 120 130 145 150滅 菌 時(shí)間 (min) 400 36 15 4 0.5 0.08 0.01營 養(yǎng) 成分 破 壞率 (%) 99.3 67 50 27 8 2 1 3 化 學(xué) 藥 品 滅 菌 法 一 些 化 學(xué) 藥 品 易 與 微 生 物 細(xì) 胞 中 的 某 種 成 分 產(chǎn) 生 化

10、 學(xué) 反 應(yīng) ， 如使 蛋 白 質(zhì) 變 性 、 酶 類 失 活 ， 破 壞 細(xì) 胞 膜 透 性 而 殺 死 微 生 物 。 根 據(jù)滅 菌 對 象 不 同 有 浸 泡 、 添 加 、 擦 拭 、 噴 灑 、 氣 態(tài) 熏 蒸 等 。 如 我 們車 間 環(huán) 境 消 毒 用 的 濃 度 為 1%-0.25%的 高 錳 酸 鉀 溶 液 或 0.25%的 漂白 粉 ， 發(fā) 酵 罐 發(fā) 酵 至 終 點(diǎn) 前 加 入 0.25%的 新 潔 爾 滅 和 染 菌 后 加 入0.15%-0.17%的 甲 醛 熏 蒸 、 加 入 5%的 氫 氧 化 鈉 浸 泡 ， 進(jìn) 入 無 菌 室操 作 前 人 雙 手 用 75 %

11、的 酒 精 消 毒 。三 投 罐 前 的 幾 點(diǎn) 注 意 事 項(xiàng) 發(fā) 酵 是 否 成 功 ， 很 大 程 度 上 決 定 于 準(zhǔn) 備 工 作 ， 以 下 幾 點(diǎn) 須 注 意 ：1、 清 洗 發(fā) 酵 罐 ， 特 別 要 注 意 死 角 的 洗 刷 和 與 外 界 接 觸 的 零 部 位 的清 洗 ， 清 除 罐 底 上 批 料 的 堆 積 物 。2、 檢 查 取 樣 閥 的 密 閉 性 有 無 關(guān) 不 嚴(yán) 或 滑 絲 現(xiàn) 象 ， 罐 體 、 法 蘭 、 軸封 、 移 種 閥 、 移 糖 閥 、 視 鏡 等 有 無 滲 漏 、 穿 孔 、 堵 塞 、 死 角 等 情 況 ， 并 用 肥 皂 水 或

12、 洗 衣 粉 水 嚴(yán) 格 試 漏 。 隔 膜 閥 更 是 要 定 期 拆檢 。 3、 有 機(jī) 械 攪 拌 裝 置 的 發(fā) 酵 罐 一 定 要 擦 干 軸 封 支 承 內(nèi) 的 積 水 ， 氣 升式 發(fā) 酵 罐 的 罐 頂 部 和 視 鏡 處 要 經(jīng) 常 保 持 干 燥 清 潔 。4、 檢 查 沖 視 鏡 管 是 否 暢 通 ， 沖 視 鏡 閥 是 否 內(nèi) 漏 ， 發(fā) 現(xiàn) 問 題 要 徹 底處 理 。5、 檢 查 罐 上 的 儀 表 指 針 的 靈 敏 度 ， 是 否 歸 零 顯 示 有 無 偏 差 。6、 檢 查 與 罐 上 相 連 接 的 螺 絲 是 否 有 脫 絲 現(xiàn) 象 ， 破 舊 的 及

13、 時(shí) 換 新四 消 毒 過 程 中 的 注 意 事 項(xiàng) 1、 首 先 要 結(jié) 合 配 料 工 共 同 確 認(rèn) 本 批 罐 所 用 的 原 料 為 合 格 品 ， 發(fā) 現(xiàn)有 結(jié) 塊 、 變 質(zhì) 的 原 料 拒 絕 使 用 。 2、 在 用 泵 向 罐 中 打 配 制 好 的 培 養(yǎng) 基 時(shí) 要 注 意 保 持 稍 開 些進(jìn) 氣 ， 讓 料 翻 騰 ， 以 防 （ 前 期 ） 培 養(yǎng) 基 濃 度 過 大 沉 淀 粘附 在 罐 底 。3、 打 完 料 后 首 先 調(diào) 至 適 宜 的 PH， 再 確 認(rèn) 一 下 所 有 的 培 養(yǎng)基 都 已 加 入 后 封 住 罐 口 ， 開 始 從 進(jìn) 氣 口 、

