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專題二十三 微生物的利用與酶的應(yīng)用,,內(nèi)容索引,考點(diǎn)一 微生物的利用,考點(diǎn)二 酶的應(yīng)用,,探高考 練模擬,,,考點(diǎn)一 微生物的利用,,答案,一、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 1.大腸桿菌 (1)特性：大腸桿菌是革蘭氏 性、 (代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對(duì)人無害，但若進(jìn)入人的 系統(tǒng)，就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。 (2)用途：是 技術(shù)中被廣泛采用的工具。 2.細(xì)菌的培養(yǎng)和分離 (1)細(xì)菌的繁殖：以 方式繁殖，分裂速度很快，約20 min分裂一次。 (2)培養(yǎng)的方法：需要將已有細(xì)菌的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，一般用 (工具)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。,兼性厭氧,泌尿,基因工程,分裂,接種環(huán),陰,,答案,(3)細(xì)菌分離的方法與特點(diǎn),劃線分離,涂布分離,單菌落,3.消毒和滅菌的區(qū)別,,答案,物體表面,煮沸,高壓蒸汽,化學(xué),4.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn) (1)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：將大腸桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)和劃線分離，即用 培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)后再在 培養(yǎng)基上劃線進(jìn)行分離，隨后培養(yǎng)基上就會(huì)形成一個(gè)個(gè)單獨(dú)的菌落。,,答案,LB固體平面,LB液體,,答案,(2)實(shí)驗(yàn)步驟,倒平板,接種,高壓,蒸汽,三角瓶,連續(xù)劃線,單個(gè)菌落,(3)大腸桿菌分離的用途：?jiǎn)尉涞姆蛛x是 的通用方法，也是用于篩選 菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。 二、分離以尿素為氮源的微生物 1.菌種特點(diǎn) 含有 酶，可以通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。 2.培養(yǎng)基 用以 為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)，以 培養(yǎng)基為對(duì)照。 3.實(shí)驗(yàn)原理 (1)篩選以尿素為氮源的微生物，可使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)選擇。 (2)細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成 ，致使pH升高，使酚紅指示劑 。,,答案,消除污染雜菌,高表達(dá)量,脲,LB全營(yíng)養(yǎng),NH3,變紅,尿素,4.實(shí)驗(yàn)步驟 制備培養(yǎng)基：將已滅菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中，搖勻，平放至凝固 ↓ 制備細(xì)菌懸液：用1 g土樣配制不同濃度的細(xì)菌懸液 ↓ 用 分離細(xì)菌：將不同濃度的土壤稀釋液分別加入到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，并用玻璃刮刀涂布到整個(gè)平面上 ↓ 培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48 h ↓ 觀察：培養(yǎng)基中菌落數(shù)量,,答案,涂布分離法,5.反應(yīng)的鑒定 在配制培養(yǎng)基時(shí)，加入指示劑酚紅，培養(yǎng)時(shí)細(xì)菌將尿素分解產(chǎn)生堿性的氨，使培養(yǎng)基上菌落周圍出現(xiàn) 。,,答案,紅色的環(huán)帶,1.從有機(jī)廢水中分離分解有機(jī)物的微生物時(shí)，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) ( ) 提示 異養(yǎng)微生物不需要光照。 2.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害、 ( ),,答案,思考診斷,提示,,√,3.下圖中甲為劃線分離法中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果：,,答案,提示,(1)每一次劃線后都要將接種環(huán)灼燒 ( ) (2)除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是第一次劃線的末端 ( ) 提示 平板劃線時(shí)除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的末端，而不是第一次。,√,,,答案,提示,4.篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源 ( ) 5.