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1、 專題1 1.1 DNA重組技術的基本工具 課前預習學案 1、 簡述DNA重組技術所需的三種基本工具。 2、 預習內容 1、 基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，并通過______________和_______等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在__________水平上進行設計和施工的，因此又叫做______________。 2、 培育轉基因抗蟲棉的操作過程至少需要三種工具，即_________________的“手術刀”、_______________________的“縫合針”、將體外重組

2、好的DNA導入受體細胞的“_________”。 3、 切割DNA的工具是________________，又稱______。這類酶主要是從________中分離純化而來的。它們能夠________________________________________，并且使每一條鏈中特定部位的_________________的____________斷開。DNA分子經(jīng)過限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式——________和______。 4、 將切割下來的DNA片段拼接成新的DNA分子，是靠____________來完成的。根據(jù)酶的來源不同，可以將這些酶分為兩類：一類是從____

3、____中分離得到的，稱為EcoliDNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為_____________。這兩類酶都可以恢復被限制酶切開了的____________________________。 5、 質粒是一種裸露的、________、獨立于細菌染色體（即擬核DNA）之外，并具有_________________的_______________分子。它有一個至多個______________，供外源DNA片段插入其中。攜帶外源DNA的質粒進入受體細胞后，停留在細胞中進行________，或者整合到染色體DNA上，隨染色體DNA____________。它還有特殊的______

4、______，如抗四環(huán)素、氨芐青霉素等標記基因，供重組DNA的__________。在基因工程中所使用的運載體除質粒外，還有_________________、___________等。 課內探究學案 1、 學習目標及重難點 1、簡述DNA重組技術所需的三種基本工具。 2、認同基因工程的誕生和發(fā)展離不開理論研究和技術創(chuàng)新。 學習重點：DNA重組技術所需的三種基本工具的作用。 學習難點：基因工程載體需要具備的條件。 2、 學習過程 1、 基因工程的概念 回答：什么是基因工程？ 2、科技探索之路（基因工程是如何發(fā)展起來的？閱讀課本P2—3頁） 思考并回答： （1

5、） 基因工程是在哪些學科的基礎上發(fā)展起來的？ （2） 哪些基礎理論的突破催生了基因工程？ （3） 哪些技術發(fā)明促進了基因工程的實施？ （4） 你覺得，基因工程的誕生和發(fā)展能否離不開理論研究和技術創(chuàng)新？ 3、 限制性核酸內切酶——“分子手術刀” 思考并回答： （1） 從噬菌體侵染細菌的實驗來看，細菌等單細胞原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，那么這類原核生物之所以長期進化而不絕滅，有什么保護機制？由此可知，限制酶可以從哪些生物中分離出來？ （2）限制酶是如何切割DNA分子的？ （3） 參考課本P4圖1—2，指出限制酶能破壞那個磷酸二酯鍵。 （4）

6、以EcoRI為例，畫出限制酶切割后形成的末端。 4、 DNA連接酶——“分子縫合針” 思考并回答： （1）DNA連接酶是怎么分類的？ （2） DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事兒嗎？有哪些區(qū)別？ （3）EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶作用效果一樣大嗎？為什么？ 5、 基因進入受體細胞的載體——“分子運輸車” 思考并回答： （1）載體的作用是什么？為什么需要載體？把單獨的DNA片段導入受體細胞不行嗎？ （2）我們選用從霍亂弧菌中分離出來的質粒做載體，可以嗎？為什么？ （3）我們能不能用

7、肉眼直接觀察到載體進入受體細胞？那如何鑒定呢？ （4）如果載體上沒有限制酶切割位點，能否把目的基因運輸進入受體細胞？ 6、 活動：模擬操作重組DNA分子 （分組進行；完成后小組之間進行交流） 3、 反思總結 工具名稱 種類 作用 限制酶 DNA連接酶 載體 4、 當堂檢測 1、下圖是基因工程主要技術環(huán)節(jié)的一個基本步驟，這一步需用到的工具是 （ ） A．DNA連接酶和解旋酶 B．DNA聚合酶和限制性核酸內切酶 C．限制性核酸內切