14、放 料 口 、 取 樣口 等 分 路 進(jìn) 入 蒸 汽 。 各 路 保 持 均 衡 進(jìn) 汽 ， 防 止 短 路 和 堵 塞 ， 排 氣 要 暢 通 ， 排 汽 量 不 宜 過 大 ， 以 節(jié) 約蒸 汽 。4、 在 實(shí) 消 過 程 中 要 保 持 壓 力 的 穩(wěn) 定 ， 不 宜 突 然 卸 壓 升 壓以 防 造 成 大 量 泡 沫 冒 頂 或 逃 料 。5、 在 實(shí) 消 控 制 時(shí) 原 則 上 以 溫 度 為 準(zhǔn) ， 壓 力 為 輔 。但 是 在 保 壓 時(shí) 可 能 出 現(xiàn) 壓 力 表 與 溫 度 計(jì) 不 對 應(yīng) 的情 況 ， 在 不 能 確 定 到 底 是 溫 度 計(jì) 還 是 壓 力 表 失靈

15、時(shí) ， 當(dāng) 壓 力 表 顯 示 壓 力 大 于 等 于 0.1Mpa,而 溫 度 不 到 121 時(shí) ， 以 溫 度 計(jì) 為 準(zhǔn) ； 反 之 ， 則 以 壓 力 表 為 準(zhǔn) ，總 之 要 確 保 壓 力 與 溫 度 都 達(dá) 到 滅 菌 要 求 。6、 如 遇 蒸 汽 壓 力 突 然 升 高 ， 罐 溫 超 過 規(guī) 定 ， 可 適 當(dāng) 縮 短滅 菌 時(shí) 間 ； 如 遇 蒸 汽 壓 力 突 然 下 跌 ， 一 時(shí) 上 不 來 ，溫 度 下 降 到 規(guī) 定 范 圍 以 下 ， 可 適 當(dāng) 延 長 滅 菌 時(shí) 間 ，以 確 保 滅 菌 徹 底 。 嚴(yán) 防 高 溫 高 壓 悶 罐 ， 否 則 容 易造

16、成 培 養(yǎng) 基 成 分 破 壞 和 PH值 升 高 。7、 在 實(shí) 消 結(jié) 束 降 溫 時(shí) 在 確 定 空 氣 過 濾 器 的 壓 力 大 于 罐 壓時(shí) ， 可 以 先 打 開 空 氣 進(jìn) 氣 閥 ， 再 開 冷 卻 水 閥 以 防 外 界 空氣 倒 吸 進(jìn) 去 。8、 在 降 溫 過 程 中 嚴(yán) 防 大 開 排 氣 閥 使 罐 壓 幾 乎 跌 零 ， 特 別是 種 子 罐 裝 料 系 數(shù) 較 大 ， 這 樣 做 會(huì) 使 料 液 翻 騰 劇 烈 產(chǎn) 生大 量 的 泡 沫 ， 易 出 現(xiàn) 冒 頂 或 逃 料 。9、 在 消 移 種 管 道 時(shí) 要 確 保 整 個(gè) 管 道 打 氣 暢 通 ， 嚴(yán)

17、防 堵 塞 或 排 氣 不 暢 。 在 消 好 后 ， 通 入 無 菌 空 氣 （ 即 給 管 道 降 溫 又能 使 管 道 內(nèi) 保 持 正 壓 ） 。10、 移 種 結(jié) 束 后 要 把 發(fā) 酵 罐 調(diào) 至 正 常 培 養(yǎng) 狀 態(tài) 并 交 給 看 罐 工 ， 打 掃完 現(xiàn) 場 衛(wèi) 生 后 方 可 離 開 。五 、 染 菌 原 因 分 析 發(fā) 酵 工 業(yè) 自 從 采 用 純 種 培 養(yǎng) 以 后 ， 產(chǎn) 率 有 了 很 大 提 高 ， 然 而 防止 染 菌 的 要 求 也 更 高 了 。 染 菌 是 發(fā) 酵 工 業(yè) 的 致 命 傷 ， 輕 者 影響 產(chǎn) 率 、 提 取 收 率 、 產(chǎn) 品 質(zhì) 量

