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編號(hào):
中文名稱: 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠(yuǎn)藤瓊脂培養(yǎng)基)
英文名稱:Endo Agar
用 途:
用于水中大腸菌群的分離或確證試驗(yàn)。 (GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。
原 理:
乳糖發(fā)酵的細(xì)菌產(chǎn)生乙醛,在存在堿性品紅的情況下乙醛與亞硫酸鈉結(jié)合形成紅色菌落,快速發(fā)酵乳糖的細(xì)菌產(chǎn)生金屬光澤,不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌形成無(wú)色透明的菌落。蛋白胨、酵母膏粉、牛肉膏粉提供碳氮源、維生素和礦物質(zhì);乳糖為可發(fā)酵的糖類;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;磷酸氫二鉀為緩沖劑;亞硫酸鈉能將堿性品紅還原,使其褪色,發(fā)酵乳糖的細(xì)菌產(chǎn)生乙
2、醛,與亞硫酸鈉和堿性品紅生成紅色菌落。
環(huán)凱培養(yǎng)基圖鑒:
配方(每升):
蛋白胨10g
酵母膏粉5g
牛肉膏粉5g
乳糖10g
瓊脂15g
磷酸氫二鉀3.5g
無(wú)水亞硫酸鈉5g
堿性品紅 1g
最終pH 7.20.2
使用方法:
1、 稱取本品54.5g,加入蒸餾水或去離子水1 L,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝三角瓶,115℃高壓滅菌20min,冷至50℃左右,傾注無(wú)菌平皿,備用。
2、 濾膜滅菌:將孔徑為0.45μm的濾膜放入燒杯中,加入蒸餾水或去離子水,置于沸水浴中煮沸滅菌三次,每次15min。前兩次煮沸后
3、需更換水洗滌2-3次,以除去殘留溶劑。
3、 濾器滅菌:用點(diǎn)燃的酒精棉球,火焰滅菌。也可用121℃高壓滅菌20min。
4、 過(guò)濾水樣:用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,將100mL水樣(如水樣含菌較多,可減少過(guò)濾水樣量,或?qū)⑺畼酉♂?注入濾器中,打開(kāi)濾器閥門(mén),負(fù)0.5大氣壓下抽濾。
5、 培養(yǎng):水樣抽濾完后,再抽氣約5S,關(guān)上濾器閥門(mén),取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上,濾膜截留面向上,濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿倒置,放入361℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)22-24h。
6、 觀
4、察結(jié)果:挑出符合下列特征菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。
紫紅色,具有金屬光澤的菌落。
深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落。
淡紅色,中心色較深的菌落。
質(zhì)量控制:
本培養(yǎng)基傾注平皿待冷卻后呈淺紅色。質(zhì)控菌株接種后。361℃培養(yǎng)22—24h, 觀察結(jié)果如下表:
菌 名 菌 號(hào) 生長(zhǎng)狀況 菌落特征
ATCC25922 良好 紅色,有金屬光澤
鼠傷寒沙門(mén)氏菌 CMCC(B)50115 良好 無(wú)色至淡粉紅色
金黃色葡萄球菌 ATCC6538 不長(zhǎng)或差 ——
貯 存:貯存于避光、陰涼干燥處,用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。
規(guī)格:250g
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