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第18　基因工程與細(xì)胞工程 非選擇題 1.(2018陜西榆林四模,38)(9分)人白細(xì)胞介素是一種重要的免疫活性調(diào)節(jié)因子?？蒲腥藛T將人白細(xì)胞介素基因?qū)胍略寮?xì)胞的葉綠體基因組中并高效表達(dá),該技術(shù)被稱為葉綠體基因工程。請(qǐng)回答下列問題: (1)質(zhì)粒是基因工程中最常用的運(yùn)載體,質(zhì)粒作為運(yùn)載體需具備的條件是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(需答出兩點(diǎn))?；蚬こ痰牟僮鞴ぞ咧?除了運(yùn)載體外,還需要　　　　　　　。 (2)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),應(yīng)將目的基因插入　　　　　　　　之間,表達(dá)載體上標(biāo)記基因的作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)植物葉肉細(xì)胞中能使目的基因表達(dá)的細(xì)胞器除了葉綠體外還有　　　　。從基因工程與環(huán)境安全的角度分析,葉綠體基因工程的優(yōu)點(diǎn)是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 2.(2018遼寧鞍山一中四模,38)(8分)干擾素基因缺失的個(gè)體免疫力嚴(yán)重下降?？茖W(xué)家利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)干擾素基因缺失的患者進(jìn)行基因治療。請(qǐng)回答下列問題: (1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),需在　　　　　　的作用下進(jìn)行。PCR擴(kuò)增時(shí),退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度的設(shè)定與引物長度、堿基組成有關(guān),長度相同但　　　　　　的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物,則可以采取的改進(jìn)措施有　　　　(填序號(hào):①升高退火溫度?、诮档屯嘶饻囟取、壑匦略O(shè)計(jì)引物)。 (2)有人得到如圖所示的含有目的基因的表達(dá)載體,但其不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物,分析目的基因不能表達(dá)的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)對(duì)改造后的ES細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的過程中,為了防止污染,可在培養(yǎng)基中添加一定量的　　　　。 (4)干擾素的作用機(jī)理是:干擾素作用于宿主細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體,激活細(xì)胞核中基因表達(dá)產(chǎn)生多種抗病毒蛋白,其中有些蛋白可通過激活　　　　　　使病毒的RNA水解。 3.(2018江西上饒二模,38)(9分)口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種動(dòng)物傳染病,目前常用接種弱毒疫苗的方法預(yù)防。疫苗的主要成分是該病毒的一種結(jié)構(gòu)蛋白VP1?？茖W(xué)家嘗試?yán)棉D(zhuǎn)基因番茄來生產(chǎn)口蹄疫疫苗。請(qǐng)回答下列問題: (1)如圖是VP1基因、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖,若用以構(gòu)建具有VP1基因的基因表達(dá)載體,還需要在質(zhì)粒中插入　　　　。 (2)口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA,則獲得可重組到質(zhì)粒的VP1基因必須用到　　　　酶。要獲得大量該VP1基因,可利用　　　技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。 (3)通常用BamHⅠ、HindⅢ兩種限制酶切割VP1基因和Ti質(zhì)粒的目的是　　　　　　;要篩選出含有該目的基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌,首先需要在含　　　　的培養(yǎng)基上進(jìn)行。 (4)VP1基因應(yīng)插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA上,通過轉(zhuǎn)化作用進(jìn)入番茄細(xì)胞并插入到　　　　　　,使VP1基因能夠穩(wěn)定存在并發(fā)揮作用。 (5)獲得表達(dá)VP1蛋白的番茄植株以后,要進(jìn)行免疫效力的測定,具體方法是:將從轉(zhuǎn)基因番茄葉片中提取的VP1蛋白質(zhì)注射到一定數(shù)量的豚鼠體內(nèi),每半個(gè)月注射一次,三次注射后檢測豚鼠血液中產(chǎn)生的　　　　　　　數(shù)量,為了使結(jié)果可信,應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照組,注射　　　　　　。 4.(2018湖北重點(diǎn)中學(xué)聯(lián)考,38)(9分)乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白,免疫接種實(shí)驗(yàn)表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)?？蒲腥藛T用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因番茄,用于生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗,回答下列問題: (1)T1蛋白和T2蛋白進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腸道后,會(huì)被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小腸黏膜上的一種M細(xì)胞當(dāng)做　　　　處理,進(jìn)而引發(fā)一系列的免疫反應(yīng),最終產(chǎn)生相應(yīng)的　　　　　　,使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獲得了對(duì)乙肝病毒的免疫能力。 (2)用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白),所用的目的基因是　　　　　　　　,所用的運(yùn)載體是土壤農(nóng)桿菌的　　　　。 (3)可利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成　　　　。PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán),目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如圖所示,則在　　　　(填“第一次”“第二次”或“第三次”)次循環(huán)結(jié)束后,即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片段。 (4)獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株后,通過分子檢測,已確定該植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白,此后還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定,例如 　　　　　　　　　　　　　　　。 5.(2018黑龍江哈爾濱三中二模,38)(13分)草莓是無性繁殖的作物,感染的病毒很容易傳播給后代,病毒在作物體內(nèi)逐年積累,就會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)量變低,品質(zhì)變差?？梢岳眉?xì)胞工程培育脫毒草莓或利用基因工程培育抗病毒草莓?；卮鹣铝袉栴}: (1)為了獲得脫毒草莓,外植體往往取自植物分生區(qū)附近(如莖尖),其原因是　　　　　　　　　　　　　　。利用植物組織培養(yǎng),能獲得試管苗,其原理是植物細(xì)胞具有全能性,草莓細(xì)胞具有全能性的原因是　　　　　　　　　　。 (2)植物組織培養(yǎng)過程中可出現(xiàn)不同的結(jié)果,這些結(jié)果的出現(xiàn)主要與培養(yǎng)基中兩種激素有關(guān),這兩種激素是　　　　　　　　;在培養(yǎng)形成完整新植株過程中,對(duì)這兩種激素的調(diào)控關(guān)鍵是　 　　　　　　　　　　。 (3)構(gòu)建的基因表達(dá)載體除含有標(biāo)記基因外,還必須有　　　　　　　　　　　　。草莓是雙子葉植物,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞采用最多的方法是　　　　　　　　。 (4)要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因,檢測方法是　　　　　　　　。用　　　　　　　　　　　作為探針與草莓基因組DNA雜交,如果　　　　　　,就表明目的基因已插入染色體DNA中。 6.(2018河南安陽三模,38)(12分)中國科學(xué)家成功突破了克隆猴這個(gè)世界生物學(xué)前沿的難題,率先建立起可有效模擬人類疾病的動(dòng)物模型,實(shí)現(xiàn)了我國在非人靈長類研究領(lǐng)域由國際“并跑”到“領(lǐng)跑”的轉(zhuǎn)變。據(jù)此回答下列問題: (1)克隆猴的誕生,體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的　　　　具有全能性。相對(duì)于植物組織培養(yǎng)而言,動(dòng)物尤其是高等動(dòng)物的克隆比較困難的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　?？寺∵^程中一般利用未受精的去核卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)克隆猴培養(yǎng)過程中需要用　　　　酶處理使細(xì)胞從瓶壁上分離下來。為了提高動(dòng)物細(xì)胞克隆形成率,可以選擇適宜的培養(yǎng)基、添加　　　　　等天然成分,以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長。培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度,CO2的作用是　　　　　　　　?？寺『锍擞玫絼?dòng)物細(xì)胞工程的相關(guān)生物技術(shù)手段外,還必須用到　　　　　　　　　　　　　　　(答出兩種技術(shù))。 7.(2018遼寧大連二模,38)(10分)某大學(xué)科研人員用小鼠ES細(xì)胞(即胚胎干細(xì)胞)免疫兔,獲得大量分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,從而建立了胚胎干細(xì)胞的抗體庫。此類單克隆抗體能夠識(shí)別ES細(xì)胞的特異性分子標(biāo)志,該標(biāo)志對(duì)胚胎干細(xì)胞的鑒定、分離以及自我更新和分化機(jī)制的研究有著十分重要的意義。請(qǐng)依據(jù)相關(guān)知識(shí)回答下列問題: (1)制備單克隆抗體所用到的生物技術(shù)手段主要有　　　　　　　和　　　　　　。制備此單克隆抗體之前,必須對(duì)兔注射　　　　　　　　　,使兔產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 (2)從兔的脾臟中提取的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,可形成多種融合細(xì)胞,此時(shí)需要用特定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,在該培養(yǎng)基上　　　　　　　　　　　　　　的細(xì)胞不能生存。 (3)上述篩選過程中獲得的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和　　　　檢測,經(jīng)多次篩選,就可獲得能分泌所需抗體的細(xì)胞,該細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)應(yīng)在含有　　　　　　　　　　的混合氣體的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行,最終獲得大量的單克隆抗體。