18、和 三 肇 廢 治 理 ， 嚴(yán) 重 者 造成 倒 罐 ， 浪 費(fèi) 大 量 原 材 料 ， 造 成 嚴(yán) 重 經(jīng) 濟(jì) 損 失 ， 而 且 擾亂 生 產(chǎn) 秩 序 ， 破 壞 生 產(chǎn) 計(jì) 劃 。在 發(fā) 酵 染 菌 之 后 ， 必 須 分 析 染 菌 原 因 ， 總 結(jié) 發(fā) 酵 染 菌 的 經(jīng)驗(yàn) 教 訓(xùn) ， 把 發(fā) 酵 染 菌 消 滅 在 發(fā) 生 之 前 ， 防 患 于 未 然 ， 是積 極 制 服 發(fā) 酵 染 菌 的 最 重 要 措 施 。（ 一 ） 不 同 染 菌 時(shí) 間 對 發(fā) 酵 的 影 響1、 種 子 培 養(yǎng) 期 染 菌 種 子 培 養(yǎng) 主 要 是 生 長 繁 殖 菌 體 ， 菌 體 濃 度

19、低 ，培 養(yǎng) 基 營 養(yǎng) 豐 富 ， 比 較 容 易 染 菌 ， 帶 進(jìn) 發(fā) 酵 罐 中危 害 極 大 ， 應(yīng) 嚴(yán) 格 控 制 種 子 污 染 。 當(dāng) 發(fā) 現(xiàn) 種 子 染菌 均 應(yīng) 滅 菌 后 倒 入 地 溝 ， 并 對 種 子 罐 、 管 道 進(jìn) 行檢 查 和 徹 底 滅 菌 。2、 發(fā) 酵 前 期 染 菌 發(fā) 酵 前 期 主 要 是 菌 體 生 長 繁 殖 ， 代 謝 產(chǎn) 物 較 少 ， 這 個(gè)時(shí) 期 容 易 染 菌 ， 一 旦 污 染 雜 菌 會(huì) 迅 速 繁 殖 ， 與 生 產(chǎn) 菌 爭奪 營 養(yǎng) 成 分 和 氧 分 ， 嚴(yán) 重 干 擾 生 產(chǎn) 菌 的 生 長 繁 殖 和 產(chǎn) 物的 生 成

20、 ， 要 特 別 防 止 發(fā) 酵 前 期 染 菌 。 緊 急 處 理 措 施 ：如 果 污 染 危 害 較 大 的 雜 菌 不 能 繼 續(xù) 運(yùn) 轉(zhuǎn) ， 必 須 重新 滅 菌 。 重 滅 前 可 適 當(dāng) 放 出 部 分 發(fā) 酵 液 ， 并 補(bǔ) 入適 量 的 培 養(yǎng) 基 特 別 是 氮 源 使 消 后 的 培 養(yǎng) 基 符 合 發(fā)酵 要 求 ， 低 滅 后 調(diào) 節(jié) 好 PH后 重 新 移 種 或 倒 種 。 如 果 污 染 的 雜 菌 無 大 的 影 響 ， 可 以 繼 續(xù) 運(yùn) 轉(zhuǎn) ， 但 要 密 切 注意 發(fā) 酵 過 程 的 代 謝 情 況 和 雜 菌 的 變 化 ， 必 要 時(shí) 可 適 當(dāng) 降低

