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第1講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 [課時(shí)作業(yè)]　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　單獨(dú)成冊(cè)　方便使用 1．微生物強(qiáng)化采油(MEOR)是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通過(guò)向油井中注入含微生物的水來(lái)提高采油率的新技術(shù)。以下是人們篩選、純化和培養(yǎng)該類(lèi)微生物的實(shí)驗(yàn)操作。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)土壤是微生物的大本營(yíng)，該類(lèi)微生物應(yīng)取自_________________________________的土壤。 (2)篩選和純化該類(lèi)微生物時(shí)，除考慮微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)外，還要考慮微生物生長(zhǎng)所需的溫度、________以及是否需要O2等。倒平板時(shí)要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是________________________________________________________________________。 (3)在平板劃線接種時(shí)，為保證每次劃線都不能有雜菌污染，則每次劃線前都要________________，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線__________。接種后還應(yīng)密封培養(yǎng)的原因是__________，培養(yǎng)一段時(shí)間后在培養(yǎng)基上形成降油圈，此時(shí)選取__________就可獲得可能的高效菌株。在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在__________條件下進(jìn)行。 解析：(1)篩選、純化降解石油的微生物，應(yīng)取長(zhǎng)期被石油污染的土壤。(2)微生物的培養(yǎng)需要滿足微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件以及溫度、pH和氣體情況等。平板倒置可防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。(3)平板劃線法接種時(shí)，為降低每次劃線雜菌污染的概率，每次劃線前都要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌；劃線結(jié)束時(shí)，最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交(相接、相連、交叉等)。密封培養(yǎng)是為了制造無(wú)氧環(huán)境，故該類(lèi)降解石油的微生物的呼吸作用類(lèi)型是厭氧型。培養(yǎng)一段時(shí)間后在培養(yǎng)基上會(huì)形成降油圈，降油圈的大小與菌種降解石油的能力有關(guān)，降油圈越大，菌種降解石油的能力越強(qiáng)。在微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無(wú)菌條件下進(jìn)行。 答案：(1)長(zhǎng)期被石油污染(含石油多) (2)pH　防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染 (3)對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌　相交(相接、相連、交叉等)　該類(lèi)微生物是厭氧型　降油圈大的菌落　無(wú)菌 2．土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。某課題小組通過(guò)“土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→鑒別培養(yǎng)”的實(shí)驗(yàn)流程，從土壤中篩選出了降解尿素的菌株。請(qǐng)依據(jù)所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題： (1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以__________為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上。培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿常采用的滅菌方法分別是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)在稀釋土壤溶液的過(guò)程中每一步都要在_________________________________ 旁進(jìn)行操作。稀釋處理的目的是_________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)若培養(yǎng)基中存在能分解尿素的細(xì)菌，其菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)__________，這是由于尿素被分解產(chǎn)生___________________________________________________________________， 遇培養(yǎng)基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化。變色區(qū)域越大，表明該菌株降解尿素的能力__________。與全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中的菌落相比，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中菌落數(shù)__________(填“多”或“少”)。 解析：(1)欲篩選出能降解尿素的菌株，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌法(如接種環(huán))、干熱滅菌法(如培養(yǎng)皿)和高壓蒸汽滅菌法(如培養(yǎng)基)等。(2)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，故稀釋土壤溶液要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。為了得到單菌落，需將土壤溶液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)瑥亩咕奂谝黄鸬奈⑸锓稚⒊蓡蝹€(gè)細(xì)胞，進(jìn)而能在培養(yǎng)基表面形成單菌落，以便于分離純化菌種。(3)分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解產(chǎn)生了氨，氨使培養(yǎng)基的pH升高，使酚紅指示劑變紅。降解尿素能力越強(qiáng)的菌株，產(chǎn)生的氨越多，在菌落周?chē)纬傻募t色環(huán)帶越大。