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1、 階段質(zhì)量檢測(五)　DNA和蛋白質(zhì)技術 (B卷　能力素養(yǎng)提升) (滿分：100分　時間：40分鐘) 一、選擇題(每小題4分，共48分) 1．蛋白酶能將蛋白質(zhì)水解而使染色質(zhì)中的DNA分離出來，下列藥品可達到上述同一目的的是(　　) A．蒸餾水　　　　　　 B．NaCl溶液 C．NaOH溶液 D．鹽酸 解析：選B　染色質(zhì)中的主要成分是DNA和蛋白質(zhì)，可以利用蛋白酶水解雜質(zhì)蛋白質(zhì)，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開。DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度最高，而蛋白質(zhì)則不能溶解在2 mol/L NaCl溶液中，通過過濾除去不能溶解的雜質(zhì)蛋白。由此可看出兩種方法雖然原理不同，但

2、目的是一樣的。 2．下列關于蛋白質(zhì)性質(zhì)的敘述中，不會影響到蛋白質(zhì)在凝膠電泳中運動速度的是(　　) A．蛋白質(zhì)分子的大小 B．蛋白質(zhì)分子的密度 C．蛋白質(zhì)分子的形狀 D．蛋白質(zhì)分子所帶電荷量 解析：選B　電泳是利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 3．下列有關PCR的描述錯誤的是(　　) A．是一種酶促反應 B．引物決定了擴增的特異性 C．PCR反應中的目的片段一般以2n的方式積累(假設擴增效率為100%) D．擴增對象是氨基酸序列 解析：選D　PCR是一種體外迅速擴增DNA片

3、段的技術，它以極少量的DNA為模板，以四種脫氧核苷酸為原料，在引物作用下使DNA聚合酶從引物的3′端連接脫氧核苷酸，短時間內(nèi)迅速復制上百萬份的DNA拷貝。 4．下列關于血紅蛋白的提取和分離操作的敘述，錯誤的是(　　) A．色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡，必須重裝 B．凝膠用自來水充分溶脹后，配成凝膠懸浮液 C．為加快凝膠膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，通常只需1～2 h D．在血紅蛋白提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理，是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結構和功能 解析：選B　由于裝填凝膠柱時用到的是商品凝膠，為干燥的顆粒，使用前需要用蒸

4、餾水充分溶脹后，配成凝膠懸浮液，再用洗脫液進行充分洗滌平衡，使凝膠裝填緊密，也可在沸水浴中加熱膨脹，既可節(jié)約時間，也可除去凝膠中的微生物，排出膠粒內(nèi)的空氣。 5．DNA具有半保留復制的特性，但是在DNA分子復制的過程中需要一些引物，其主要原因是(　　) A．可加快DNA的復制速度 B．引物可與DNA母鏈通過堿基互補配對結合 C．引物的5′端有助于DNA聚合酶延伸DNA鏈 D．DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈 解析：選D　DNA的兩條鏈是反向平行的，DNA聚合酶不能從5′端開始合成DNA，而只能從3′端延伸DNA鏈，因此，DNA的復制需要引物。當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結

5、合后，DNA聚合酶就能從引物的3′端開始延伸DNA鏈，故DNA的合成方向總是從子鏈的5′端向3′端延伸。 6．在蛋白質(zhì)和DNA的混合液中，要想得到較純的DNA，可采用的方法有(　　) ①向混合液中加入足量的蒸餾水?、谙蚧旌弦褐屑尤隓NA水解酶?、巯蚧旌弦褐屑尤肜涞?5%的酒精?、芟蚧旌弦褐屑尤氲鞍酌? A．①② B．③④ C．①③ D．②④ 解析：選B　DNA分子在冷的酒精中可析出，據(jù)此可將DNA和蛋白質(zhì)分離；而蛋白酶則能將蛋白質(zhì)水解成可溶性的多肽，從而將蛋白質(zhì)與DNA分離。 7．PCR技術是在遺傳實驗室中常見的一種DNA片段進行體外擴增的方法，利用它能快速得到大量的目的基因或DN

6、A分子片段。在PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水使用前必須進行的關鍵步驟是(　　) A．反復洗滌 B．不被外源DNA污染 C．高壓滅菌 D．在－20 ℃保存 解析：選C　通過對PCR實驗中所用儀器和試劑進行高壓滅菌，可以避免外源DNA等因素的污染。 8．某同學用洋蔥進行DNA粗提取和鑒定實驗，操作錯誤的是 (　　) A．加入洗滌劑后用力進行快速、充分的研磨 B．用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNA C．加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌 D．加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱 解析：選A　加入洗滌劑后研磨動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生許多泡沫，不利于后續(xù)