21、 罐 溫 、 空 氣 流 量 、 和 控 制 補(bǔ) 料 量 進(jìn) 行 發(fā) 酵 。3、 發(fā) 酵 中 期 染 菌發(fā) 酵 中 期 染 菌 將 嚴(yán) 重 干 擾 生 產(chǎn) 菌 的 代 謝 ， 影 響 產(chǎn) 物 的 生 成 。有 些 雜 菌 繁 殖 后 產(chǎn) 生 酸 性 或 堿 性 物 質(zhì) ， 使 PH值 異常 變 化 加 堿 突 增 或 驟 減 ， 糖 、 氮 消 耗 迅 速 ， 菌 體自 溶 ， 發(fā) 酵 液 發(fā) 粘 或 渾 濁 ， 產(chǎn) 生 大 量 泡 沫 ， 代 謝產(chǎn) 物 的 積 累 迅 速 減 少 或 停 止 或 下 降 ， 有 的 發(fā) 酵 液發(fā) 臭 。 發(fā) 酵 中 期 染 菌 ， 由 于 營 養(yǎng) 成 分 大

22、 量 消 耗 ，一 般 挽 救 處 理 困 難 ， 危 害 性 很 大 常 用 的 方 法 有 ：降 低 罐 溫 ， 控 制 殘 糖 量 ， 降 低 空 氣 流 量 或 冷 置 待放 。 對 于 這 種 罐 批 在 核 算 提 取 成 本 和 一 定 濾 速（ 一 般 不 低 于 5ml/5min)時(shí) 放 罐 ， 否 則 難 以 過 濾 ， 增 大提 取 工 作 量 甚 至 無 法 過 濾 而 放 棄 。 如 果 中 期 染 的 某 些 雜 菌 不 太 嚴(yán) 重 情 況 ， 可 以 采 取 補(bǔ) 加 抑 菌 劑 的 辦 法控 制 雜 菌 的 生 長 繁 殖 ， 如 二 步 發(fā) 酵 染 酵 母 菌

23、可 加4-5.6kg的 硫 酸 銅 抑 止 酵 母 生 長 ， 革 蘭 氏 陽 性 菌對 青 霉 素 和 磺 胺 類 抗 生 素 敏 感 而 陰 性 菌 則 不 敏 感 ，革 蘭 氏 陰 性 菌 對 鏈 霉 素 、 氯 霉 素 和 四 環(huán) 素 等 敏 感而 陽 性 菌 則 不 敏 感 。 霉 菌 發(fā) 酵 中 染 細(xì) 菌 可 加 入 適量 的 青 霉 素 來 殺 滅 細(xì) 菌 。4、 發(fā) 酵 后 期 染 菌 發(fā) 酵 后 期 產(chǎn) 物 積 累 較 多 ， 糖 等 營 養(yǎng) 物 質(zhì) 接 近 耗 盡 ， 如 果染 菌 不 太 多 ， 可 繼 續(xù) 進(jìn) 行 發(fā) 酵 ； 如 污 染 嚴(yán) 重 ， 破 壞 性較 大

24、， 可 以 采 取 提 前 放 罐 。 （ 二 ） 不 同 染 菌 規(guī) 模 的 原 因 分 析1、 當(dāng) 發(fā) 酵 出 現(xiàn) 連 續(xù) 染 菌 或 大 面 積 染 菌 ， 一 般 是 公 用 系 統(tǒng) 有問 題 ， 特 別 是 空 氣 系 統(tǒng) 。 總 空 過 濾 器 失 效 可 效 率 下降 ， 新 裝 的 空 過 要 避 免 因 為 介 質(zhì) 移 位 或 翻 動(dòng) 而 造成 空 氣 走 短 路 。 接 種 和 中 間 補(bǔ) 糖 設(shè) 備 系 統(tǒng) 有 滲 漏 和 死 角 ， 也 會(huì)造 成 大 面 積 染 菌 因 此 要 按 時(shí) 檢 查 維 修 相 關(guān) 設(shè) 備 。2、 部 分 發(fā) 酵 罐 染 菌 ， 發(fā) 生 在