全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)全面，生長(zhǎng)的菌落數(shù)多，而以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中只有具備降解尿素能力的細(xì)菌才能生長(zhǎng)，故以尿素為氮源的培養(yǎng)基中菌落數(shù)少。 答案：(1)尿素　高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法　(2)酒精燈火焰　得到單菌落，避免土壤溶液中菌體濃度過(guò)高　(3)紅色環(huán)帶　氨　越強(qiáng)　少 3．制備培養(yǎng)基方法：將蛋白胨、NaCl和牛肉膏放入燒杯內(nèi)，加200 mL蒸餾水，用玻璃棒攪勻后，在酒精燈上加熱。當(dāng)?shù)鞍纂?、牛肉膏融化后，加入瓊脂，用微火繼續(xù)加熱至瓊脂溶化，補(bǔ)充水至200 mL。用0.1 mol/L的NaOH溶液或0.1 mol/L的HCl溶液將pH調(diào)至7.0～7.2，分別對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。當(dāng)培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃時(shí)，將其分裝在5套培養(yǎng)皿中，當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至室溫，按下表分別進(jìn)行處理。將處理完畢的培養(yǎng)基置于35 ℃的溫度下培養(yǎng)2～3天，觀察每個(gè)培養(yǎng)基中的細(xì)菌生長(zhǎng)情況。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： 第1套 開(kāi)蓋，在空氣中暴露10 s 第2套 用手指接觸培養(yǎng)基約10 s 第3套 用硬幣接觸培養(yǎng)基約10 s 第4套 用濾紙擦一下課桌，再接觸培養(yǎng)基約10 s 第5套 對(duì)照(不打開(kāi)蓋) (1)該培養(yǎng)基中，蛋白胨提供的主要營(yíng)養(yǎng)是__________________________________， 此外，培養(yǎng)基中還必須含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水和___________________________。 該培養(yǎng)基因其中加入了瓊脂而被稱(chēng)為_(kāi)___________________________________， 另外因含有牛肉膏、蛋白胨等成分而被稱(chēng)為_(kāi)_____________________________。 (2)除上述滅菌方法外，還可用__________和________________________________ 方法滅菌，其中后者主要適用于金屬工具。以上方法能夠殺死物體內(nèi)外的__________，與之相比，消毒是指使用__________方法殺死物體內(nèi)外的__________。 (3)在實(shí)驗(yàn)操作中，“當(dāng)培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃時(shí)，將其分裝在5套培養(yǎng)皿中”的過(guò)程稱(chēng)為_(kāi)_________，“當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至室溫”后應(yīng)該__________。實(shí)驗(yàn)中將高壓蒸汽滅菌后培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃的目的是防止_______________________________________。 解析：(1)該培養(yǎng)基中，蛋白胨提供的主要營(yíng)養(yǎng)是碳源氮源和維生素。培養(yǎng)基中還必須含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水和無(wú)機(jī)鹽。培養(yǎng)基因加入了瓊脂而被稱(chēng)為固體培養(yǎng)基。牛肉膏、蛋白胨等成分為天然成分，含有這些成分的培養(yǎng)基為天然培養(yǎng)基。(2)常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌等，滅菌可以徹底殺死物體內(nèi)外的全部微生物。消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體內(nèi)外的部分微生物。(3)“當(dāng)培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃時(shí)，將其分裝在5套培養(yǎng)皿中”的過(guò)程稱(chēng)為倒平板?！爱?dāng)培養(yǎng)基冷卻至室溫”后應(yīng)該將平板倒置，防止冷凝水污染培養(yǎng)基，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)中將高壓蒸汽滅菌后培養(yǎng)基的溫度下降到50 ℃的目的是防止培養(yǎng)基的溫度過(guò)高使培養(yǎng)皿因受熱不均而破裂。 答案：(1)碳源、氮源和維生素　無(wú)機(jī)鹽　固體培養(yǎng)基　天然培養(yǎng)基 (2)干熱滅菌　灼燒滅菌　全部微生物　較為溫和的物理或化學(xué)　部分微生物　(3)倒平板　將平板倒置　培養(yǎng)基的溫度過(guò)高使培養(yǎng)皿因受熱不均而破裂 4．回答與微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)有關(guān)的問(wèn)題： (1)在制備固體培養(yǎng)基時(shí)需加入的常用凝固劑是_____________________________。 若培養(yǎng)基需調(diào)節(jié)pH，則應(yīng)在滅菌之________(填“前”或“后”)調(diào)節(jié)。 (2)為防止外來(lái)雜菌入侵，對(duì)______________________________________________ 等可采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌。 (3)如圖為平板劃線法接種后的示意圖。在劃線接種的整個(gè)操作過(guò)程中，對(duì)接種環(huán)至少需進(jìn)行__________次灼燒滅菌。接種后蓋上皿蓋，將平板____________放入恒溫箱中培養(yǎng)，這樣放置的目的是__________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，每隔一個(gè)“時(shí)間間隔”統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取____________________作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而遺漏菌落的數(shù)目。 解析：(1)制備固體培養(yǎng)基通常加入的凝固劑是瓊脂。培養(yǎng)基若在滅菌后調(diào)pH，可能會(huì)造成培養(yǎng)基的污染，故培養(yǎng)基調(diào)pH應(yīng)在滅菌前進(jìn)行。(2)滅菌的方法通常有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌三種。采用干熱滅菌的通常有玻璃和金屬用具。