分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低 ( ) 提示 應(yīng)為升高。,√,,1.培養(yǎng)基的配制及劃線分離操作的注意事項(xiàng) (1)配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項(xiàng) ①倒平板的適宜溫度是60 ℃左右，溫度過高會(huì)燙手，過低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。 ②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 (2)劃線分離操作的注意事項(xiàng) ①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)。,②灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ③劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 ④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。,2.幾種消毒和滅菌方法及其適用范圍,3.接種微生物的兩種常用方法比較,4.分離以尿素為氮源的微生物的注意事項(xiàng) (1)培養(yǎng)基中的酸堿指示劑產(chǎn)生顏色變化(變紅)，標(biāo)志著存在脲酶分解尿素的作用，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。 (2)本實(shí)驗(yàn)中配制固體培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)選用瓊脂糖而不能選用瓊脂作凝固劑。這是由于瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物。如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會(huì)為細(xì)菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會(huì)在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細(xì)菌，不利于以尿素為氮源的細(xì)菌的篩選。,(3)由于尿素在高溫下會(huì)分解，所以對(duì)尿素溶液的滅菌要采用G6玻璃漏斗過濾的方法。并且應(yīng)在基本培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，冷卻至60 ℃時(shí)再加入。 (4)土樣應(yīng)從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取得，這是由于動(dòng)物排泄物中有一定量的尿素，在這些土壤中一般含有較多的分解尿素的細(xì)菌。,題型一 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離,1,2,3,4,1.下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請(qǐng)回答下列問題,A.配制培養(yǎng)基,B.滅菌,C.擴(kuò)大培養(yǎng)(液體培養(yǎng)基,D.劃線分離和培養(yǎng)和培養(yǎng)(固體培養(yǎng)基),E.菌種保存,,,,,,,,,,解析 LB液體培養(yǎng)基是通用的細(xì)菌培養(yǎng)基，LB固體平面培養(yǎng)基則用于劃線分離形成單菌落。氯化鈉的作用是維持培養(yǎng)基的滲透壓。調(diào)節(jié)好酸堿度后才能進(jìn)行滅菌，若滅菌后再進(jìn)行酸堿度調(diào)節(jié)，又會(huì)產(chǎn)生新的污染。,1,2,3,4,(1)A過程配制的是通用細(xì)菌培養(yǎng)基，稱為________培養(yǎng)基。配制時(shí)除了加入特定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以外，還要加入一定量的氯化鈉，以維持_______。對(duì)培養(yǎng)基酸堿度的調(diào)節(jié)，應(yīng)該在B過程的______(填“前面”或“后面”)。,前面,LB液體,滲透壓,(2)D過程與C過程相比，培養(yǎng)基中增加的物質(zhì)是______，E過程所需的溫度是______。,解析 在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入一定量的瓊脂可形成固體培養(yǎng)基。菌種應(yīng)置于4 C冰箱中保存。,4 ℃,瓊脂,,解析答案,1,2,3,4,(3)D過程后，一個(gè)菌體便會(huì)形成一個(gè)_________，這種分離方法是_________________________的通用方法，也是篩選特定菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。,解析 通過劃線分離后，一個(gè)菌體就會(huì)繁殖出一個(gè)菌落。,消除污染雜菌(或純化菌種),(單)菌落,(4)植物組織培養(yǎng)時(shí)，先配制MS培養(yǎng)基，再加入一定比例的植物激素，當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較多時(shí)，可促進(jìn)_______。