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1、 WORD格式整理版 選修一 生物技術(shù)實(shí)踐 專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 課題1 果酒和果醋的制作 1．果酒制作的原理 （1）人類利用微生物發(fā)酵制作果酒，該過(guò)程用到的微生物是 ， 它的代謝類型是 ，與異化作用有關(guān)的方程有 。 生活狀態(tài)：進(jìn)行發(fā)酵，產(chǎn)生大量 。 （2）果酒制作條件 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來(lái)源是 。 酵母菌生長(zhǎng)的最適溫度是

2、 ； PH呈 ； （3）紅色葡萄酒呈現(xiàn)顏色的原因是：酒精發(fā)酵過(guò)程中，隨著 的提高，紅色葡萄皮的 進(jìn)入發(fā)酵液，使葡萄酒呈 色。 （4）在 、 的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其它微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。 2．果醋的制作原理 （1）果醋發(fā)酵菌種是 ，新陳代謝類型 。 （2）當(dāng)氧氣和糖源充足時(shí)醋酸菌將糖分解成 ，當(dāng)糖源不足時(shí)醋酸菌將 變?yōu)? 再變成

3、醋酸，其反應(yīng)式 。 3．操作過(guò)程應(yīng)注意的問(wèn)題 （1）為防止發(fā)酵液被污染，發(fā)酵瓶要用 消毒。 （2）葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留出大約 的空間。 （3）制作葡萄酒時(shí)將溫度嚴(yán)格控制在 ，時(shí)間控制在 d左右，可通過(guò) 對(duì)發(fā)酵的情況進(jìn)行及時(shí)的監(jiān)測(cè)。 （4）制葡萄醋的過(guò)程中，將溫度嚴(yán)格控制在 ，時(shí)間控制在 d，并注意適時(shí)在 充氣。 4．酒精的檢驗(yàn) （1）檢驗(yàn)試劑：

4、 。 （2）反應(yīng)條件及現(xiàn)象：在 條件下，反應(yīng)呈現(xiàn) 。 5.制作果酒、果醋的實(shí)驗(yàn)流程 挑選葡萄→ → → → ↓ ↓ 果酒 果醋 P4旁欄思考題 1．你認(rèn)為應(yīng)該先洗葡萄還是先除去枝梗，為什么？ 應(yīng)該先沖洗葡萄，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。 2．你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？ 需要從發(fā)酵制作的過(guò)程進(jìn)行全面的考慮，

5、因?yàn)椴僮鞯拿恳徊蕉伎赡芑烊腚s菌。例如：榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。 3．制作葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在18～250C？制作葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在30～350C？ 溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件。200C左右最適合酵母菌繁殖，因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～350C，因此要將溫度控制在30～350C。 4．制葡萄醋時(shí)，為什么要適時(shí)通過(guò)充氣口充氣？ 醋酸菌是好氧菌，再將酒精變成醋酸時(shí)需要養(yǎng)的參與，因此要適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。 P4: A同學(xué)：每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋

6、；制醋時(shí)，再將瓶蓋打開，蓋上一層紗布，進(jìn)行葡萄醋的發(fā)酵。 來(lái)防止發(fā)酵液被污染，因?yàn)椴僮鞯拿恳徊蕉伎赡芑烊腚s菌 B同學(xué)：分析果酒和果醋的發(fā)酵裝置中充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接？ 充氣口：是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的； 排氣口：是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出二氧化碳的； 出料口：是用來(lái)取樣的。 排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。 課題2 腐乳的制作 1.制作原理 （1）．經(jīng)過(guò)微生物的發(fā)酵，豆腐中的蛋白質(zhì)被分解成小

7、分子的 和 ，脂肪被分解成 和 ，因而更利于消化吸收。 （2）．腐乳的發(fā)酵有多種微生物參與，如 、 、 、 等，其中起主要作用的是 。它是一種絲狀 ，常見 、 、 、 上。 （3）．現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格的 條件下，將優(yōu)良 菌種直接接種在豆腐上，這樣可以避免其他菌種的 ，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。 2. 腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程： 讓豆腐長(zhǎng)出