(3)平板劃線接種過(guò)程中需在接種前、每次劃線后對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌。圖中共接種5個(gè)區(qū)域，故接種環(huán)至少需要進(jìn)行6次灼燒滅菌處理。微生物培養(yǎng)過(guò)程中，易產(chǎn)生冷凝水，為防止水珠滴在培養(yǎng)基表面影響微生物生長(zhǎng)，培養(yǎng)時(shí)需將培養(yǎng)基倒置。(4)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，要以菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄為最終結(jié)果，這樣可以防止因遺漏而導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏小。 答案：(1)瓊脂　前　(2)玻璃器皿和金屬用具　(3)6　倒置　避免培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過(guò)快揮發(fā) (4)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄 5．燒傷病人容易感染綠膿桿菌，引起化膿性感染，比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類(lèi)抗生素都是非常經(jīng)典的抗綠膿桿菌的藥物。臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，從病人身上獲取少量樣本，按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定該病人體內(nèi)的綠膿桿菌對(duì)不同抗生素的敏感性。 (1)獲取綠膿桿菌單菌落：配制適于綠膿桿菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分一般含有________、________、水和無(wú)機(jī)鹽，調(diào)節(jié)pH至7，滅菌處理，待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃時(shí)，在________________附近倒平板。經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得單菌落。 (2)檢測(cè)綠膿桿菌對(duì)不同抗生素的敏感性：取該單菌落適當(dāng)稀釋?zhuān)胈_______法接種于固體培養(yǎng)基表面，使其均勻生長(zhǎng)，布滿平板。將分別含等劑量的比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類(lèi)抗生素的同大小的濾紙片均勻置于該平板的不同位置，適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，結(jié)果是含不同抗生素的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，這說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)上述抗生素________；含頭孢菌素的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群懒_培南的小，這說(shuō)明____________________________；含比阿培南、碳青霉烯類(lèi)的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群懒_培南的小，且比阿培南透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，請(qǐng)推測(cè)此菌落產(chǎn)生的可能原因：一是________________，二是________________。 (3)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗綠膿桿菌的目的，對(duì)于該患者來(lái)說(shuō)最好應(yīng)選用抗生素____________。 解析：(1)綠膿桿菌為異養(yǎng)型微生物，培養(yǎng)基中需要加入碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等成分。接種時(shí)為防止污染應(yīng)在酒精燈火焰附近的無(wú)菌區(qū)接種。(2)含等劑量、不同種抗生素處理的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)不同種抗生素均敏感。含頭孢菌素的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群懒_培南的小，說(shuō)明綠膿桿菌對(duì)頭孢菌素的敏感性比對(duì)美羅培南的弱。比阿培南的透明圈中出現(xiàn)一個(gè)菌落的可能原因是被其他雜菌污染或綠膿桿菌產(chǎn)生了耐藥性突變。(3)綠膿桿菌對(duì)美羅培南的敏感性最強(qiáng)，患者服用后抑制綠膿桿菌的效果最好。 答案：(1)碳源　氮源　酒精燈火焰　(2)涂布　敏感　綠膿桿菌對(duì)頭孢菌素的敏感性比對(duì)美羅培南的弱　雜菌污染　抗比阿培南的綠膿桿菌(或綠膿桿菌產(chǎn)生耐藥性突變)形成的菌落　(3)美羅培南 6．土壤中有些細(xì)菌含有可降解尿素的脲酶。如圖是某同學(xué)從土壤中篩選能降解尿素的菌株的實(shí)驗(yàn)流程。請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題： 配制土壤溶液→系列稀釋→涂布平板與培養(yǎng)→菌落計(jì)數(shù) (1)用以__________為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細(xì)菌。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。為了防止雜菌污染，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須在__________條件下進(jìn)行。 (2)采用__________法接種時(shí)需要將樣液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓蠼臃N培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)。在稀釋土壤溶液的過(guò)程中每一步都要在__________旁進(jìn)行操作。將接種后的培養(yǎng)皿置于37 ℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)，將平板倒置的目的是____________________。 (3)向培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若培養(yǎng)基中存在可合成脲酶的細(xì)菌，其菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色，這是尿素被分解產(chǎn)生的__________使酚紅指示劑顯色的結(jié)果。變色區(qū)域越大，表明該菌株降解尿素的能力__________。 解析：(1)欲篩選出能降解尿素的菌株，配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以尿素為唯一氮源，這樣不能降解尿素的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上就不能生存，這類(lèi)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須保證無(wú)菌操作。