,解析 植物組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)素相對(duì)較多時(shí)，有利于生根，而細(xì)胞分裂素相對(duì)較多時(shí)，則有利于生芽。,生根,,解析答案,1,2,3,4,(5)植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是( ) A.接種環(huán)和鑷子 B.三角瓶和廣口瓶 C.發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基 D.用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽,解析 高壓蒸汽滅菌常用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)器材等的滅菌，而用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽則不能進(jìn)行任何滅菌操作，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。,√,,解析,2.檢驗(yàn)飲用水的細(xì)菌含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請(qǐng)回答下列與檢驗(yàn)飲用水有關(guān)的問題： (1)要測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)量，常采用________法，通常將水樣進(jìn)行一系列的梯度______，然后將上述的水樣用玻璃刮刀分別涂布到______________的表面進(jìn)行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)_____(填“是”或“否”)需要對(duì)照組。原因是：__________________________________________________________。,1,2,3,4,需要判斷培養(yǎng)基使用之前是否被雜菌污染(培養(yǎng)基滅菌是否合格),涂布分離,稀釋,LB固體培養(yǎng)基,是,,答案,(2)下面所示的四種菌落分布圖中，不可能由上述方法得到的是_______。,1,2,3,4,,(3)大腸桿菌的培養(yǎng)條件是無菌，培養(yǎng)基配制時(shí)需加入氯化鈉，以維持_________。配制培養(yǎng)基時(shí)先________后________。 A.調(diào)節(jié)pH B. 滅菌 C.消毒 D.調(diào)節(jié)溫度,滲透壓,√,√,√,答案,,3.請(qǐng)回答微生物培養(yǎng)和分離的有關(guān)問題： (1)欲從土壤中分離出能利用尿素的細(xì)菌：以_____為唯一氮源且加入了_____指示劑的培養(yǎng)基，用_________________法分離細(xì)菌。若培養(yǎng)基平板上有菌落存活且顏色變____，則說明分離成功。,1,2,3,4,題型二 分離以尿素為氮源的微生物,解析 分離能利用尿素的細(xì)菌，只需以尿素為唯一氮源，加酚紅作指示劑，采用涂布分離法分離細(xì)菌，只要培養(yǎng)基中的指示劑變紅，標(biāo)志著存在脲酶水解尿素的反應(yīng)，證明菌株可以以尿素為氮源。,涂布分離(或涂布),尿素,酚紅,紅,解析答案,(2)分離以尿素為氮源的細(xì)菌和分離大腸桿菌都使用了LB培養(yǎng)基，其成分_______。 A.前者含瓊脂，后者不含瓊脂和瓊脂糖 B.兩者都含有瓊脂 C.前者含有瓊脂糖，后者不含瓊脂糖但含瓊脂 D.兩者都不含瓊脂和瓊脂糖,1,2,3,4,解析 分離以尿素為氮源的細(xì)菌所用培養(yǎng)基應(yīng)含有瓊脂糖，而分離大腸桿菌所用培養(yǎng)基則不含瓊脂糖而含瓊脂。,√,,解析,4.要獲得能夠分泌脲酶的細(xì)菌的菌種，某生物興趣小組的同學(xué)設(shè)計(jì)了以下培養(yǎng)和篩選的途徑： (1)獲得菌種：要獲得較多的能夠分泌脲酶的細(xì)菌，最好取5～25 cm處的淺層土樣，說明這類細(xì)菌的細(xì)胞呼吸方式為__________，在生態(tài)系統(tǒng)中屬于________(成分)。,1,2,3,4,分解者,需氧呼吸,,答案,(2)將土樣加入無菌水中配制成懸液，并配制如圖所示的培養(yǎng)基，其中尿素在培養(yǎng)基中必須是作為保證微生物生長(zhǎng)的唯一______。向培養(yǎng)基中添加尿素的方法是待其他成分滅菌冷卻后， 加入尿素溶液，而該尿素溶液要事先用 ___________過濾，使之無菌。從物理 性質(zhì)看，該培養(yǎng)基屬于____________。,1,2,3,4,葡萄糖：0.05 g NaCl：0.24 g K2HPO4：0.24 g 瓊脂糖：1.0 g 酚紅：0.5 g 水：30 mL 尿素：20 mL(含2 g脲),,固體培養(yǎng)基,氮源,G6玻璃漏斗,,答案,(3)利用酚酞指示劑可檢測(cè)出細(xì)菌是否能分泌脲酶，原理是脲酶能使__________________________________________，結(jié)果菌落周圍培養(yǎng)基呈紅色。 (4)為獲取能分泌脲酶的單菌落，必須將土壤樣液進(jìn)行稀釋，并取少量稀釋土壤液用_____________接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)皿在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí)必須倒置，原因是_____________________________________________。