7、步驟的操作，A項錯誤；蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)，因此能起到純化DNA的目的，B項正確；加入酒精后用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免引起DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀，C項正確；DNA可與二苯胺試劑在沸水浴條件下呈藍色，D項正確。 9．將經(jīng)處理破裂后的紅細胞混合液以2 000 r/min的速度離心10 min后，離心管中的溶液分為4層，從上到下的順序依次是(　　) A．血紅蛋白、甲苯層、脂類物質(zhì)層、沉淀層 B．甲苯層、沉淀層、血紅蛋白、脂類物質(zhì)層 C．脂類物質(zhì)層、血紅蛋白、甲苯層、沉淀層 D．甲苯層、脂類物質(zhì)層、血紅蛋白、沉淀層 解析：選D　混合液經(jīng)離心后，按密度大小排列

8、，在離心管中從上到下的順序依次是：第1層為無色透明的甲苯層；第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)沉淀層；第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液；第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物，主要是紅細胞破碎物沉淀。 10．PCR又稱多聚酶鏈式反應，現(xiàn)在已成為分子生物學實驗室的一種常規(guī)手段，它可以在體外很短的時間內(nèi)將DNA大量擴增。你認為下列符合在體外進行PCR反應條件的一組是(　　) ①穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境　②DNA模板?、酆铣梢铩、芩姆N脫氧核苷酸?、軩NA聚合酶 ⑥D(zhuǎn)NA解旋酶　⑦限制性核酸內(nèi)切酶?、鄿乜卦O備 A．①②③④⑤⑥ B．①②③④⑤⑥⑦⑧ C．③④⑤⑥⑧ D．①②③④⑤⑧

9、解析：選D　體外DNA擴增(PCR技術)是模擬生物細胞內(nèi)DNA復制的條件，只是無需解旋酶(可熱變性)，也不需要基因工程的工具酶(限制性核酸內(nèi)切酶)，但需要耐高溫的DNA聚合酶。 11．某考古學家在西伯利亞泰加林地區(qū)的冰中發(fā)現(xiàn)了一種冰凍的已滅絕的巨型動物的肌肉。他想了解該巨型動物的DNA與現(xiàn)今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下檢測工作，其中正確的操作步驟及順序是(　　) ①降低溫度，檢測處理后的雜合DNA雙鏈 ②通過PCR技術擴增巨型動物和大象的DNA ③把巨型動物的DNA導入大象的細胞中 ④在一定溫度條件下，將巨型動物和大象的DNA水浴共熱 A．②④① B．②④③①　C．③④①

10、　D．②④③ 解析：選A　PCR技術是分子生物學發(fā)展史上的一個里程碑，它大大簡化了基因克隆的步驟，已廣泛應用于生物學研究的各個領域。PCR反應通過變性、復性、延伸三個循環(huán)步驟，使目標DNA片段呈指數(shù)擴增。因此，PCR系統(tǒng)是一個極其靈敏的信號放大系統(tǒng)，能將極微弱甚至是單拷貝的基因信號檢測出來。通過PCR技術擴增巨型動物和大象的DNA，然后利用DNA分子在高溫時解螺旋的特點，將巨型動物和大象的DNA水浴共熱，再降低溫度，檢測處理后的雜合DNA雙鏈。 12．PCR技術是一項在生物體外復制特定的DNA片段的核酸合成技術，如圖表示合成過程。下列說法錯誤的是(　　) A．甲過程高溫使DNA變性解

11、旋，該過程不需要解旋酶的作用 B．丙過程用到的酶在高溫下失活，因此在PCR擴增時需要再添加 C．如果把模板DNA的兩條鏈用15N標記，游離的脫氧核苷酸不做標記，控制“94 ℃～55 ℃～72 ℃”溫度循環(huán)3次，則在形成的子代DNA中含有15N標記的DNA占25% D．PCR中由堿基錯配引起的變異屬于基因突變 解析：選B　丙過程用到的酶是Taq DNA聚合酶，其特點是耐高溫。 二、非選擇題(共52分) 13．(20分)CTAB法是一種從高等真核生物細胞中制備基因組DNA(總DNA)的技術。CTAB能跟核酸形成復合物，在高鹽溶液(＞0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且穩(wěn)定存在，