該抗體與傳統(tǒng)方法制備的抗體相比,最主要的優(yōu)點(diǎn)是　　　　　　　　　　　　　　。 (4)通過ES細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化,還可以培育出人造組織器官,解決器官移植時(shí)存在的　　　　　　　　　　的問題。 8.(2018河北衡水中學(xué)七調(diào),38)(10分)科學(xué)家利用細(xì)胞融合技術(shù)研究細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特性,進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。 (1)將鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在　　　　培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,用　　　　　處理,獲取實(shí)驗(yàn)用的單細(xì)胞懸液。 (2)將兩種細(xì)胞在37 ℃下混合培養(yǎng),在培養(yǎng)液中加入　　　　　　　誘導(dǎo)融合,形成融合細(xì)胞,一般兩兩融合的細(xì)胞有　　　　種。 (3)細(xì)胞膜的主要成分是磷脂和蛋白質(zhì)。將連接了熒光染料的抗體與融合細(xì)胞在一定條件下培養(yǎng),抗體與融合細(xì)胞的膜蛋白(抗原)特異性結(jié)合,其目的是標(biāo)記膜蛋白,以便于顯微鏡觀察。用熒光顯微鏡觀察融合細(xì)胞表面熒光的顏色和　　　　,開始時(shí),鼠的細(xì)胞為綠色,人的細(xì)胞為紅色,兩種顏色不混合;一段時(shí)間后,可觀察到紅綠熒光交替分布的“嵌合體”。統(tǒng)計(jì)　　　　　　,結(jié)果如下圖所示。 (4)科學(xué)家據(jù)此提出兩種假說解釋嵌合體的形成。 假說一:融合細(xì)胞合成了新的膜蛋白; 假說二:原有膜蛋白在細(xì)胞膜平面上運(yùn)動(dòng)。 ①使用　　　　　　　抑制劑和ATP合成抑制劑分別處理融合細(xì)胞,均對(duì)嵌合體形成沒有顯著影響,這個(gè)結(jié)果否定了假說一。 ②在15 ℃、20 ℃和26 ℃的培養(yǎng)溫度下重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　,為假說二提供了證據(jù)支持。 答案全解全析 非選擇題 1.答案　(1)具有一個(gè)或多個(gè)限制性酶切位點(diǎn);具有標(biāo)記基因;能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制并保存　限制酶和DNA連接酶　(2)啟動(dòng)子和終止子　鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因,從而將含目的基因的細(xì)胞篩選出來　(3)線粒體　可防止目的基因通過花粉擴(kuò)散到環(huán)境中(或可防止基因污染環(huán)境) 解析　(1)質(zhì)粒作為運(yùn)載體必須具有一個(gè)或多個(gè)限制性酶切位點(diǎn),具有標(biāo)記基因,能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制并保存等?；蚬こ坛Ｓ玫墓ぞ哂羞\(yùn)載體、限制酶和DNA連接酶等。(2)目的基因必須插入質(zhì)粒上的啟動(dòng)子與終止子之間才能表達(dá);基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因可以用來鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因,從而篩選含目的基因的細(xì)胞。(3)葉綠體和線粒體中都含有少量的DNA和核糖體,可以進(jìn)行基因的表達(dá),因此將目的基因?qū)雰烧叨伎梢员磉_(dá)出相關(guān)蛋白質(zhì)。植物受粉時(shí),葉綠體基因不會(huì)隨著花粉進(jìn)入受精卵,因此葉綠體基因工程可防止目的基因通過花粉擴(kuò)散到環(huán)境中。 2.答案　(1)Taq酶(或熱穩(wěn)定DNA聚合酶)　GC含量高　②③　(2)目的基因插入在終止子的下游,目的基因不能被轉(zhuǎn)錄　(3)抗生素　(4)RNA(水解)酶 解析　(1)PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),需在耐高溫Taq DNA聚合酶的作用下進(jìn)行;退火溫度與時(shí)間,取決于引物的長度、堿基組成及其濃度,還有堿基序列的長度,如果引物中GC含量高,需要設(shè)定更高的退火溫度;PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備,②引物的質(zhì)量與特異性,③酶的質(zhì)量,④PCR循環(huán)條件。如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物,則可以采取的改進(jìn)措施有降低退火溫度、重新設(shè)計(jì)引物等。(2)構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí),目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子和終止子之間,以利于目的基因的轉(zhuǎn)錄。(3)ES細(xì)胞的培養(yǎng)基中除了所需要營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)添加一定的抗生素,防止雜菌污染。(4)酶有專一性,催化病毒RNA水解的酶是RNA水解酶。 3.答案　(1)啟動(dòng)子　(2)逆轉(zhuǎn)錄　PCR　(3)防止VP1基因、Ti質(zhì)粒的自身環(huán)化　卡那霉素　(4)染色體DNA　(5)VP1蛋白的抗體 等量生理鹽水 解析　(1)構(gòu)建具有VP1基因的基因表達(dá)載體還需要在質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子,啟動(dòng)子是RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn),能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程。