8、 → → →密封腌制。 3.實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) （1）在豆腐上長(zhǎng)出毛霉時(shí)，溫度控制在 ，自然條件下毛霉的菌種來(lái)自空氣中的 。 （2）將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層加鹽，加鹽量要隨著擺放層數(shù)的加高而 ，近瓶口的表層要 。加鹽的目的是使豆腐塊失水，利于 ，同時(shí)也能 的生長(zhǎng)。鹽的濃度過(guò)低， ；鹽的濃度過(guò)高， 。 （3）鹵湯中酒精

9、的含量應(yīng)控制在 左右，它能 微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)也與豆腐乳獨(dú)特的 形成有關(guān)。酒精含量過(guò)高， ；酒精含量過(guò)低， 。香辛料可以調(diào)制腐乳的風(fēng)味，同時(shí)也有 作用。 （4）瓶口密封時(shí)，最好將瓶口 ，防止瓶口污染。 P6旁欄思考題 1.你能利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí)，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？ 豆腐上生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說(shuō)是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。 2.王致和為什么要撒許多鹽，將長(zhǎng)

10、毛的豆腐腌起來(lái)？ 鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。 3．你能總結(jié)出王致和做腐乳的方法嗎？ 讓豆腐長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→密封腌制。 P7旁欄思考題 1.我們平常吃的豆腐，哪種適合用來(lái)做腐乳？ 含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過(guò)高的豆腐制腐乳，不易成形。 2.吃腐乳時(shí)，你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有害嗎？它的作用是什么？ “皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲（匍匐菌絲），它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。“皮”對(duì)人體無(wú)害。 P8練習(xí) 1. 腌制腐乳時(shí),為什么要隨豆腐層的加高而增加鹽的含量？為什么在接近瓶口的表面要

11、將鹽厚鋪一些？ 越接近瓶口，雜菌污染的可能性越大，因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量，在接近瓶口的表面，鹽要鋪厚一些，以有效防止雜菌污染。 2．怎樣用同樣的原料制作出不同風(fēng)味的腐乳？（可以不看） 在酒和料上作變動(dòng) 紅腐乳：又稱紅方，指在后期發(fā)酵的湯料中，配以著色劑紅曲，釀制而成的腐乳。 白腐乳：又稱白方，指在后期發(fā)酵過(guò)程中，不添加任何著色劑，湯料以黃酒、白酒、香料為主釀制而成的腐乳，在釀制過(guò)程中因添加不同的調(diào)味輔料，使其呈現(xiàn)不同的風(fēng)味特色，目前大致包括糟方、油方、霉香、醉方、辣方等品種。 青腐乳：又稱青方，俗稱“臭豆腐”，指在后期發(fā)酵過(guò)程中，以低度鹽水為湯料釀制而成的腐乳，具有特有

12、的氣味，表面呈青色。 醬腐乳：又稱醬方，指在后期發(fā)酵過(guò)程中，以醬曲（大豆醬曲、蠶豆醬曲、面醬曲等）為主要輔料釀制而成的腐乳。 課題3 制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量 1．乳酸菌代謝類型為 ，在 情況狂下，將葡萄糖分解為乳酸。在自然界中分布廣泛，在 、 、 、 內(nèi)都有分布。常見的乳酸菌有 和 兩種，其中 常用于生產(chǎn)酸奶。 2．亞硝酸鹽為 ，易溶于 ，在食品生產(chǎn)中用作 。一般不會(huì)危害人體健康，但當(dāng)人體攝入硝酸鹽總量達(dá) g

13、時(shí)，會(huì)引起中毒；當(dāng)攝入總量達(dá)到 g時(shí)，會(huì)引起死亡。在特定的條件下，如 、 和 的作用下，會(huì)轉(zhuǎn)變成致癌物質(zhì)——亞硝胺，亞硝胺對(duì)動(dòng)物有致畸和致突變作用。 3．泡菜制作大致流程：原料處理→ →裝壇→ →成品 （1）配制鹽水：清水和鹽的比例為 ，鹽水 后備用。 （2）裝壇：蔬菜裝至 時(shí)加入香辛料，裝至 時(shí)加鹽水，鹽水要 ，蓋好壇蓋。壇蓋邊沿水槽中 ，保證壇內(nèi)