8、酶和DNA連接酶 D．DNA聚合酶和RNA聚合酶 2、依右圖有關基因工程的工具酶功能的敘述，不正確的是 （ ） A.切斷a處的酶為限制性核酸內切酶 B.連接a處的酶為DNA連接酶 C.切斷b處的酶為解旋酶 D.切斷b處的酶為限制性核酸內切酶 3、以下說法正確的是 （ ） 　 A．所有的限制酶只能識別同一種特定的核苷酸序列 　 B

9、．質粒是基因工程中惟一的載體 　 C．載體必備的條件之一是：具有一個或多個限制酶切點，以便與外源基因連接 　 D．基因治療主要是對有缺陷的細胞進行修復 4、不屬于質粒被選為基因運載體的理由是 （ ） 　 A．能復制 　　　　 B．有多個限制酶切點 　 C．具有標記基因 　 D．它是環(huán)狀DNA 5、科學家選用的細菌質粒往往帶有一個抗菌素抗性基因，該抗性基因的主要作用是

10、 （ ） A．提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐熱性 B．有利于檢測目的基因否導入受體細胞 C．增加質粒分子的相對分子質量 D．便于與外源基因連接 課后練習與提高 1、限制酶是一種核酸切割酶，可辨識并切割DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨識序列。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來的DNA片段末端可以互補黏合？其正確的末端互補序列為何？

11、 （ ） A. BamHI和EcoRI；末端互補序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互補序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互補序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互補序列—GATC— 2、在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個脫氧核苷酸對，其中腺嘌呤脫氧核苷酸460 個），放入DNA擴增儀中擴增4代，那么，在擴增儀中應放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個數(shù)是

12、 （ ） A．540 個 B．7560個 C．8100 個 D．17280 個 3、基因工程是DNA分子水平的操作，下列有關基因工程的敘述中，錯誤的是 ( ) A、限制酶只用于切割獲取目的基因 B、載體與目的基因必須用同一種限制酶處理 C、基因工程所用的工具酶是限制酶，DNA連接酶 D、帶有目的基因的載體是否進入受體細胞需檢測 4、下列關于DNA連接酶的敘述中，正確的是 （ ） A. DNA連接酶連接的是兩條鏈堿基對之間的氫鍵 B. DN

13、A連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和脫氧核糖 C. DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和核糖 D. 同一種DNA連接酶可以切出不同的黏性末端 5、與“限制性內切酶”作用部位完全相同的酶是： （ ） A．反轉錄酶 B．RNA聚合酶 C．DNA連接酶 D．解旋酶 6、下列有關質粒的敘述，正確的是 （ ） A．質粒是廣泛存在于細菌細胞中的一種顆粒狀細胞器 B．質粒是細菌細胞質中能自主復制的小型環(huán)狀DNA分子 C．質粒只

14、有在侵入宿主細胞后才能在宿主細胞內復制 D．細菌質粒的復制過程一定是在宿主細胞外獨立進行的 7、關于右圖DNA分子片段的說法正確的是 （ ） ① G C A T A T G C A T A T 15N 14N ② ③ … … … … … A．限制性內切酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位 B．②處的堿基缺失導致染色體結構的變異 C．把此DNA放在含15N的培養(yǎng)液中復 制2代，子代中含15N的DNA占3/4 D．該DNA的特異性表現(xiàn)在堿基種類和（A+T）/（G+C

15、）的比例上 8、下列有關基因工程的敘述，正確的是： （ ） A．DNA連接酶的作用是將兩個黏性末端的堿基連接起來 B．目的基因導入受體細胞后，受體細胞即發(fā)生基因突變 C．目的基因與運載體結合的過程發(fā)生在細胞外 D．常使用的運載體有大腸桿菌、噬菌體和動植物病毒等 9、限制酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎？以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA (2) …AC (3) GC… …G …TG CG… （4）…G (5)

16、G… (6) …GC …CTTAA ACGTC… …CG (7) GT… (8)AATTC… CA… G… 請用DNA連接酶將它們連接起來: ______和_____能連接成_________________________; ______和_____能連接成_________________________; ______和_____能連接成_________________________; ______和_____能連接成_________________________。 10、下圖是利用基因工程辦法