,1,2,3,4,培養(yǎng)基中的尿素分解為NH3，使周圍的pH升高,防止冷凝后的水珠從皿蓋上落入培養(yǎng)基，造成污染,涂布分離法,,答案,,(5)若要分離土壤中的尿素分解菌，對(duì)于采集和處理土壤樣品，下列敘述錯(cuò)誤的是( ) A.最好選擇在肥沃濕潤(rùn)、動(dòng)物排泄物多的土壤中取樣 B.采集的土樣需經(jīng)高溫滅菌后，才可以用于制取土壤稀釋液 C.制備土壤稀釋液時(shí)，要用無菌水 D.用于制備土壤稀釋液的各種器具要經(jīng)過滅菌,返回,1,2,3,4,√,考點(diǎn)二 酶的應(yīng)用,一、果汁中的果膠和果膠酶 1.果膠 (1)果膠是 的主要成分，它由___________________________ 組成。 (2)果膠與果汁加工：果膠不僅影響出汁率，還會(huì)使果汁渾濁。 2.果膠酶 (1)來源：黑曲霉、蘋果青霉等。 (2)組成：果膠酶并不是特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，主要包括果膠酶和 酶。,,答案,植物細(xì)胞壁,半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯,果膠甲酯,(3)作用：將果膠分解成可溶性的分子，使出汁率提高，也使渾濁的果汁變得澄清。 3.探究利用蘋果或山楂勻漿制作果汁的最佳條件的實(shí)驗(yàn) (1)實(shí)驗(yàn)原理,,答案,②果膠酶的活性受溫度(或pH)的影響，處于最適溫度(或pH)時(shí)活性最高。果肉的出汁率、果汁的澄清度與果膠酶的 成正比。 ③果膠不溶于乙醇。,活性大小,(2)實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì),,答案,不加熱,95%的乙醇,二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè) 1.α-淀粉酶的固定化 (1)固定化酶 ①概念：將水溶性的酶用 的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。 ②方法：吸附法、 、交聯(lián)法和包埋法等。 (2)α-淀粉酶的固定化 ①α-淀粉酶作用的最適條件：最適pH為 ；最適溫度為 。 ②方法： 法。,,答案,物理或化學(xué),共價(jià)偶聯(lián)法,5.5～7.5,50～75℃,吸附,③淀粉的水解作用,,答案,糊精,麥芽糖,遇碘顯藍(lán)色 遇碘顯紅色 遇碘不顯色 2.淀粉水解的測(cè)定實(shí)驗(yàn) 固定α-淀粉酶→滴管滴加淀粉溶液→加 溶液→觀察→ →幾天后重復(fù)實(shí)驗(yàn)。,KI－I2,洗滌,3.α-淀粉酶固定化實(shí)驗(yàn)過程 固定化α-淀粉酶，裝入注射器中 ↓ 以0.3 mL/min的流速滴加 過柱 ↓ 流出5 mL淀粉溶液后接收0.5 mL流出液 ↓ 滴加 溶液，觀察顏色，用水稀釋1倍后再觀察顏色 ↓ 以10倍柱體積的蒸餾水洗滌固定化柱，放置在4 ℃冰箱中，幾天后重復(fù)實(shí)驗(yàn),,答案,淀粉溶液,KI－I2,1.將果膠酶用于果膠生產(chǎn)，既能提高果肉的出汁率又能提高果汁的澄清度 ( ) 2.酶的活性受溫度、pH和酶用量等因素的影響 ( ) 提示 酶用量不影響酶的活性。 3.果膠起著將植物細(xì)胞粘合在一起的作用，它溶于乙醇 ( ) 提示 果膠不溶于乙醇。 4.用固定化α-淀粉酶進(jìn)行淀粉水解實(shí)驗(yàn)時(shí)不需考慮溫度 ( ) 提示 溫度影響酶的活性。,思考診斷,,答案,提示,√,,,,5.固定化α-淀粉酶可永久使用 ( ) 提示 固定化酶能夠連續(xù)使用，但不是永久使用。 6.α-淀粉酶固定化實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將固定化柱放在常溫下即可 ( ) 提示 固定化柱低溫保存。,,答案,提示,,,1.探究影響果膠酶活性因素實(shí)驗(yàn)的相關(guān)分析 (1)實(shí)驗(yàn)原則：遵循單一變量原則、對(duì)照原則，嚴(yán)格控制變量，盡量減少無關(guān)變量的影響。 (2)實(shí)驗(yàn)原理：果膠酶活性受溫度、pH或酶抑制劑的影響，在最適溫度或pH時(shí)，其活性最高，果肉的出汁率、果汁的澄清度都與果膠酶的活性大小呈正相關(guān)。,(3)三個(gè)實(shí)驗(yàn)的變量分析,2.酶的固定化方法及適用對(duì)象,,題型一 果汁中的果膠和果膠酶,解析,1,2,3,4,1.下列有關(guān)果膠酶及果膠酶實(shí)驗(yàn)探究的敘述，正確的是( ) A.探究果膠酶的用量時(shí)，pH、溫度不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 B.果膠酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和葡萄糖異構(gòu)酶等 C.探究溫度對(duì)果膠酶活性的影響時(shí)，溫度、蘋果泥、果膠酶的用量及反 應(yīng)時(shí)間等都是自變量 D.可以用相同時(shí)間內(nèi)過濾得到的果汁體積來確定果膠酶的用量,√,解析 探究果膠酶的用量時(shí)，pH、溫度會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；葡萄糖異構(gòu)酶不屬于果膠酶的成分；探究溫度對(duì)果膠酶活性的影響實(shí)驗(yàn)中，溫度為單一變量，其他因素保持不變。,2.