14、 環(huán)境。 （3）腌制過(guò)程種要注意控制腌制的 、 和 。溫度過(guò)高、食鹽用量不足10%、 過(guò)短，容易造成 ， 。 4．測(cè)亞硝酸鹽含量的原理是 。 將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的 進(jìn)行比較，可以大致 出泡菜中亞硝酸鹽的含量。 測(cè)定步驟：配定溶液→

15、 → 制備樣品處理液→ P9旁欄思考題： 為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶？ 酸奶的制作依靠的是乳酸菌的發(fā)酵作用。抗生素能夠殺死或抑制乳酸菌的生長(zhǎng)，因此含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶。 P10旁欄思考題： 1．為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜，不宜多吃腌制蔬菜？ 有些蔬菜，入小白菜和蘿卜等，含有豐富的硝酸鹽。當(dāng)這些蔬菜放置過(guò)久發(fā)生變質(zhì)（發(fā)黃、腐爛）或者煮熟后存放太久時(shí)，蔬菜中的硝酸鹽會(huì)被微生物還原成亞硝酸鹽，危害人體健康。 2．為什么泡菜壇內(nèi)有時(shí)會(huì)長(zhǎng)一層白膜？你認(rèn)為這層白膜是怎么形成的？ 形成白膜是由于產(chǎn)膜

16、酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物，泡菜發(fā)酵液營(yíng)養(yǎng)豐富，其表面氧氣含量也很豐富，適合酵母菌繁殖。 P12練習(xí)： 2．你能總結(jié)果酒、果醋、腐乳、泡菜這幾種發(fā)酵食品在利用微生物的種類和制作原理方面的不同嗎？你能總結(jié)出傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的共同特點(diǎn)嗎？ 果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵， 果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變成醋酸的代謝， 腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類， 泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。 傳統(tǒng)的發(fā)酵技術(shù)都巧妙的利用了天然菌種，都為特定的菌種提供了良好的生存條件，最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分，而是成分復(fù)雜的混合物。 專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題1

17、 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1．根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可將培養(yǎng)基可以分為 和 。 2．培養(yǎng)基一般都含有 、 、 、 四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì) 、 以及 的要求。 3．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 。 4．消毒是指 滅菌是指

18、 5．日常生活中常用的消毒方法是 ，此外，人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用 、 等。常用的滅菌方法有 、 、 ，此外，實(shí)驗(yàn)室里還用 或 進(jìn)行消毒。 6．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟是⑴ ，⑵ ，⑶ ，⑷ ，⑸ 。 7．微生物接種的方法中最常用的是

19、 和 。 平板劃線是指 。 稀釋涂布平板法指 。 8．菌種的保藏： （1）臨時(shí)保藏：將菌種接種到試管的 ，在合適的溫度下培養(yǎng)， 長(zhǎng)成后，放入 冰箱中保藏，以后每3—6個(gè)月，轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基。 缺點(diǎn)是：保存時(shí)間 ，菌種

20、容易被 或產(chǎn)生變異。 （2）長(zhǎng)期保存方法： 法，放在 冷凍箱中保存。 P15旁欄思考題： 無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？ 無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。 P16旁欄思考題： 請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 （1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。 P17倒平板操作的討論 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 ℃左右時(shí)

21、，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好

22、不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 P18平板劃線操作的討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

23、 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 P19涂布平板操作的討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。 P20六、課題成果評(píng)價(jià) 1.培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2

24、d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 2.接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 3.是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。 P20練習(xí) 1.提示：可以從微生物生長(zhǎng)需要哪些條件的角度來(lái)思考。例如，微生物的生長(zhǎng)需要水、空

25、氣、適宜的溫度，食品保存可以通過(guò)保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來(lái)阻止微生物的生長(zhǎng)。 2.提示：可以從這三種培養(yǎng)技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進(jìn)行總結(jié)歸納。例如，這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營(yíng)養(yǎng)，但無(wú)土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無(wú)菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴(yán)格的無(wú)菌條件。 3.提示：這是一道開放性的問(wèn)題，答案并不惟一，重點(diǎn)在于鼓勵(lì)學(xué)生積極參與，從不同的角度思考問(wèn)題。例如，正是由于證明了微生物不是自發(fā)產(chǎn)生的，微生物學(xué)才可能發(fā)展成為一門獨(dú)立的學(xué)科；巴斯德實(shí)驗(yàn)中用到的加熱滅菌的方法導(dǎo)致了有效的滅菌方法的出現(xiàn)，而這一滅菌原理也適用于食品的保存等。 課題2 土壤中分解尿素

