《圓二色譜儀操作規(guī)程培訓(xùn)》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《圓二色譜儀操作規(guī)程培訓(xùn)（31頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,*,JASCO J-1500,圓二色譜儀操作培訓(xùn),-,食品科技學(xué)院 中心實(shí)驗(yàn)室 唐老師,目 錄,1,、,圓二色譜儀基本原理與應(yīng)用,2,、,JASCO J-1500,基本組成與附件,3,、開機(jī)與基本操作規(guī)程,4,、數(shù)據(jù)分析,5,、關(guān)機(jī)與試驗(yàn)注意事項(xiàng),1,、圓二色譜儀基本原理,平面偏振光的電向量,E,起偏振器,自然光的電向量,E,橢圓偏振光,：,兩束偏振光的振幅,(,強(qiáng)度,),不相同,圓二色性,(CD),：活性物質(zhì)對(duì)左、右旋圓偏振光的吸收率差值，將傳播的左右圓偏振光變成橢圓偏振光。,兩束互相垂直，振幅相等的平

2、面偏振光，其位相相差,1/4,波長(zhǎng)時(shí)，合成圓偏振光。,圓二色性,(CD),的表示：,CD,單位轉(zhuǎn)換方法：,http:/www.eryi.org/blog/post/circular-dichroism-units-conversion.html,Ellipticity,（橢圓率,）,：,mdeg,，定義單位，儀器測(cè)定直接顯示,CD,圖,y,坐標(biāo)。,Mean residue ellipticity or,Molar ellipticity(,摩爾橢圓率,),：?jiǎn)挝粸?deg.cm,2,.dmol,-1,，文獻(xiàn)中通常都使用,根據(jù),Beer-Lambert law,有：,=,.,l.c,或,=,md

3、eg/(l.c)(c-,摩爾濃度,),計(jì)算出的值最后再乘以,1000,即可轉(zhuǎn)換為,deg.cm,2,.dmol,-1,對(duì)于,蛋白質(zhì),，使用的是,mean residue ellipticity,。由于,mean residue molecular weight=protein formula weight/number of residues.,摩爾圓二色性為摩爾消光系數(shù)的差值（,delta epsilon,），即：,=LCP-RCP,在分子模擬中通過高斯理論計(jì)算,CD,光譜時(shí)，得到的結(jié)果通常是以,摩爾圓二色性,表示,。,與摩爾橢圓率（,molar ellipticity,）,之間的轉(zhuǎn)換：,=

4、3298.2,CD,光譜與,ORD,光譜,：,同時(shí)產(chǎn)生，包括同樣的分子結(jié)構(gòu)信息，光學(xué)活性物質(zhì)分子中的不對(duì)稱生色團(tuán)。,CD,反應(yīng)光與分子間能量的轉(zhuǎn)換，旋光性則是與分子中電子的運(yùn)動(dòng)有關(guān)。,差異：,CD,比,ORD,容易辨別重疊峰，易檢測(cè)弱吸收帶、更容易擬合、能夠提供較多意義明確的信息。,旋光性,(ORD),：光學(xué)活性分子對(duì)左、右圓偏光的折射率不同，透射光仍然為平面偏振光，但其旋轉(zhuǎn)了一定的角度（旋光度）。,圓二色譜儀應(yīng)用：,蛋白質(zhì)折疊研究,蛋白質(zhì)構(gòu)象研究,DNA/RNA,相互作用,酶動(dòng)力學(xué)研究,有機(jī)立體化學(xué)研究,光化學(xué)物質(zhì)純度檢測(cè),藥物量的分析,天然有機(jī)化學(xué),生化和大分子,金屬?gòu)?fù)合物化學(xué),醫(yī)學(xué),農(nóng)業(yè)

5、化學(xué),物理化學(xué),快速掃描實(shí)驗(yàn),通過,CD,光譜可用于分析諸如,核酸、蛋白質(zhì)、多糖等生物大分子光活性物質(zhì),的空間結(jié)構(gòu)。,蛋白質(zhì)：,氨基酸的圓二色性：在可見光區(qū)沒有吸收，紫外區(qū)只有芳香族色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。,2,、,JASCO J-1500,基本組成與附件,配置：,1,）檢測(cè)器：,UV-VIS,163-950nm,NIR,400-1250nm,2),光源：,氙燈,3),氣體：高純,N2,4),多通道,測(cè)定（,CD/HT/Abs,），,CD,測(cè)定范圍：,20,200,2000,10000 mdeg,5),蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu),分析軟件,6),其他,附件,：變溫支架、停流附件等,附件,1),變溫樣品支