某同學(xué)為探究溫度對(duì)果膠酶活性的影響，在不同溫度條件下，將等量的果膠酶加入到等量的蘋果泥中，在反應(yīng)同樣時(shí)間后，再將反應(yīng)液過濾同樣時(shí)間，用量筒測(cè)定濾出蘋果汁的體積。下列曲線圖能正確反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果的是( ),√,1,2,3,4,,解析,解析 果膠酶在0 ℃時(shí)活性較低，但也能催化蘋果泥形成果汁，果汁量不為0；隨著溫度升高，果膠酶的活性先升高后下降，果汁量也是先升高后降低。正確的應(yīng)是B曲線。,1,2,3,4,題型二 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè),直接使用酶和固定化酶的比較,,,解題必備,1,2,3,4,1,2,3,4,,3.下列關(guān)于固定化酶的說法，錯(cuò)誤的是( ) A.固定化酶的不足之處是不能催化一系列反應(yīng) B.固定化酶可再次利用，降低了生產(chǎn)成本 C.固定后的酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與反應(yīng)物分離 D.固定化酶易溶于水,解析,√,解析 由于酶具有專一性，因此固定化酶不能催化一系列反應(yīng)，A項(xiàng)正確； 固定化酶可反復(fù)利用，降低了生產(chǎn)成本，B項(xiàng)正確； 固定后的酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與反應(yīng)物分離，C項(xiàng)正確； 固定化酶不易溶于水，易與反應(yīng)物分離，D項(xiàng)錯(cuò)誤。,1,2,3,4,4.(2015舟山中學(xué)測(cè)試)某校學(xué)生嘗試用瓊脂作載體， 用包埋法固定α-淀粉酶來探究固定化酶的催化效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表(假設(shè)加入試管中的固定化淀粉酶量與普通α淀粉酶量相同)。實(shí)驗(yàn)表明1號(hào)試管中淀粉未被水解，最可能的原因是( ),1,2,3,4,A.實(shí)驗(yàn)中的溫度過高，導(dǎo)致固定化淀粉酶失去活性 B.淀粉是大分子物質(zhì)，難以通過瓊脂與淀粉酶接觸 C.水浴保溫時(shí)間過短，固定化淀粉酶未將淀粉水解 D.實(shí)驗(yàn)程序出現(xiàn)錯(cuò)誤，試管中應(yīng)先加入碘－碘化鉀溶液后保溫,√,解析 由于固定化酶是用包埋法固定的，而淀粉是大分子物質(zhì)，它不能通過瓊脂與酶充分接觸，導(dǎo)致淀粉不能被水解而遇碘－碘化鉀溶液呈現(xiàn)藍(lán)色。,,解析,返回,1,2,3,4,探高考 練模擬,1,2,3,4,1.(2016溫州中學(xué)期末測(cè)試)下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列操作方法正確的是( ) A.操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌 B.劃線操作須在火焰上進(jìn)行 C.在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落 D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌,√,,解析,5,1,2,3,4,5,解析 操作前要將接種環(huán)放在火焰上灼燒滅菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤； 劃線操作須在火焰旁進(jìn)行，B項(xiàng)錯(cuò)誤； 在5區(qū)域中最有可能得到所需菌落，C項(xiàng)錯(cuò)誤； 在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，D項(xiàng)正確。,2.(2016魯迅中學(xué)期末測(cè)試)下列關(guān)于“探究果膠酶最適用量的實(shí)驗(yàn)”的敘述，錯(cuò)誤的是( ) A.配制不同濃度的果膠酶溶液，并在各組中加入等量的該溶液 B.實(shí)驗(yàn)溫度為無關(guān)變量，要在相同的適宜溫度條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn) C.用玻璃棒攪拌加酶的果泥，攪拌時(shí)間可以不相同 D.調(diào)節(jié)pH，使各組中的pH相同而且處于適宜狀態(tài),√,解析 在探究果膠酶最適用量的實(shí)驗(yàn)中，果膠酶量為自變量，通過配制不同濃度的果膠酶溶液來控制；實(shí)驗(yàn)溫度、攪拌時(shí)間、pH為無關(guān)變量，需要控制等量、適宜，A、B、D項(xiàng)正確，C項(xiàng)錯(cuò)誤。,,解析,1,2,3,4,5,3.(2016溫州中學(xué)測(cè)試)探究溫度對(duì)果膠酶活性影響的實(shí)驗(yàn)中，得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。據(jù)此分析其中不正確的是( ),1,2,3,4,5,A.實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)先將蘋果泥和果膠酶分別調(diào)節(jié)到對(duì)應(yīng)溫度后再混合 B.為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性，各組混合處理時(shí)間和過濾果汁時(shí)間均應(yīng)相同 C.