25、前 期 可 能 是 滅 菌 不 徹 底 或 種 子罐 帶 菌 所 致 ， 同 時(shí) 也 與 公 用 接 種 設(shè) 備 系 統(tǒng) 有 關(guān) ； 染 菌 發(fā)生 在 中 后 期 ， 一 般 與 補(bǔ) 料 、 加 堿 有 關(guān) 。 3、 個(gè) 別 罐 連 續(xù) 染 菌 時(shí) 要 檢 查 該 罐 設(shè) 備 的 各 個(gè) 部 件 ， 查 找有 無 滲 漏 和 死 角 ， 如 降 溫 盤 管 穿 孔 是 造 成 染 菌 的 多 見 原因 之 一 。 個(gè) 別 罐 批 偶 爾 染 菌 ， 原 因 比 較 復(fù) 雜 ， 要 針 對 具體 情 況 ， 視 染 菌 時(shí) 間 和 染 菌 類 型 ， 從 操 作 到 設(shè) 備 作 具 體分 析 。

26、 （ 三 ） 從 染 菌 類 別 上 分 析 原 因1、 染 革 蘭 氏 陽 性 桿 菌 、 酵 母 菌 等 其 它 雜 菌 多 是 由 空 氣 系 統(tǒng)中 帶 入 而 造 成 污 染 也 有 可 能 是 種 子 帶 菌2、 染 革 蘭 氏 陰 性 桿 菌 、 特 別 是 球 菌 大 多 數(shù) 因 設(shè) 備 滲 漏 所 致 ，帶 菌 的 冷 卻 水 或 污 水 ， 從 冷 卻 盤 管 、 連 接 法 蘭 、 襯 里 焊縫 中 滲 漏 進(jìn) 入 發(fā) 酵 罐 培 養(yǎng) 基 中 。3、 染 耐 熱 的 芽 孢 桿 菌 ， 可 能 是 培 養(yǎng) 基 或 設(shè) 備 滅 菌 不 徹 底 但并 不 是 絕 對 的 ， 空

27、 氣 帶 菌 也 常 引 起 染 芽 孢 桿 菌 ；4、 染 霉 菌 ， 一 般 是 無 菌 室 滅 菌 不 徹 底 或 操 作 問 題六 、 染 菌 的 途 徑 和 防 治（ 一 ） 種 子 帶 菌 及 其 防 治種 子 帶 菌 的 原 因 ：1、 培 養(yǎng) 基 及 用 具 滅 菌 不 徹 底菌 種 培 養(yǎng) 基 及 用 具 滅 菌 均 在 滅 菌 鍋 中 進(jìn) 行 ， 造 成 滅 菌 不 徹底 主 要 是 滅 菌 時(shí) 鍋 內(nèi) 空 氣 排 放 不 完 全 ， 造 成 假 壓 ， 使 滅 菌 時(shí) 溫 度 還 達(dá) 不 到 要 求 。 2、 菌 種 在 移 種 過 程 中 受 污 染菌 種 的 移 接

28、工 作 是 在 無 菌 室 中 ， 按 無 菌 操 作 進(jìn) 行 的 。 當(dāng) 菌種 移 接 操 作 不 當(dāng) 或 管 理 不 嚴(yán) ， 就 可 能 引 起 污 染 。3、 菌 種 在 培 養(yǎng) 過 程 或 保 藏 過 程 中 受 污 染菌 種 在 培 養(yǎng) 過 程 和 保 藏 過 程 中 ， 由 于 外 界 空 氣 進(jìn) 入 ，也 使 雜 菌 進(jìn) 入 而 受 污 染 。 為 了 防 止 污 染 ， 試 管 的棉 花 塞 應(yīng) 有 一 定 的 緊 密 度 ， 不 宜 太 松 ， 且 有 一 定的 長 度 ， 培 養(yǎng) 和 保 藏 溫 度 不 宜 變 化 太 大 。 在 放 入搖 床 后 要 經(jīng) 常 去 檢 查

29、種 母 搖 瓶 的 狀 況 。（ 二 ） 無 菌 空 氣 帶 菌 及 防 止空 氣 凈 化 系 統(tǒng) 失 效 或 空 氣 精 過 、 預(yù) 過 減 效 是 發(fā) 酵 染菌 的 主 要 原 因 之 一 。 具 體 防 止 措 施 ： 定 期 更 新 主空 氣 系 統(tǒng) 的 過 濾 介 質(zhì) ， 加 強(qiáng) 平 時(shí) 系 統(tǒng) 的 排 污 除 水 特 別 是 在 多 雨 或 潮 濕 的 天 氣 。 確 保 進(jìn) 入 車 間 之 前 的空 氣 升 溫 至 35-45 ， 使 相 對 濕 度 下 降 ， 定 時(shí) 拆檢 空 氣 精 過 、 預(yù) 過 。（ 三 ） 培 養(yǎng) 基 和 設(shè) 備 滅 菌 不 徹 底 帶 菌 及 防 止

