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1、 粗茶中茶多糖的提取和測定的分析論文
1實驗部分
1.1儀器和試劑
儀器:722型可見分光光度計(上海光學儀器),KQ-500VDB雙頻數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);超純水機(南京易普易達科學發(fā)展有限公司);電子天平(賽多利斯利科儀器(北京)有限公司)等。
試劑:無水乙醇,蒽酮,濃硫酸,葡萄糖,丙酮,無水乙醚等,所用的化學試劑均為分析純。
1.2茶多糖的提取
粗老茶葉-烘干-研磨-溫水浸提-過濾-濃縮-乙醇沉淀-靜置-離心-無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替洗滌-烘干-茶多糖粗成品。
稱取10 g粗茶,60 度干燥2 h,磨碎過40-50目篩,溫水浸提(80 度 ,
2、80 min, 3次),過濾,減壓濃縮,沉淀劑,95%乙醇沉淀,離心(4000 r/min,10 min)得沉淀物,用無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替攪拌洗滌2次干燥(60 度, 4 h),得粗茶多糖,稱量。
1.3蒽酮-硫酸試液的配制
稱取0.30 g蒽酮,加100 mL濃硫酸,置于棕色試劑瓶中,搖勻后置于冰箱中。
1.4標準曲線的繪制
稱取無水葡萄糖標準品適量,加蒸餾水配成1.008 mg/mL的標準溶液。精密移取標準溶液1.0. 2.0. 4.0. 6.0. 8.0. 10.0 mL分別置于100 mL容量瓶中,各加水至刻度,搖勻。分別精密移
取上述標準溶液各2.0 ml置具塞試管
3、中,以2 mL蒸餾水作空自,每管再加8 mL蒽酮-硫酸試液,立即搖勻,冰水浴冷卻。沸水浴中加熱7 min,流動水冷卻至室溫,10 min后在560 nm處測定吸光度,以吸光度(A)對葡萄糖濃度(C)作回歸處理,得回歸方程:C=105.0383 A-7.2499, r=0.9995 。
1.5換算因子的測定
1.6茶多糖的測定
2 結果與討論
2.1茶多糖提取最佳條件選擇
選擇浸提時間、浸提溫度、料液比三個因素、三個水平,進行茶多糖提取最佳條件的選擇。
2.2重復性
精確稱取粗老茶葉1g,按照1.6項下方法處理后重復測定6次分別計算茶葉多糖含量,RSD=0.54,表明精密度良好。
2.3穩(wěn)定性
精確吸取1.6項下制取茶多糖樣品液1 mL于具塞試管中,每間隔1h測定溶液的吸光度,RSD=0.23 %(n=5),在5h內顯色穩(wěn)定。
2.4加樣回收率
精確稱取3份粗老茶葉各1g,加入精制茶葉多糖約20 mg,按1.6項下方法測定茶葉多糖含量,計算回收率,回收率范圍為98.86%-102.32%。
3結論
本實驗采用蒽酮-硫酸法測定粗老茶葉中茶多糖的含量,方法快速、準確、靈敏。由正交設計得出茶多糖提取的最佳工藝,結果表明粗老茶葉中茶多糖含量較高。