應(yīng)在50～55 ℃設(shè)置更細(xì)溫度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探究果膠酶的最適溫度 D.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高溫能使果膠酶失活，但高溫也可能促進(jìn)果膠分解,√,,解析,1,2,3,4,5,解析 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)先將蘋果泥和果膠酶分別調(diào)節(jié)到對(duì)應(yīng)溫度后再混合，A項(xiàng)正確； 為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和控制單一變量，各組混合處理時(shí)間和過濾果汁時(shí)間均應(yīng)相同，B項(xiàng)正確； 實(shí)驗(yàn)中的溫度梯度跨度較大，要想確定最適溫度，需要設(shè)置更細(xì)溫度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分析數(shù)據(jù)可知，應(yīng)該在45～55 ℃設(shè)置更細(xì)溫度梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探究果膠酶的最適溫度，C項(xiàng)錯(cuò)誤； 高溫可以使酶失活，由表格數(shù)據(jù)可以看出，高溫也可能促進(jìn)果膠分解，D項(xiàng)正確。,1,2,3,4,5,4.在細(xì)菌培養(yǎng)過程中，下列有關(guān)操作正確的是( ) A.涂布器用火焰灼燒進(jìn)行滅菌 B.培養(yǎng)基分別裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌 C.倒平板和取菌液都必須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行 D.分離得到的菌落應(yīng)先接種在平板上，培養(yǎng)24 h后，置于4 ℃冰箱保存,,解析,1,2,3,4,5,√,,1,2,3,4,5,解析 涂布器應(yīng)該用高壓蒸汽滅菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤； 培養(yǎng)基應(yīng)該先滅菌后分裝，B項(xiàng)錯(cuò)誤； 倒平板和取菌液都必須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以防止雜菌污染，C項(xiàng)正確； 分離得到的菌落應(yīng)先接種于斜面上，置于37 ℃的恒溫箱培養(yǎng)24 h后，再置于4 ℃冰箱保存，D項(xiàng)錯(cuò)誤。,5.(2014浙江自選，17節(jié)選)(1)現(xiàn)有一份污水樣品， 某興趣小組欲檢測(cè)其中的細(xì)菌數(shù)，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將一定量的污水樣品進(jìn)行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用________法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，接種前，從盛有__________的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時(shí)，需用________________作為對(duì)照。,解析 細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)常用涂布分離法，即用玻璃刮刀將一定體積的稀釋液涂布到固體平面培養(yǎng)基上。玻璃刮刀在使用前需進(jìn)行滅菌處理，即將其浸入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中，隨后取出放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用。為排除其他因素的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度，實(shí)驗(yàn)中要設(shè)置空白對(duì)照。,1,2,3,4,5,,未接種的培養(yǎng)基,涂布分離,70%酒精,解析答案,(2)在上述細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)計(jì)數(shù)的是接種了( ) A.各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù) B.合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù) C.各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù) D.合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù),,解析,1,2,3,4,5,返回,√,解析 將菌液涂布到固體平面培養(yǎng)基上后，倒置放在恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，這樣通過統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)就可估算出待測(cè)樣品的細(xì)菌數(shù)目，所以要選擇合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。,