30、培 養(yǎng) 基 和 設(shè) 備 滅 菌 不 徹 底 的 原 因 ， 主 要 與 以 下 幾 個(gè)方 面 有 關(guān)1、 原 料 形 狀 一 般 稀 薄 的 培 養(yǎng) 基 容 易 滅 菌 徹 底 ， 而 含 有 固 體 顆粒 或 粘 稠 狀 物 料 時(shí) 容 易 由 于 滅 菌 不 徹 底 而 造 成 染菌 。 這 就 要 求 在 投 料 時(shí) 確 保 攪 拌 混 合 均 勻 。2、 實(shí) 消 時(shí) 未 充 分 扣 除 罐 內(nèi) 空 氣實(shí) 消 時(shí) 罐 內(nèi) 空 氣 未 完 全 排 除 造 成 假 壓 ， 使 罐 頂 空 間局 部 溫 度 達(dá) 不 到 滅 菌 要 求 ， 導(dǎo) 致 滅 菌 不 徹 底 而 污染 。 因 此 在

31、實(shí) 消 升 溫 時(shí) ， 應(yīng) 打 開 排 氣 閥 門 及 有 關(guān) 連 接 管 的 邊 閥 、 罐 頂 部 的 接 管 邊 閥 ， 使 蒸 汽 通 過 達(dá)到 徹 底 滅 菌 。3、 設(shè) 備 管 道 存 在 死 角 染 菌 及 防 止由 于 操 作 、 設(shè) 備 結(jié) 構(gòu) 、 安 裝 或 人 為 造 成 的 屏 障 等 原因 ， 引 起 蒸 汽 不 能 到 達(dá) 預(yù) 定 部 位 ， 這 就 是 死 角 。所 以 發(fā) 酵 罐 要 合 理 簡 化 安 裝 管 、 閥 。 凡 不 合 理 的管 、 閥 、 開 孔 都 要 堅(jiān) 決 去 掉 ， 遺 留 的 孔 眼 要 焊 平 ，消 除 隱 患 。 管 道 之 間

32、盡 可 能 用 焊 接 來 代 替 法 蘭 ，不 能 用 直 角 彎 頭 ， 要 保 持 管 道 暢 通 、 光 滑 、 密 封 。主 要 閥 門 及 其 墊 應(yīng) 經(jīng) 常 檢 查 更 換 。4、 設(shè) 備 滲 漏 引 起 染 菌 及 防 止發(fā) 酵 設(shè) 備 、 管 道 、 閥 門 的 長 期 使 用 ， 由 于 腐 蝕 、 摩擦 、 振 動(dòng) 或 憋 壓 等 原 因 ， 往 往 會(huì) 造 成 滲 漏 。 例 如 ： 設(shè) 備 的 表 面 或 焊 縫 處 有 砂 眼 ， 由 于 腐 蝕 逐 漸 加 深 ，最 終 導(dǎo) 致 穿 孔 ； 冷 卻 管 受 攪 拌 器 作 用 ， 長 期 磨 損 ，焊 縫 處 受

33、冷 熱 和 振 動(dòng) 產(chǎn) 生 裂 縫 而 滲 漏 。 防 止 措 施 ：要 選 用 優(yōu) 質(zhì) 材 料 并 經(jīng) 常 檢 查 ， 小 滲 漏 不 易 發(fā) 現(xiàn) 時(shí) 可壓 入 堿 性 水 ， 在 可 疑 的 地 方 用 浸 濕 的 酚 酞 指 示 劑 的白 布 擦 ， 如 有 滲 漏 時(shí) 白 布 顯 紅 色 。5、 操 作 問 題在 發(fā) 酵 過 程 中 如 操 作 不 當(dāng) 也 引 起 染 菌 ， 如 移 種 時(shí) 或發(fā) 酵 培 養(yǎng) 時(shí) 罐 內(nèi) 壓 力 跌 零 ， 使 外 界 空 氣 進(jìn) 入 而 染 菌 ；泡 沫 冒 頂 而 造 成 染 菌 ； 壓 縮 空 氣 壓 力 突 然 下 降 使 發(fā)酵 液 倒 流 入