26、的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 1．尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。選擇分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基特點(diǎn)： 惟一氮源，按物理性質(zhì)歸類為 培養(yǎng)基。 2．．PCR（ ）是一種在體外將 。此項(xiàng)技術(shù)的自動(dòng)化，要求使用耐高溫的DNA聚合酶。 3實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理是：人為提供有利于 生長(zhǎng)的條件（包括 等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。 4．選擇培養(yǎng)基是指

27、 。 5．常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是 。即當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的 。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)公式是 。利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是 。另外， 也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。 6．一般來(lái)說(shuō)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比

28、活菌的實(shí)際數(shù)目 。這是因?yàn)? 。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用 而不是活菌數(shù)來(lái)表示。 7．設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是 ，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。對(duì)照實(shí)驗(yàn)是 。滿足該條件的稱為 ，未滿足該條件的稱為 。 8．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括的內(nèi)容有： 、 、 和 ，具體的實(shí)驗(yàn)步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。

29、9．不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng) 和培養(yǎng) 。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，一般每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以 。 10．土壤有“ ”之稱，同其他生物環(huán)境相比，土壤中微生物 、 。 11．土壤中的微生物約 是細(xì)菌，細(xì)菌適宜在酸堿度接近 潮濕土壤中生長(zhǎng)。土壤中微生物的數(shù)量不

30、同，分離不同微生物采用的 的稀釋度不同。 12．一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。這些特征包括菌落的 、 、 和 等方面。 13．在進(jìn)行多組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)注意做好標(biāo)記，其目的是 。 14．對(duì)所需的微生物進(jìn)行初步篩選，只是分離純化菌種的第一步，要對(duì)分離的菌種進(jìn)行一步的鑒定，還需要借助 的方法。 15．在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的 將尿素分解成了 。氨會(huì)

31、使培養(yǎng)基的堿性 ，PH 。因此，我們可以通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基 變化來(lái)判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生?！≡谝? 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變 ，說(shuō)明該細(xì)菌能夠 。 P22旁欄思考題 1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？ 答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。 P22 兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)106的培養(yǎng)集中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：1.第一位同

32、學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230；2.第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個(gè)平板…… 第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。 P22設(shè)置對(duì)照 A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個(gè)原因，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。實(shí)驗(yàn)方案有兩種。一種方案是可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無(wú)誤；如果

33、結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。 P24旁欄思考題 為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？ 這是因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量（單位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2 185萬(wàn)，放線菌數(shù)約為477萬(wàn)，霉菌數(shù)約為23.1萬(wàn)。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，

34、同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。 P25 結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 1．培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落 對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。 2．樣品的稀釋操作是否成功 如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。 3．重復(fù)組的結(jié)果是否一致 如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，教師需要引導(dǎo)學(xué)生一起分析產(chǎn)生差異的原因。 P26練習(xí) 2.提示：反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微

35、生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。 課題3 分解纖維素的微生物的分離 1．纖維素是 類物質(zhì)， 是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。 2．纖維素酶是一種 酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即 、 和 ，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成 。正是在這三種酶的協(xié)同作用下，纖維素最終被水解成葡萄糖，

36、為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，同樣，也可以為人類所利用。 3．篩選纖維素分解菌可以用 法，這種方法能夠通過(guò) 直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。 可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成 ，但并不和水解后的 和 發(fā)生這種反應(yīng)。纖維素分解菌能產(chǎn)生 分解纖維素，從而使菌落周圍形成 。 4．分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程圖如下： → →梯度稀釋→ → 。 5．為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還學(xué)進(jìn)

37、行 的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有 發(fā)酵和 發(fā)酵。測(cè)定方法一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的 進(jìn)行定量測(cè)定。 P28旁欄思考題 1.本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ 本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過(guò)選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。 2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？ 由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的

