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1、氨芐西林與紅霉素聯(lián)用的體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究 【摘要】 目的：研究繁殖期殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用的可能性，降低細(xì)菌內(nèi)毒素的釋放量，改善臨床感染癥狀。方法:采用微生物井式擴(kuò)散法，在無(wú)菌條件下，用藤黃八疊球菌作菌懸液，氨芐西林、紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品為模型藥物，測(cè)定兩者合用后的抑菌圈。結(jié)果:兩種抗生素聯(lián)用后的抑菌圈與氨芐西林單用的抑菌圈相當(dāng)（P>0.05）。結(jié)論:抑菌劑與繁殖期殺菌劑聯(lián)用并不降低繁殖期殺菌劑的殺菌效能，聯(lián)用時(shí)應(yīng)以同時(shí)合用或殺菌劑后使用抑菌劑為宜。 【關(guān)鍵詞】 氨芐西林，紅霉素，抑菌圈，藤黃八疊球菌 繁殖期殺菌劑在殺滅細(xì)菌的同時(shí)會(huì)引起內(nèi)毒素大量釋放，導(dǎo)致臨床癥狀加?。?］。繁殖期

2、殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用歷來(lái)被認(rèn)為是抗生素的不合理用藥［2］，原因是抑菌劑抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)無(wú)法使繁殖期殺菌劑起到殺菌作用，從而使聯(lián)用失去意義。繁殖期殺菌劑主要是β內(nèi)酰胺類抗生素，包括青霉素類和頭孢菌素類，發(fā)揮抗菌作用時(shí)與細(xì)胞外膜上的青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，細(xì)胞壁合成受阻，最后細(xì)菌破裂死亡。抑菌劑主要是大環(huán)內(nèi)酯類，其抗菌機(jī)制是抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成致細(xì)菌死亡。到目前為止，尚未見有實(shí)驗(yàn)研究證明繁殖期殺菌劑和抑菌劑聯(lián)用不合理。 　　1 材料 氨芐西林標(biāo)準(zhǔn)品（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，4109402），紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，1303072001 14），10 μL微量進(jìn)樣器（上海醫(yī)用激光儀器廠）

3、，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海醫(yī)療器械七廠），藤黃八疊球菌（甘肅省藥品檢驗(yàn)所，28001）。 　　2 方法 　　2.1 Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基及滅菌緩沖液（pH=6.8）的制備［3］ 　　2.2 菌懸液的制備［4］ 取已分離出的單個(gè)菌落接種于試管斜面上，在30 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h。取上述菌種，分別接種于2個(gè)扁瓶斜面上，置30 ℃恒溫箱培養(yǎng)，一斜面培養(yǎng)24 h（代表生長(zhǎng)期相同組)；另一斜面分別間隔6 h接種2次培養(yǎng)至24 h（代表生長(zhǎng)期不同組)；各用100 mL滅菌緩沖液將已培養(yǎng)好的斜面菌苔洗下，備用。 　　2.3 菌碟的制備［4］ 將Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基適量加熱融化后，冷至

4、50 ℃左右，在無(wú)菌條件下加入細(xì)菌懸液適量（1%，菌懸液體積100/培養(yǎng)基體積%），搖勻后趁熱吸取18 mL注入水平臺(tái)上的玻璃培養(yǎng)皿（Ф=9 cm）中，待冷凝后用角膜環(huán)鉆（Ф=3 mm）在同一圓周上打若干個(gè)孔, 孔距適當(dāng), 倒置備用。 　　2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品適量，用滅菌水溶解制備貯備液（100 μg/mL)，取貯備液適量用水稀釋至紅霉素為2 μg/mL、 4 μg/mL；氨芐西林為0.5 μg/mL、1.0 μg/mL濃度備用。取4 μg/mL 紅霉素、1.0 μg/mL 氨芐西林各1 mL混合使紅霉素的濃度為2 μg/mL，氨芐西林的濃度為0.5 μg/m

5、L（混合液）。 　　2.5 實(shí)驗(yàn)方法［5］ 無(wú)菌條件下在菌碟孔中分別點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量為10 μL，平行實(shí)驗(yàn)菌碟為6 個(gè)，置恒溫箱中（30 ℃）培養(yǎng)16～18 h后取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。 　　2.5.1 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對(duì)生長(zhǎng)期相同細(xì)菌的影響 依“2.2”、“2.3”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打四個(gè)孔，分別注入10 μL滅菌水、2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林及混合液，依“2.5”法試驗(yàn)?！　?.5.2 不同濃度紅霉素對(duì)氨芐西林殺菌效果的影響 依“2.3” 、“2.4”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打六個(gè)孔，適當(dāng)稀釋使含氨芐西林均為0.5 μg/m