34、 空 氣 過 濾 器 而 造 成 染 菌 等 等 ； 防 止 措 施 ：加 強(qiáng) 對 一 線 操 作 人 員 的 無 菌 操 作 培 訓(xùn) 和 始 終 貫 徹 無菌 操 作 制 度 及 責(zé) 任 心 教 育 ， 加 強(qiáng) 管 理 措 施 。 （ 四 ） 、 環(huán) 境 衛(wèi) 生發(fā) 酵 車 間 和 菌 種 室 的 內(nèi) 外 環(huán) 境 ， 必 須 保 持 干 凈 整 潔 ， 定 期清 掃 和 消 毒 ， 車 間 周 圍 不 得 堆 放 廢 棄 物 ， 不 允 許 有 活 菌排 放 ， 有 異 味 或 易 飛 揚(yáng) 的 物 料 的 貯 存 ， 應(yīng) 遠(yuǎn) 離 發(fā) 酵 車 間和 菌 種 室 。七 、 染 菌 的 檢 查（ 一

35、 ） 感 官 檢 查1、 大 部 分 染 菌 的 發(fā) 酵 液 可 以 從 發(fā) 酵 的 異 常 情 況 來 檢 出 ， 如色 澤 、 異 味 、 變 稠 或 變 稀 、 加 堿 速 率 、 菌 絲 變 形 產(chǎn) 酸 不正 常 或 不 產(chǎn) 酸 或 倒 酸 而 糖 卻 消 耗 很 快 。2、 借 助 顯 微 鏡 ， 常 用 梅 蘭 染 色 、 結(jié) 晶 紫 染 色 和 革 蘭 氏 染 色來 判 斷 。（ 二 ） 、 無 菌 平 皿 劃 線 檢 查平 板 檢 查 法 既 可 檢 查 出 雜 菌 污 染 ， 又 可 以 檢 查 出 有 無 噬 菌體 污 染 。 檢 查 雜 菌 時(shí) ， 先 將 滅 菌 后 的

36、 培 養(yǎng) 基 倒 入 已 經(jīng) 滅 菌 的 培 養(yǎng) 皿 內(nèi) ， 冷 卻 后 置 于 37 恒 溫 箱 內(nèi) 培 養(yǎng) 24小 時(shí) ， 進(jìn) 行 鏡 檢 。 或 者 將 待 檢 樣 品 置 于 37 培 養(yǎng)6小 時(shí) ， 使 細(xì) 菌 生 長 ， 增 加 數(shù) 量 ， 然 后 再 劃 線 接種 培 養(yǎng) 。 這 樣 可 以 提 高 平 板 法 的 靈 敏 度 。（ 三 ） 肉 湯 培 養(yǎng) 檢 查 法主 要 用 于 空 氣 系 統(tǒng) 和 培 養(yǎng) 基 染 菌 的 檢 查 。 具 體 的 做法 是 將 培 養(yǎng) 液 裝 在 吸 所 瓶 中 ， 滅 菌 30分 鐘 后 ， 置于 37 培 養(yǎng) 24小 時(shí) ， 如 無 混 濁 即 可 用 于 上 述 兩項(xiàng) 的 檢 查 。 將 無 菌 空 氣 或 滅 菌 后 的 培 養(yǎng) 基 引 入 后保 溫 培 養(yǎng) ， 觀 察 有 無 混 濁 現(xiàn) 象 發(fā) 生 ， 如 呈 現(xiàn) 渾 濁說 明 染 菌八 、 染 菌 的 后 續(xù) 處 理染 菌 查 找 到 原 因 后 ， 對 罐 徹 底 清 洗 干 凈 ， 加 入 甲 醛 空 消