38、環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。 3.將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10 cm左右腐殖土壤中。 P29旁欄思考題 1．想一想，這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？你打算選用哪一種方法？（兩種剛果紅染色法的比較） 方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。 方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊

39、脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。 2.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？ 在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。 P29六、課題成果評(píng)價(jià) 1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對(duì)

40、照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)則說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說(shuō)明可能獲得了分解纖維素的微生物。 2.分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。 P30練習(xí) 2.答：流程圖表示如下。 土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定）→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單菌落→發(fā)酵培養(yǎng) 專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 課題1 菊花的組織培養(yǎng) 1．有某種生物全套 的任何一個(gè)

41、活細(xì)胞，都具有發(fā)育成 的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有 。但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái)，這是因?yàn)樵? 條件下，通過(guò)基因的 ，構(gòu)成不同組織和器官。 2. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的 ；培育 作物；制作 種子；培育作物 以及細(xì)胞產(chǎn)物的 等。 3. 細(xì)胞分化：個(gè)體發(fā)育中細(xì)胞在 上出現(xiàn) 差異的過(guò)程。 4. 愈傷組織是通過(guò) 形

42、成的，其細(xì)胞排列 ，高度 呈 狀態(tài)的 細(xì)胞。 5. 植物組織培養(yǎng)的過(guò)程可簡(jiǎn)單表示為： （脫分化）） （ ） 愈傷組織 組織 （生長(zhǎng)） 新個(gè)體 6.材料：植物的種類、材料的 和 等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇 作材料。 7. 營(yíng)養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是 培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是 ，微量元素是 ，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌

43、醇、維生素、蔗糖等。 8.激素：在培養(yǎng)基中需要添加 和 等植物激素，其 、 、 等都影響結(jié)果 9.環(huán)境條件：PH、 、 等環(huán)境條件。菊花組培所需PH為 ，溫度為 ，光照條件為 。 10. 配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。使用時(shí)根據(jù)母液的 ，計(jì)算用量，并加 稀釋。 11. 配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、 、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用 定容到 毫升。

44、在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加 ，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。 12.滅菌：采取的滅菌方法是 。 13．發(fā)酵操作 13.1前期準(zhǔn)備：用 消毒工作臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈。注意所有接種工作都必須在酒精燈旁進(jìn)行，器械使用前后都要用火焰灼燒 。 13.2接種操作：接種過(guò)程中插入外植體時(shí) 朝上，每個(gè)錐形瓶接種 個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似之處是 。 13.3培養(yǎng)過(guò)程應(yīng)該放在 中進(jìn)行，并定

45、期進(jìn)行消毒，保持適宜的 和 。 13.4移栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的 ，讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到 等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。 課題成果評(píng)價(jià) （一）對(duì)接種操作中污染情況的分析 接種3～4 d后，在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率，分析接種操作是否符合無(wú)菌要求。 （二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化 觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織，記錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)更換培養(yǎng)基

46、后愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。 （三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄 做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照，填好結(jié)果記錄表，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開始就要求學(xué)生做好實(shí)驗(yàn)記錄，可以讓學(xué)生分組配制不同培養(yǎng)基，如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基，然后做不同配方的比較。 （四）生根苗的移栽是否合格 生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基，又不能傷及根系。一般使用無(wú)土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒，可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀，并用塑料薄膜覆蓋12 h。掀開塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過(guò)渡幾天，等壯苗后再定植大田或進(jìn)行盆栽。學(xué)生可以在課后統(tǒng)計(jì)自己移栽的

47、成活率，看看移栽是否合格。 答案和提示 （一）旁欄思考題 1.你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。 2.你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？ 答：教師可以安排學(xué)生分組，做不同的材料或配方，最后分

48、別匯報(bào)成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒(méi)有被雜菌污染。 （二）練習(xí) 1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。 2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。 課題2 月季的花藥培養(yǎng) 1. 小孢子母細(xì)胞（2n）

