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1、生物技術實踐第第1111章章第第49講微生物的培養(yǎng)與應用講微生物的培養(yǎng)與應用考綱要求考綱要求考情分析考情分析命題趨勢命題趨勢1微生物的微生物的分離和培養(yǎng)分離和培養(yǎng)2某種微生某種微生物數(shù)量的測物數(shù)量的測定定3培養(yǎng)基對培養(yǎng)基對微生物的選微生物的選擇作用擇作用2017，全國卷，全國卷，37T2016，全國卷，全國卷，39T2016，全國卷，全國卷，39T2016，四川卷，四川卷，10T2015，全國卷，全國卷，39T微生物的分離和培養(yǎng)在新課標高考試卷中微生物的分離和培養(yǎng)在新課標高考試卷中出現(xiàn)頻率較高，試題主要以非選擇題的形出現(xiàn)頻率較高，試題主要以非選擇題的形式圍繞培養(yǎng)基的種類和功能、微生物分離式圍繞

2、培養(yǎng)基的種類和功能、微生物分離的方法和原理、平板劃線法和稀釋涂布平的方法和原理、平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較、透明圈的大小與分解能力或板法的比較、透明圈的大小與分解能力或抗菌能力的關系等內(nèi)容進行命題，試題難抗菌能力的關系等內(nèi)容進行命題，試題難度一般不大度一般不大對微生物的篩選與計數(shù)的考查多以非選擇對微生物的篩選與計數(shù)的考查多以非選擇題的形式與微生物的分離、培養(yǎng)等內(nèi)容相題的形式與微生物的分離、培養(yǎng)等內(nèi)容相結(jié)合進行考查結(jié)合進行考查分值：分值：1215分分板板 塊塊 一一板板 塊塊 二二板板 塊塊 三三欄目導航板板 塊塊 四四 一、微生物的實驗室培養(yǎng) 1培養(yǎng)基 (1)概念：人們按照微生物對_的不

3、同需求，配制出供其生長繁殖的_。營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 2無菌技術 (1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。 (2)關鍵：_。 3純化大腸桿菌以及菌種的保藏 (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟：計算稱量溶化_ _。防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵滅菌滅菌倒平板倒平板 (2)純化大腸桿菌 原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成_，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。 方法：_、_。 (3)菌種的保藏 短期保存：_上4 保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變異。 長期保存：_中20 在冷凍箱中保藏。單個細胞單個細胞平板劃線法平板劃線法稀釋涂

4、布平板法稀釋涂布平板法固體斜面培養(yǎng)基固體斜面培養(yǎng)基甘油瓶甘油瓶 二、土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù) 1菌種篩選：使用尿素是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)。 2統(tǒng)計菌落數(shù)目：常用方法有_、顯微鏡直接計數(shù)法。 3細菌分離與計數(shù)的實驗流程 土壤取樣配制_微生物的培養(yǎng)與觀察細菌的計數(shù)。稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法培養(yǎng)基培養(yǎng)基 三、分解纖維素的微生物的分離 1纖維素酶 (1)組成：纖維素酶是一種復合酶，它包括_。 (2)作用C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶 2菌種篩選 (1)方法：_。 (2)原理剛果紅染色法剛果紅染色法即使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)即使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)

5、基，根據(jù)_來篩選纖來篩選纖維素分解菌。維素分解菌。是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈 3篩選流程 土壤取樣：富含_的環(huán)境 選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量 梯度稀釋 涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生_的菌落周圍出現(xiàn)透明圈纖維素纖維素纖維素酶纖維素酶 1判斷正誤，正確的畫“”，錯誤的畫“”。 (1)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。() (2)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌。() (3)從有機廢水中分離分解有機物的微生物時，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。() (4)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又

6、減少消毒劑對細胞的傷害。() (5)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)。() 解析從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；蛋白胨可以提供生長因子；該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后經(jīng)滅菌后才可以接種使用。B 3(2015四川卷)下列是以酵母菌為材料進行的實驗，有關敘述錯誤的是() A探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚藍檢測產(chǎn)生的CO2 B用酵母菌發(fā)酵釀制果酒，選擇酸性重鉻酸鉀檢測產(chǎn)生的酒精 C探究酵母菌種群數(shù)量變化，應設空白對照排除無關變量干擾 D用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計數(shù)，應選擇有30300菌落數(shù)的平板 解析探究酵母菌種群數(shù)量變化，需定時取樣計數(shù)，不需設置空白對照，C項錯誤。