(2)口蹄疫病毒的遺傳物質(zhì)為RNA,可以以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄獲得VP1基因;PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因。(3)用限制酶BamHⅠ、HindⅢ切割出的末端完全不同,這樣可以防止目的基因、運(yùn)載體自身環(huán)化,也能防止目的基因和運(yùn)載體反向連接,即可以保證目的基因和質(zhì)粒的定向連接;由圖可知,標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因,因此要篩選出含有該目的基因表達(dá)載體的番茄細(xì)胞,首先需要在含卡那霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行。(4)VP1基因應(yīng)插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA上,通過轉(zhuǎn)化作用進(jìn)入番茄細(xì)胞并插入到染色體DNA,使VP1基因能夠穩(wěn)定維持并發(fā)揮作用。(5)獲得表達(dá)VP1蛋白的番茄植株以后,要進(jìn)行免疫效力的測定,具體方法是:將從轉(zhuǎn)基因番茄葉片中提取的VP1蛋白質(zhì)注射到一定數(shù)量的豚鼠體內(nèi),每半個(gè)月注射一次,三次注射后檢測豚鼠血液中產(chǎn)生的VP1蛋白的抗體數(shù)量。為了使結(jié)果可信,應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照組,注射等量生理鹽水。 4.答案　(1)抗原　記憶細(xì)胞(抗體和記憶細(xì)胞)　(2)T1蛋白基因　Ti質(zhì)?！?3)引物　第三次　(4)用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種實(shí)驗(yàn) 解析　(1)T1蛋白和T2蛋白是乙肝病毒表面的蛋白質(zhì),進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腸道后,會(huì)被當(dāng)做抗原處理,進(jìn)而引發(fā)一系列的免疫反應(yīng),最終產(chǎn)生相應(yīng)的記憶細(xì)胞和抗體。(2)用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白),目的基因的產(chǎn)物是T1蛋白,因此所用的目的基因是T1蛋白基因。根據(jù)題干中“用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因番茄”可知:所用的運(yùn)載體是土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒。(3)PCR技術(shù)擴(kuò)增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。 由圖可知:X基因第一次復(fù)制得到兩個(gè)、兩種DNA片段:①和②;X基因第二次復(fù)制得到四個(gè)、四種DNA片段:①復(fù)制得①和③、②復(fù)制得②和④;X基因第三次復(fù)制得到八個(gè)、五種DNA片段:①復(fù)制得①和③、③復(fù)制得③和⑤、②復(fù)制得②和④、④復(fù)制得④和⑤。結(jié)合以上分析:在第三次循環(huán)結(jié)束后,即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片段。(4)獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株后,通過分子檢測,已確定該植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白。根據(jù)題干“乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白,免疫接種實(shí)驗(yàn)表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)”,因此在個(gè)體生物學(xué)水平上,用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種實(shí)驗(yàn)來鑒定。 5.答案　(1)分生區(qū)附近的病毒極少,甚至無病毒　具有草莓的全部遺傳信息　(2)生長素和細(xì)胞分裂素　恰當(dāng)調(diào)控好不同培養(yǎng)期培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的濃度和比例　(3)啟動(dòng)子、終止子、目的基因　農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法　(4)DNA分子雜交技術(shù)　放射性同位素標(biāo)記的目的基因　顯示出雜交帶 解析　(1)植物分生區(qū)細(xì)胞分裂旺盛,附近的病毒極少,甚至無病毒。為了獲得脫毒草莓,外植體往往取自植物分生區(qū)附近。草莓分生區(qū)附近細(xì)胞具有草莓全部遺傳信息,故其具有全能性。(2)植物組織培養(yǎng)過程中,當(dāng)生長素和細(xì)胞分裂素用量的比值低時(shí),有利于芽的分化、抑制根的形成;當(dāng)該比值高時(shí),有利于根的分化、抑制芽的形成;當(dāng)比例適中時(shí)促進(jìn)愈傷組織的形成?？梢?在培養(yǎng)形成完整新植株過程中,對(duì)這兩種激素的調(diào)控關(guān)鍵是調(diào)控好不同培養(yǎng)期培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的濃度和比例。(3)構(gòu)建的基因表達(dá)載體除了含有標(biāo)記基因外,還必須有啟動(dòng)子、終止子、目的基因。草莓是雙子葉植物,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(4) 要檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因,可采用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測。