12、當降低溶液中鹽的濃度(＜0.3 mol/L的NaCl溶液)時，CTAB－核酸的復合物就會因溶解度降低而沉淀，再用70%酒精浸泡可洗脫掉CTAB；氯仿能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性而沉淀。提取和檢測水稻基因組DNA的操作步驟如下： ①在50 mL離心管中加入20 mL的CTAB抽提緩沖液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB)，于65 ℃水浴中預熱； ②將20 g新鮮的水稻幼嫩葉片剪成小段后放于研缽中，用液氮速凍并研磨成粉末，加入上述離心管中，于65 ℃水浴中保溫30 min； ③取出離心管，冷卻至室溫，加入20 mL的氯仿，輕輕混勻20 min； ④在室溫下以12 000 r/m

13、in的轉(zhuǎn)速離心10～20 min； ⑤將上清液移入另一個離心管中，加入2/3體積的經(jīng)冷卻的異丙醇，用玻璃棒輕輕攪動，小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB－核酸的復合物沉淀； ⑥將沉淀移入另一個離心管中，加入70%酒精洗滌，重復洗滌1～2次； ⑦吹干酒精后，將DNA溶于適量的TE緩沖液中，在0.8%的瓊脂糖凝膠上電泳分離并在核酸紫外檢測儀上觀察。 請回答下列問題： (1)植物基因組DNA(總DNA)的提取通常采用機械研磨的方法。常溫下研磨時，植物細胞勻漿中含有的多種酶會對DNA的提取產(chǎn)生不利影響。用液氮速凍，材料在研磨時易破碎，同時還能___________________________

14、_______________________ ________________________________________________________________________。 (2)實驗步驟③④的目的是________________________________________________________________________。 (3)實驗步驟⑤中，玻璃棒上出現(xiàn)沉淀的主要原因是________________________________________________________________________ ______________

15、__________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)對DNA進行定性檢測常用的試劑是____________。DNA在260 nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰，利用核酸紫外檢測儀可以進行________________________________________________________________________ _____________________

16、_。 解析：低溫下酶活性降低，由題干信息可知，氯仿能使蛋白質(zhì)變性而沉淀，因此步驟③④的目的是去除溶液中的蛋白質(zhì)。當鹽濃度＜0.3 mol/L時，CTAB－核酸的復合物會沉淀。 答案：(1)降低細胞勻漿中酶的活性，避免對DNA的提取產(chǎn)生不利的影響 (2)去除溶液中的蛋白質(zhì)(使蛋白質(zhì)變性和沉淀) (3)NaCl溶液的濃度＜0.3 mol/L，CTAB－核酸的復合物因溶解度降低而沉淀 (4)二苯胺　DNA含量的測定(或檢測DNA) 14．(16分)PCR技術是把一DNA片段在體外酶的作用下，合成許許多多相同片段的一種方法，利用它能快速而特異性地擴增任何目的基因或DNA片段。它的基本過程如

17、圖所示： 注：圖中短線表示每次擴增過程中需要的引物。每個引物約含20個核苷酸，并分別與兩條單鏈DNA結合，其作用是引導合成DNA子鏈。 (1)PCR技術的原理是模擬生物體內(nèi)________的過程。 (2)PCR擴增過程中需要對DNA片段進行高溫處理，其目的是________________________________________________________________________， 此過程在生物體內(nèi)稱為________，需________酶的參與。 (3)假如引物都用3H標記，從理論上計算，所得DNA分子中含有3H標記的占________。 解析：由圖可知高

18、溫變性的過程就是DNA在高溫條件下解旋的過程，在生物體內(nèi)則需要解旋酶催化才能進行；低溫復性時兩個DNA分子都需要引物。 答案：(1)DNA復制　(2)使DNA的兩條鏈彼此分開　解旋　解旋　(3)100% 15．(16分)如圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實驗裝置，請回答下列問題： (1)血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，其在紅細胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有______功能。 (2)甲裝置中，B是血紅蛋白溶液，則A是__________；乙裝置中，C溶液的作用是_________________________________________________________

19、_______________。 (3)甲裝置用于________，目的是________________________________________________________________________。 用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫____________，是根據(jù)____________________分離蛋白質(zhì)的有效方法。 (4)用乙裝置分離血紅蛋白時，待____________________________時，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。 解析：甲裝置為透析過程，即對蛋白質(zhì)的粗分離階段，除去的是能通過透析袋的小分子物質(zhì)。乙裝置為凝膠色譜操作，可

20、以將相對分子質(zhì)量大小不同的蛋白質(zhì)分離，血紅蛋白呈紅色，具有運輸氧氣的功能。 答案：(1)運輸　(2)磷酸緩沖液　洗脫血紅蛋白　(3)透析(粗分離)　去除樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)　凝膠色譜法　相對分子質(zhì)量的大小　(4)紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端 6EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F3756EDBC3191F2351DD815FF33D4435F375