7、C 1培養(yǎng)基的種類、用途及配制原則 (1)按物理狀態(tài)分類一微生物的培養(yǎng)和分離一微生物的培養(yǎng)和分離培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點特點用途用途液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基加凝固劑加凝固劑( (如瓊脂如瓊脂)微生物分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏微生物分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運動、分類、鑒定觀察微生物的運動、分類、鑒定 (2)按功能分類種類種類制備方法制備方法原理原理用途用途舉例舉例選擇選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入某些化學物質(zhì)某些化學物質(zhì)依據(jù)某些微生物對某些依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性而設計物質(zhì)的抗性而設

8、計從眾多微生物從眾多微生物中分離所需的中分離所需的微生物微生物加入青霉素分加入青霉素分離得到酵母菌離得到酵母菌和霉菌和霉菌鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入某種指示劑或某種指示劑或化學藥品化學藥品依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學藥品特定指示劑或化學藥品反應，產(chǎn)生明顯的特征反應，產(chǎn)生明顯的特征變化而設計變化而設計鑒別不同種類鑒別不同種類的微生物的微生物伊紅伊紅美藍培美藍培養(yǎng)基可以鑒別養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌大腸桿菌 (3)培養(yǎng)基的配制原則 目的要明確：配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。 營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意

9、各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 pH要適宜：細菌為6575，放線菌為7585，真菌為5060，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。 2微生物的純化培養(yǎng)平板劃線法與稀釋涂布平板法方法方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法注注意意事事項項( (1)接種環(huán)的灼燒：接種環(huán)的灼燒：第一次劃線前：第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物；養(yǎng)物；以后每次劃線前：殺死殘留以后每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端；線末端；劃線結(jié)束后：殺死殘留菌劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者種，避免污染環(huán)境和感染

10、操作者( (2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進行灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進行操作，以免溫度太高殺死菌種操作，以免溫度太高殺死菌種( (3)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連相連( (4)劃線用力大小要適當，防止用力過劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破大將培養(yǎng)基劃破( (1)稀釋操作時：每支試管及其中的稀釋操作時：每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作水、移液管等均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離酒精燈火時，試管口和移液管應在離酒精燈火焰焰12 cm處處( (2)涂布平板時：涂布平板時：涂布器用體積分數(shù)涂布器用體積分數(shù)為為70%酒精消毒，取

11、出時，讓多余酒酒精消毒，取出時，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；燒杯中，以免引燃其中的酒精；酒酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體頭不要接觸任何物體方法方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法菌體菌體獲取獲取在具有顯著的菌落特征的菌落中挑在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體挑取

12、菌體優(yōu)點優(yōu)點可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落，又能對既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物計數(shù)微生物計數(shù)缺點缺點不能對微生物計數(shù)不能對微生物計數(shù)操作復雜，需要涂布多個平板操作復雜，需要涂布多個平板目的目的在培養(yǎng)基上形成由單個細胞繁殖而來的子細胞群體在培養(yǎng)基上形成由單個細胞繁殖而來的子細胞群體菌落菌落 區(qū)分平板劃線法和稀釋涂布平板法 (1)平板劃線法和稀釋涂布平板法都能使細菌純化，但平板劃線法不易分離出單個菌落，不能計數(shù)；稀釋涂布平板法能使單菌落分離，便于計數(shù)。 (2)稀釋涂布平板法的缺點：稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中菌落的數(shù)目

13、往往比實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。 3消毒和滅菌的比較條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應用范圍應用范圍消消毒毒較為溫較為溫和的物和的物理或化理或化學方法學方法僅殺死物體表面僅殺死物體表面或內(nèi)部部分對人或內(nèi)部部分對人體有害的微生物體有害的微生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學藥劑化學藥劑消毒法消毒法用酒精擦拭雙手，用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源用氯氣消毒水源滅滅菌菌強烈強烈的理的理化因素化因素殺死物體內(nèi)外所殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接

14、種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌培養(yǎng)基及容器的滅菌 例1 (2017江蘇卷)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴重危害。小明同學準備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題： (1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_。 (2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_，以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應進一步_，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須