49、（ ）時(shí)期（n） 單核（ ）期（n） 雙核期 （ ）細(xì)胞核（n） （ ）細(xì)胞核（n） （ ）細(xì)胞（n） （ ）細(xì)胞（n） （ ）個(gè)精子(n) （ ）分裂 （ ）分裂 單核（ ）期（n） （ ）分裂 2. 育被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 、 和 等階段。花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò) 而形成的，因此花粉是 。 3. 在正常情況下，一個(gè)小孢子母細(xì)胞可以產(chǎn)生 個(gè)精子；在一枚花藥中

50、可以產(chǎn)生 個(gè)花粉。 4. 產(chǎn)生花粉植物的兩種途徑 花藥中的花粉 花藥中的花粉 叢芽 叢芽 誘導(dǎo) 生根 移栽 脫分化 脫分化 （ ） （ ） ① ② 5. 誘導(dǎo)花粉植株能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種因素影響，其中影主要因素是： 和 等。 6. 材料的選擇： ①?gòu)幕ㄋ巵?lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（初花期、盛花期

51、、晚花期）的花藥； ②從花粉來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（四分體期、單核期、雙核期、萌發(fā)期）的花粉； ③從花蕾來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（完全未開放、略微開放、完全盛開）的花蕾。 7. 選擇花藥時(shí)一般通過(guò) 確定花粉發(fā)育時(shí)期，此時(shí)需要對(duì)花粉細(xì)胞核進(jìn)行染色，最常用的染色劑是 和 ，它們分別可以將細(xì)胞核染成 色和 色。 8. 在使用焙花青－鉻釩溶液時(shí)，需要首先將花藥用 處理20min。該試劑的配制方法是將 按體積比為 的比例混合均勻。 9. 消毒后的花蕾，要在

52、條件下除去花萼、花瓣。剝?nèi)』ㄋ帟r(shí)，一是注意不要損傷花藥，原因是 ；二是要徹底除去花絲，原因是 。 10. 剝?nèi)〉幕ㄋ幰⒖探臃N到 上。每個(gè)培養(yǎng)瓶接種 個(gè)花藥?；ㄋ幣囵B(yǎng)利用的培養(yǎng)基是 培養(yǎng)基，pH為 ，溫度為 ℃，幼苗形成之前（需要、不需要）光照。在花藥培養(yǎng)基中，用量最高的激素是 ；在誘導(dǎo)叢芽或胚狀體培養(yǎng)基中，用量最高的激素是 ；在誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基中，用量最高的激素是

53、 。 11. 培養(yǎng)20－30d后，花藥開裂，長(zhǎng)出 或釋放出胚狀體。前者還要轉(zhuǎn)移到 上進(jìn)行分化培養(yǎng)成再生植株；后者要盡快 并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。通過(guò)愈傷組織形成的植株，常常會(huì)出現(xiàn) 的變化，因而需要鑒定和篩選。 課題成果評(píng)價(jià) （一）選材是否恰當(dāng) 選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。學(xué)生應(yīng)學(xué)會(huì)通過(guò)顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。 （二）無(wú)菌技術(shù)是否過(guò)關(guān) 如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說(shuō)明某些操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問(wèn)題。 （三）接種是否成功 如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)

54、的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。 答案和提示 （一）旁欄思考題 為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？ 答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。 （二）練習(xí) 1.答：F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu）進(jìn)行測(cè)交，可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時(shí)也較長(zhǎng)，需要至少三年的選種和育種時(shí)間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術(shù)，在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合，再將花粉植株進(jìn)行染色體加倍，就可以直

55、接得到紫色甜玉米的純合體（AAsusu）。這種方法可以大大縮短育種周期。 2.答：植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。 原理：細(xì)胞的全能性 概念： 基礎(chǔ)： 條件： 植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程： 外植體 愈傷組織 胚狀體 幼苗 脫分化 再分化 影響植物組織培養(yǎng)的因素： 外植體的選擇 營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等 植

56、物激素的用法 溫度、pH、光照等 實(shí)驗(yàn)操作： 制備MS培養(yǎng)基 外植體消毒 培養(yǎng) 接種 移栽 栽培 植物組織培養(yǎng) 菊花的組織培養(yǎng) 月季的花藥培養(yǎng) 被子植物花粉的發(fā)育： 花粉母細(xì)胞→減數(shù)分裂→小孢子母細(xì)胞→四分體時(shí)期→單核期→雙核期→精子 產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑： 花藥中的花粉 花藥中的花粉 胚狀體 叢芽 叢芽 愈傷組織 誘導(dǎo) 生根 移栽 脫分化 脫分化 分化 再分化 影響花藥培養(yǎng)的因素： 主要因素：材料的選擇與培養(yǎng)基的組成 重要因素：選擇