17、生產(chǎn)人白細胞干擾素的基本過程圖，據(jù)圖回答： （1）①過程需要___________酶的參與。 （2）②物質是從大腸桿菌分離出的_________________。其化學本質是________________，它必須能在宿主細胞中__________________________。 (3)③過程表明目的基因_____________ _________________________________。 11．通過DNA重組技術使原有基因得以改造的動物稱為轉基因動物。運用這一技術使羊奶中含有人體蛋白質，如圖表示了這一技術的基本過程，在該工程中所用的基因“剪刀”能

18、識別的序列和切點是—G↓GATCC—，請回答下列問題： (1)從羊染色體中“剪下”羊蛋白質基因的酶是________________________________________________________________________。 人體蛋白質基因“插入”后連接在羊體細胞染色體中時需要的酶是________________。 (2)請畫出質粒被切割形成黏性末端的過程圖。 (3)人體蛋白質基因之所以能“插入”到羊的染色體內，原因是_______________________________________________________________， “插

19、入”時用的工具是___________________________________________________________， 其種類有___________________________________________________________。 答案　(1)限制酶　DNA連接酶 (2) (3)基因的組成、堿基配對方式和空間結構是相同的　載體　質粒、動植物病毒、λ噬菌體的衍生物等 解析　基因工程所用的工具酶是限制酶和DNA連接酶，不同生物的基因之所以能整合在一起，是因為基因的組成、堿基配對方式和空間結構是相同的。將目的基因導入受體細胞，離不開載體的協(xié)助，基因工程中

20、用的載體除質粒外，還有動植物病毒、λ噬菌體的衍生物等。 12．基因工程中，需要使用限制酶切割目的基因和質粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。 (1)根據(jù)已知條件和圖回答下列問題： ①上述質粒用限制酶________切割，目的基因用限制酶__________切割。 ②將切下的目的基因片段插入質粒的切口處，還要加入適量的__________。 ③請指出質粒上至少要有一個標記基因的理由：____________________________________ _______________________

21、____________________________。 (2)不同生物的基因可以拼接的結構基礎是___________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)①Ⅰ?、颉、贒NA連接酶　③檢測重組質粒(或目的基因)是否導入受體細胞　(2)DNA結構基本相同(其他合理答案亦可) 解析　要形成重組質粒，質粒只能出現(xiàn)一個切口，并且至少保留一個標記基因，因序列在GeneⅡ上，因此用限制酶Ⅰ切割質粒，保留GeneⅠ標記基因；目

22、的基因必須切割兩次，切割后產(chǎn)生的黏性末端能與質粒的黏性末端互補，序列中有酶Ⅱ的切割序列，因此用酶Ⅱ，產(chǎn)生的末端互補。 走進高考 13．(2012新課標全國卷，40改編)根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題： (1)限制性核酸內切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________。 (2)質粒載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下： 為使載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內切酶切割，該酶必須具有的特點是_____________________________________ ________。 (3)

23、按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。 (4)基因工程中除質粒外，____________和________也可作為載體。 (5)若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(

24、1)黏性末端　平末端　(2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同　(3)Ecoli　T4　(4)λ噬菌體的衍生物　動植物病毒　(5)未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱 【課前預習學案參考答案】1、體外DNA重組 轉基因 DNA分子 DNA重組技術 2、準確切割DNA 將DNA片段再連接起來 運輸工具 3、限制性核酸內切酶 限制酶 原核生物 識別雙鏈DNA分子的某些特定核苷酸序列 兩個核苷酸之間 磷酸二酯鍵 黏性末端 平末端 4、DNA連接酶 大腸桿菌 T4DNA連接酶 兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵 5、結構簡單 自我

25、復制能力 雙鏈環(huán)狀DNA 限制酶切割位點 自我復制 進行同步復制 遺傳標記基因 鑒定和選擇 λ噬菌體的衍生物 動植物病毒 【當堂檢測參考答案】 1C 2D 3C 4D 5B 【參考答案】1D 2C 3A 4B 5C 6B 7A 8C 9 、2和7能連接形成…ACGT… 4和8能連接形成…GAATTC… …TGCA…； …CTTAAG… ； 3和6能連接形成…GCGC… 1和5能連接形成…CTGCAG… …CGCG…； …GACGTC…。 10、(1)限制性內切酶 (2)質粒　DNA　　復制并穩(wěn)定地保存 (3)在大腸桿菌內表達 4