6、架（,-40130,）,石英比色皿,:1,、,10mm,石英比色皿,:1,、,2,、,5,、,10mm,附件,2),固體樣品支架與積分球檢測(cè)器,制樣工具,可做透射法或反射法，,壓片制樣或直接上樣,3),停流附件,注射器：,10ml,單管路死體積：,46ul,注射器,Flow rate,Max,:,5ml/min,Mixing Ratio:,整數(shù)倍,反應(yīng)動(dòng)力學(xué)檢測(cè),4)N2,吹掃裝置,只能用于標(biāo)準(zhǔn)樣品支架，用于,190nm,以下樣品測(cè)試,3,、開機(jī)與基本操作規(guī)程,1,）,開氣,：,打開氮?dú)?，調(diào)節(jié)分壓在,0.02mPa,左右，依據(jù)測(cè)定波長(zhǎng)范圍在儀器右側(cè)的流量控制器中調(diào)節(jié)所需的氣體流量。(190n

7、m 2L/min;185-190nm 5-10L/min;2,時(shí)，測(cè)試不準(zhǔn)確。適宜的,A,范圍,0.6-1,。,b),控制,HT,范圍在,170-700,之間,，降低,HT,方法：降低樣品濃度、使用短光程長(zhǎng)比色皿、增加帶寬、注意溶劑效應(yīng)。,HT700,時(shí)沒有足夠的光到達(dá)檢測(cè)器，測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。狹縫寬太大，,HT170,可損壞,PMT,檢測(cè)器。,4,、數(shù)據(jù)分析,1,）數(shù)據(jù)類型：,2D,數(shù)據(jù)：,.jws,格式，光譜分析軟件以及二級(jí)結(jié)構(gòu)分析軟件都是需要這種格式數(shù)據(jù)文件。,3D,數(shù)據(jù)：,.jwb,格式，需根據(jù)需要提取,2D,數(shù)據(jù)后進(jìn)行相關(guān)分析。,2,）蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)軟件分析：,CD,單位需為摩爾濃度，

8、故需已知蛋白濃度（,mg/ml,），氨基酸殘基平均分子量（未知時(shí)，一般取,110,）。,“蛋白質(zhì)中,20,中氨基酸的平均分子質(zhì)量約為,138,，但在多數(shù)蛋白質(zhì)中較小的氨基酸占優(yōu)勢(shì)，因此平均相對(duì)分子質(zhì)量約為,128,。又因每形成一個(gè)肽鍵將除去一分子水（相對(duì)分子質(zhì)量,18,），所以氨基酸殘基的平均相對(duì)分子質(zhì)量約為,128-18=110,?！?-,王鏡巖版,生物化學(xué),第三版上冊(cè),p160,2D,數(shù)據(jù)分析：,二級(jí)結(jié)構(gòu)分析：,打開,protein Secondary structure estimation,軟件，打開轉(zhuǎn)換單位后另存的文件數(shù)據(jù),。,3D,數(shù)據(jù)分析：,需進(jìn)行,2D,數(shù)據(jù)提取后方可進(jìn)行有關(guān)分

9、析。點(diǎn)擊,Interval Data Analysis,軟件，打開,.jwb,格式,3D,數(shù)據(jù)文件。,5,、關(guān)機(jī)與測(cè)試注意事項(xiàng),1,）關(guān)機(jī)程序：,關(guān)閉軟件、關(guān)閉電腦和,J-1500,主機(jī)電源、關(guān)閉水循環(huán)、通氣,10min,后關(guān)閉氮?dú)?。,2,）樣品架確認(rèn)：,儀器開機(jī)前確認(rèn)安裝的是何種樣品支架，若是變溫支架必須先開循環(huán)水才能開機(jī)。,3,）禁止未開氣體開機(jī)：,高壓氙燈，使空氣在,O2,變成臭氧，腐蝕光路配件表面。,4,）比色皿：,石英比色皿由于加工過程產(chǎn)生形變可顯示圓二色性，故需使用低,CD,信號(hào)的比色皿。,比色皿清洗：保證測(cè)試重復(fù)性。禁止超聲清洗，,Pierced,等專門清洗劑（清洗劑洗后建議用,2M,）、堿溶液、,50%,硝酸等。,for protein:,近紫外區(qū)使用光程長(zhǎng),5mm,的，遠(yuǎn)紫外區(qū)使用,1mm-0.1mm,。,End,