57、合適的花粉發(fā)育時(shí)期 影響因素：親本植株的生長(zhǎng)條件、低溫處理和接種密度等 實(shí)驗(yàn)操作： 材料的消毒： 材料的選?。捍_定花粉發(fā)育時(shí)期的方法 接種和培養(yǎng)： 鑒定和篩選： 專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) （一）DNA的粗提取與鑒定 1. 實(shí)驗(yàn)原理 提取生物大分子的基本思路是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。對(duì)于DNA的粗提取而言，就是要利用＿＿＿＿與＿＿＿＿、＿＿＿＿＿等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。 （1）

58、DNA的溶解性 ①DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的＿＿＿＿＿溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使＿＿＿＿充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。 ②DNA不溶于＿＿＿＿＿＿溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步的分離。 （2）DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性 蛋白酶能水解＿＿＿＿＿，但是對(duì)＿＿＿＿＿沒(méi)有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60—80oC的高溫，而DNA在＿＿＿＿＿＿才會(huì)變性。洗滌劑能夠瓦解＿＿＿＿，但對(duì)DNA沒(méi)有影響。 （3）DNA的鑒定 在＿＿＿＿條件下，DNA遇＿＿＿會(huì)被染成＿＿色，因此二苯胺可以作

59、為鑒定DNA的試劑。 2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) （1）實(shí)驗(yàn)材料的選取 凡是含有＿＿＿＿的生物材料都可以考慮，但是使用＿＿＿＿＿＿＿＿的生物組織，成功的可能性更大。 （2）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液 破碎動(dòng)物細(xì)胞：如在雞血細(xì)胞液中加入一定量的＿＿＿＿，同時(shí)用＿＿＿＿＿攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。破碎植物細(xì)胞（如洋蔥），需在切碎的洋蔥中加入一定的＿＿＿和＿＿＿＿＿，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液。 ①加入蒸餾水作用：蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種＿＿＿＿液體，使血細(xì)胞＿＿＿＿＿，再加上攪拌的機(jī)械作用，加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。 ②加入洗滌劑的作用是：洗

60、滌劑是一些離子去污劑，能溶解＿＿＿＿＿，有利于＿＿＿＿的釋放；加入食鹽的作用是：溶解＿＿＿＿＿。 ③如果研磨不充分，會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的＿＿＿＿＿釋放不完全，提取的DNA量變＿＿＿＿＿，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、用二苯胺鑒定不顯示＿＿＿＿等。 （3）去除濾液中的雜質(zhì) ①方案一：利用DNA在不同濃度NaCl溶液中＿＿＿＿不同，通過(guò)控制＿＿＿＿＿＿＿＿去除雜質(zhì)。 ②方案二：根據(jù)酶的專一性，利用木瓜蛋白酶分解＿＿＿＿＿＿，而不分解＿＿＿＿＿＿； ③方案三：利用DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使＿＿＿＿變性，與＿＿＿分離。 （4）DNA的析出與鑒定 ①DNA的析出：將

61、處理后的溶液過(guò)濾，加入與濾液體積相等、冷卻的＿＿＿＿＿＿＿＿，靜置2～3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)＿＿＿＿＿＿＿＿，這就是粗提取的DNA。 ②DNA的鑒定: 將白色絲狀物用＿＿＿＿＿的NaCl溶液再溶解，加入4ml的＿＿＿＿＿，混合均勻后，在＿＿＿＿＿＿條件下，溶液被染成＿＿＿＿色。 3.注意事項(xiàng) （1）以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，需要加入檸檬酸鈉防止＿＿＿＿＿＿＿＿ （2）要提取洋蔥等的DNA時(shí)，加入洗滌劑后，動(dòng)作要＿＿＿＿＿，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。 （3）加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要＿＿＿＿，以免＿＿＿＿＿＿＿＿＿，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。 （4）二苯胺試