(2)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，常用的接種方法是稀釋涂布平板法，整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程都要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周?chē)⑸锏奈廴尽⑵桨宓怪玫哪康氖欠乐古囵B(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落在培養(yǎng)基表面，造成雜菌污染。(3)酚紅指示劑變紅的原因是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，而氨使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。降解尿素能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周?chē)纬傻募t色環(huán)帶越大。 答案：(1)尿素　選擇　無(wú)菌 (2)稀釋涂布平板　酒精燈火焰　防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染 (3)氨(NH3)　越強(qiáng) 7．阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某土樣中發(fā)現(xiàn)一種能合成阿拉伯膠降解酶的菌株S。請(qǐng)回答： (1)欲從該土樣中分離菌株S，需使用以__________為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種后需將培養(yǎng)皿倒置并放在__________中培養(yǎng)。 (2)微生物培養(yǎng)過(guò)程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是__________，實(shí)驗(yàn)中對(duì)培養(yǎng)基常用__________法進(jìn)行滅菌。 (3)在顯微鏡下觀察分離得到的菌株S，發(fā)現(xiàn)其菌絲白色致密，細(xì)胞核直徑約1 μm，初步推測(cè)菌株S屬于_______________________________________________________ (填“細(xì)菌”或“真菌”)。根據(jù)這一推測(cè)，該菌株的培養(yǎng)基pH應(yīng)調(diào)至呈__________。 (4)欲對(duì)菌株S產(chǎn)生的阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)選用下表中__________配方，不選用其他配方的原因是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 配方 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 K2HPO4 MgSO47H2O KCl FeSO47H2O 甲 25 g/L 1 g/L 1 g/L 0.5 g/L 0.01 g/L 乙 25 g/L 1 g/L 3 g/L 1 g/L 1 g/L 0.5 g/L 0.01 g/L 丙 25 g/L 3 g/L 1 g/L 1 g/L 0.5 g/L 0.01 g/L 解析：(1)篩選能降解阿拉伯膠的菌株S需要使用以阿拉伯膠為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。接種后需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(2)微生物培養(yǎng)過(guò)程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是無(wú)菌，實(shí)驗(yàn)中對(duì)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(3)在顯微鏡下觀察分離得到的菌株S，發(fā)現(xiàn)其菌絲白色致密，細(xì)胞核直徑約1 μm，初步推測(cè)菌株S屬于真菌。培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)基pH應(yīng)調(diào)至呈酸性。(4)若對(duì)菌株S中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定，則必須以阿拉伯膠為唯一碳源，同時(shí)需要加入氮源，因此應(yīng)選用題表中丙配方。甲培養(yǎng)液缺少氮源，菌株S不能很好生長(zhǎng)；乙培養(yǎng)液有阿拉伯膠酶，會(huì)影響對(duì)菌株S自身產(chǎn)生的酶活力的測(cè)定結(jié)果。 答案：(1)阿拉伯膠　恒溫培養(yǎng)箱 (2)無(wú)菌　高壓蒸汽滅菌 (3)真菌　酸性 (4)丙　甲培養(yǎng)液缺少氮源，菌株S不能很好生長(zhǎng)；乙培養(yǎng)液有阿拉伯膠酶，會(huì)影響對(duì)菌株S自身產(chǎn)生的酶活力的測(cè)定結(jié)果 8．圖示為稀釋涂布平板法的操作流程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)實(shí)驗(yàn)室獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是_________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)圖示流程的主要操作包括__________和__________。 (3)一般選擇菌落數(shù)在__________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果比較準(zhǔn)確。 (4)當(dāng)培養(yǎng)基中纖維素成為唯一碳源時(shí)，可篩選出________________。要證明其有選擇作用，可以用__________作對(duì)照，比較菌落數(shù)目；還可以在培養(yǎng)基中加入剛果紅染料，如果________________________________________________________________________， 也證明其選擇作用。 解析：(1)實(shí)驗(yàn)室獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵(即無(wú)菌操作)。(2)圖示流程的主要操作包括梯度稀釋和涂布平板。(3)一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果比較準(zhǔn)確。(4)當(dāng)培養(yǎng)基中纖維素成為唯一碳源時(shí)，可篩選出分解纖維素的細(xì)菌。要證明其有選擇作用，可以用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照，比較菌落數(shù)目；還可以在培養(yǎng)基中加入剛果紅染料，如果所有菌落周?chē)霈F(xiàn)明顯的透明圈，也證明其選擇作用。 答案：(1)防止外來(lái)雜菌的入侵(無(wú)菌操作) (2)梯度稀釋　涂布平板　(3)30～300 (4)分解纖維素的細(xì)菌　牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基　所有菌落周?chē)霈F(xiàn)明顯的透明圈