用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作為探針與草莓基因組DNA雜交,如果顯示出雜交帶,就表明目的基因已插入染色體DNA中。 6.答案　(1)細(xì)胞核　細(xì)胞難以脫分化,體細(xì)胞核內(nèi)雖然有全套基因,但大部分基因在分化后就不再表達(dá),很難被激活　卵細(xì)胞體積大,易操作,營養(yǎng)豐富,未受精的卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有激活體細(xì)胞的細(xì)胞核全能性的物質(zhì)(或未受精的卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)易激發(fā)體細(xì)胞的細(xì)胞核全能性表達(dá))　(2)胰蛋白(或膠原蛋白)　動(dòng)物血清　維持培養(yǎng)液的pH　早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植技術(shù) 解析　(1)克隆猴的誕生,體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。由于動(dòng)物細(xì)胞難以脫分化,體細(xì)胞核內(nèi)雖然有全套基因,但大部分基因在分化后就不再表達(dá),很難被激活,因此動(dòng)物尤其是高等動(dòng)物的克隆比較困難。卵細(xì)胞體積大,易操作,營養(yǎng)豐富,未受精的卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有激活體細(xì)胞的細(xì)胞核全能性的物質(zhì),所以克隆過程中一般利用未受精的去核卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中需要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞從瓶壁上分離下來。培養(yǎng)過程中需添加動(dòng)物血清等。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中添加CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH?？寺『锍擞玫絼?dòng)物細(xì)胞工程的相關(guān)生物技術(shù)手段外,還必須用到胚胎工程中的早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)。 7.答案　(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)　動(dòng)物細(xì)胞融合　小鼠胚胎干細(xì)胞(或“小鼠ES細(xì)胞”)　(2)未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核 (3)(專一)抗體　5%CO2和95%的空氣　特異性強(qiáng)、靈敏度高,并能大量制備　(4)供體器官不足和免疫排斥 解析　(1)單克隆抗體的制備過程涉及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。在制備此單克隆抗體之前,必須對(duì)兔注射抗原(小鼠胚胎干細(xì)胞),以刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。(2)在促進(jìn)細(xì)胞融合的培養(yǎng)基中存在多種細(xì)胞,因此需要使用特定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,淘汰掉未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的融合細(xì)胞,篩選到雜交瘤細(xì)胞。(3)篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞還需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和陽性檢測(或?qū)Ｒ豢贵w檢測),進(jìn)而篩選出可以分泌出特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞;雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)需要特殊的氣體環(huán)境,即需要在5%CO2和95%的空氣的混合氣體的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高,并且能大量制備等優(yōu)點(diǎn)。(4)通過ES細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化形成的組織器官,可以解決器官移植時(shí)存在的供體器官不足和免疫排斥的問題。 8.答案　(1)CO2　胰蛋白酶　(2)滅活的病毒(或PEG)　3 (3)分布　嵌合體比例　(4)蛋白質(zhì)合成　隨著溫度增加,嵌合體比例增加(或隨著溫度降低,嵌合體比例降低) 解析　(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要一定的氣體環(huán)境,因此需要放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng);由于胰蛋白酶能水解細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì),因此常用胰蛋白酶處理動(dòng)物組織,使組織細(xì)胞分散開,進(jìn)而制成細(xì)胞懸液。(2)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合常用滅活的病毒(或PEG);合成后的融合細(xì)胞一般有3種。(3)細(xì)胞膜主要由磷脂和蛋白質(zhì)組成;抗體與熒光染料結(jié)合后抗體被標(biāo)記,當(dāng)抗體與融合細(xì)胞的膜蛋白(抗原)特異性結(jié)合時(shí),膜蛋白就被標(biāo)記;用熒光顯微鏡觀察融合細(xì)胞表面熒光的顏色和分布,并觀察和統(tǒng)計(jì)嵌合體比例。(4)①假如嵌合體形成是融合細(xì)胞合成了新的膜蛋白,用蛋白質(zhì)合成抑制劑和ATP合成抑制劑分別處理融合細(xì)胞,嵌合體形成會(huì)受影響。②實(shí)驗(yàn)結(jié)果為假設(shè)二提供支持可知,隨著溫度增加,嵌合體比例增加(或“隨著溫度降低,嵌合體比例降低”)。