6、L，紅霉素分別0.5、1.0、1.5、2.0 μg/mL，依“2.5”法試驗(yàn)。 　　2.5.3 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用方式對(duì)氨芐西林殺菌效果的影響 依“2.2”、“2.3”制備兩種細(xì)菌懸液和菌碟，每碟打六個(gè)孔，從1～6依次編號(hào)，分別注入10 μL滅菌水、2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林、混合液、0.5 μg/mL氨芐西林、2 μg/mL 紅霉素，置恒溫箱中（30 ℃）培養(yǎng)6 h后，在5、6號(hào)孔中分別再注入10 μL 2 μg/mL 紅霉素、0.5 μg/mL氨芐西林后，繼續(xù)培養(yǎng)至16～18 h后取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。 　　2.5.4 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對(duì)

7、放置不同時(shí)間細(xì)菌懸液的影響 將細(xì)菌懸液分別在4 ℃冰箱中放置0 d、3 d、7 d后，分別依“2.5.3”法試驗(yàn)。 　　3 結(jié)果 　　3.1 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對(duì)生長(zhǎng)期相同細(xì)菌的影響 結(jié)果見表1。由表1可知繁殖期殺菌劑氨芐西林與生長(zhǎng)期抑菌劑紅霉素混合溶液的抑菌圈與氨芐西林單獨(dú)使用時(shí)的抑菌圈比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<0.55，P＞0.05），兩者聯(lián)用不論在細(xì)菌生長(zhǎng)期是否一致都與單獨(dú)使用的殺菌效力相當(dāng)。表1 氨芐西林與紅霉素單用、聯(lián)用后的抑菌圈直徑（略） 　　3.2 不同濃度紅霉素對(duì)氨芐西林殺菌效果的影響 結(jié)果見表2。由表2可知，合用不同濃度的紅霉素對(duì)氨芐

8、西林的殺菌效果影響不同，濃度小于1 μg/mL時(shí)，抑菌圈略大，濃度大于1μg/mL時(shí)，抑菌圈相近，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<1.655，P>0.05）。表2 不同濃度紅霉素與氨芐西林聯(lián)用的抑菌圈直徑（略） 　　3.3 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用方式對(duì)氨芐西林殺菌效果的影響 結(jié)果見表3。由表3可知，紅霉素與氨芐西林的合用方式不同，效果也不同。同時(shí)合用或先用氨芐西林后用紅霉素效果相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t<0.55，P＞0.05)；但是若先用紅霉素后用氨芐西林則效果降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t>6.5，P<0.001）。表3 氨芐西林與紅霉素不同聯(lián)用方式的抑藥圈

9、直徑（略）注：*表示與0.5 μg/mL氨芐西林組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.001） 　　3.4 氨芐西林與紅霉素聯(lián)用對(duì)放置不同時(shí)間細(xì)菌懸液的影響 由表4可知，細(xì)菌懸液放置7 d對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（統(tǒng)計(jì)結(jié)論）幾無(wú)影響且細(xì)菌生長(zhǎng)期相同與否對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也無(wú)影響，但7d時(shí)t值（4.27、3.28）小于3d時(shí)t值（9.78、6.5），故細(xì)菌懸液放置時(shí)間不宜超過(guò)3 d。表4 氨芐西林與紅霉素放置不同時(shí)間的抑菌圈直徑（略）注：*表示與0.5 μg/mL氨芐西林組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01） 　　4 討論 以往認(rèn)為，繁殖期殺菌劑和生長(zhǎng)期抑菌劑不能聯(lián)用，但本文

10、體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與傳統(tǒng)理論的結(jié)論相反，其作用機(jī)制及臨床驗(yàn)證有待進(jìn)一步研究。臨床感染的情況復(fù)雜，細(xì)菌往往不處在同一生長(zhǎng)狀態(tài)，繁殖期殺菌劑可以殺滅繁殖期的細(xì)菌，抑菌劑可以抑制生長(zhǎng)期細(xì)菌的繁殖，并且聯(lián)合應(yīng)用可降低細(xì)菌內(nèi)毒素的釋放量， 改善臨床癥狀，從而達(dá)到良好的治療目的?？紤]到聯(lián)用方式對(duì)殺菌效果有影響，一旦聯(lián)用應(yīng)以同時(shí)合用或先使用殺菌劑后使用抑菌劑為宜。 【參考文獻(xiàn)】 ［1］徐能武, 袁建成, 肖光夏, 等. β內(nèi)酰胺類抗生素誘導(dǎo)革蘭氏陰性菌釋放內(nèi)毒素對(duì)其療效的影響［J］.中國(guó)抗生素雜志, 2000, 25(2): 112116. 　?。?］李 端. 藥理學(xué)［M］.第4版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1999: 299300. 　?。?］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(二部)［S］.2000版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000: 附錄 ⅪP8286. 　?。?］陳 剛. 治療藥物監(jiān)測(cè)理論與實(shí)踐［M］.第1版. 北京: 人民軍醫(yī)出版社, 1988: 168170, 469470. 　?。?］盛 杰. 微生物法測(cè)定血清中氨芐青霉素的濃度［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 1992, 12(2): 5355. 7 / 7文檔可自由編輯打印