62、劑要＿＿＿＿＿＿＿＿，否則會(huì)影響鑒定的效果。 （5）當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，隨濃度的升高，DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿；當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí)，隨濃度升高，DNA的溶解度＿＿＿＿＿＿＿＿。 專題六 植物有效成分的提取 課題1 植物芳香油的提取 【導(dǎo)學(xué)誘思】 1.植物芳香油的來(lái)源 天然香料的主要來(lái)源是 和 。動(dòng)物香料主要來(lái)源于麝、靈貓、海貍和抹香鯨等，植物香料的來(lái)源更為廣泛。植物芳香油可以從大約50多個(gè)科的植物中提取。例如，工業(yè)生產(chǎn)中，玫瑰花用于提取 ，樟樹樹干用于提取 。提取出的植物芳香油

63、具有很強(qiáng)的 ，其組成也 ，主要包括 及其 思考：你能說(shuō)出一些用于提取某些植物芳香油的器官嗎？并分別可提取哪種芳香油？ 2.植物芳香油的提取方法 植物芳香油的提取方法有 、 和 等。具體采用那種方法要根據(jù)植物原料的特點(diǎn)來(lái)決定。 是植物芳香油提取的常用方法，它的原理是 。根據(jù)蒸餾過(guò)程中 的位置，可以將水蒸氣蒸餾法劃分為 、 和 。其中，水中蒸餾的方法對(duì)于有些原料不適用，如柑橘和檸檬。這

64、是因?yàn)? 等問(wèn)題。因此，柑橘、檸檬芳香油的制備通常使用 法。 植物芳香油不僅 ，而且易溶于 ，如石油醚、酒精、乙醚和戊烷等。不適于用水蒸氣蒸餾的原料，可以考慮使用 法。萃取法是將 的方法。芳香油溶解于有機(jī)溶劑后，只需蒸發(fā)出有機(jī)溶劑，就可以獲得純凈的 了。但是，用于萃取的有機(jī)溶劑必須 ， ，否則會(huì)影響芳香油的質(zhì)量。 3、玫瑰精油的提取 玫瑰精油是制作 的主要成分，能使人產(chǎn)生愉悅感。由于玫瑰精油化學(xué)性質(zhì)

65、 ，難溶于 ，易溶于 ，能隨 一同蒸餾， 通常采用 法中的 法。 提取玫瑰精油的實(shí)驗(yàn)流程 、 、 、 、 、 。 思考：在提取過(guò)程中，如何對(duì)乳濁液的處理和玫瑰液的回收？ 4、橘皮精油的提取 從橘皮中提取的 ，主要成分為 ，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。橘皮精油主要儲(chǔ)藏在 部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，使用水中蒸餾法又會(huì)

66、產(chǎn)生原料焦糊的問(wèn)題，所以一般采用 法。 具體的流程是 、 、 、 、 、 、 。 實(shí)驗(yàn)案例 案例一 玫瑰精油的提取 5月上、中旬是玫瑰的盛開期，最好是選用當(dāng)天采摘的鮮玫瑰花。將花瓣用清水沖洗，去掉上面的灰塵等雜質(zhì)，瀝干水分。由于玫瑰精油化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，從玫瑰花中提取玫瑰精油可采取水中蒸餾法。本實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下。 1.稱取50 g玫瑰花瓣，放入500 mL的圓底燒瓶中，加入200 mL蒸餾水。按教科書圖6-2所示安裝蒸餾裝置。蒸餾裝置包括：鐵架臺(tái)兩個(gè)、酒精燈、石棉網(wǎng)、蒸餾瓶、橡膠塞、蒸餾頭、溫度計(jì)、直型冷凝管、接液管、錐形瓶，以及連接進(jìn)水口和出水口的橡皮管。所有儀器必須事先干燥，保證無(wú)水。整套蒸餾裝置可分為左、中、右三部分，其中左邊的部分通過(guò)加熱進(jìn)行蒸餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊的部分用來(lái)接收。安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時(shí)相反。具體安裝順序和方法如下。 （1）固定熱源──酒精燈。 （2）固定蒸餾瓶，使其離熱源的距離如