15、添加_。蛋白胨、苯酚蛋白胨、苯酚( (3)如圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中如圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_( (填圖中序填圖中序號號)區(qū)域更易獲得單菌落。區(qū)域更易獲得單菌落。 增加增加稀釋涂布稀釋涂布凝固劑凝固劑 0、02、04、06、08 解析(1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有機物，可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，需隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過于密集，則應進一步稀釋后再進行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、無機鹽等)外，還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時，最后的

16、劃線區(qū)域()中，菌體的密度較小，容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號比色管中苯酚濃度為1 mg/L，故15號比色管中的苯酚濃度應分別為0、02 mg/L、04 mg/L、06 mg/L、08 mg/L；根據(jù)題意，廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于01 mg/L，需將殘留液稀釋20倍左右。 1篩選菌株 (1)原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長。 (2)菌株篩選原理的比較二微生物的篩選與計數(shù)二微生物的篩選與計數(shù)土壤中分解尿素的細菌土壤中分解尿素的細菌分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物選擇培養(yǎng)基的成分：尿

17、素作為唯選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一的氮源一的氮源鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，指示劑，若指示劑變紅，pH升升高，說明細菌能分解尿素高，說明細菌能分解尿素選擇培養(yǎng)基的成分：纖維素作為唯一的碳選擇培養(yǎng)基的成分：纖維素作為唯一的碳源源鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈 2微生物的計數(shù) (1)兩種計數(shù)方法的比較比較比較項目項目間接計數(shù)法間接計數(shù)法( (稀釋涂布平板

18、法稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法直接計數(shù)法( (顯微計數(shù)法顯微計數(shù)法)原理原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌菌利用特定細菌計數(shù)板或血球計利用特定細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量積的樣品中微生物的數(shù)量比較比較項目項目間接計數(shù)法間接計數(shù)法( (稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法直接計數(shù)法( (顯微計數(shù)

19、法顯微計數(shù)法)公式公式每克樣品中的菌落數(shù)：每克樣品中的菌落數(shù)：( (CV)MC：某稀釋度下平板上生長的平均菌落：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；數(shù)；V：涂布平板時所用的稀釋液的體：涂布平板時所用的稀釋液的體積積( (mL)；M：稀釋倍數(shù)：稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細菌數(shù)：每小每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格平均細菌數(shù)格平均細菌數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)缺點缺點當兩個或多個菌體連一起時，平板上觀當兩個或多個菌體連一起時，平板上觀察到的只是一個菌落察到的只是一個菌落不能區(qū)分死細胞和活細胞不能區(qū)分死細胞和活細胞結(jié)果結(jié)果比實際值偏小比實際值偏小比實際值偏大比實際值偏大 (2)設置對照和重復比較項目

20、比較項目對照對照重復重復目的目的排除非測試因素對實驗結(jié)果的影排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響響排除偶然因素對實驗結(jié)果的影排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響響實例實例空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格合格同一稀釋度涂布至少同一稀釋度涂布至少3個平板個平板 例2 莠去津是一種含氮農(nóng)藥，在土壤中不易降解，為修復被其污染的土壤，可按下面程序選育能降解莠去津的細菌(目的菌)。請據(jù)圖回答：(已知莠去津在水中溶解度低，含過量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明) (1)由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的過程稱為_，目的是_。 (2)在將C瓶菌種接種到固體培養(yǎng)基之前通常要進行_，將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方

21、法有平板劃線法和_法，從圖中看本實驗采用的是_(填“前者”或“后者”)。 (3)一段時間后，培養(yǎng)基出現(xiàn)無透明圈和有透明圈兩種菌落，我們篩選的目的菌是菌落中_的細菌，該菌落生長所需的氮元素主要來自_。 (4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌落來自C瓶菌種還是培養(yǎng)基，應如何設置對照組？_。選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)初步選擇能降解莠去津的細菌初步選擇能降解莠去津的細菌(目的菌目的菌)并提高其密度并提高其密度 梯度稀釋梯度稀釋稀釋涂布平板稀釋涂布平板后者后者有透明圈有透明圈莠去津莠去津配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種菌種，與實驗組放在相同條件下培養(yǎng)配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種菌種，與實驗組放在相同條件下培養(yǎng)微生物的鑒別方法微生

22、物的鑒別方法( (1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。( (2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。( (3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中是否出現(xiàn)以纖維素分解菌染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中是否出現(xiàn)以纖維素分解

23、菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。 例1 (2014全國卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成_。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成_色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見表)： (注：“”表示有，“”表示無。) 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或

24、“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_； 培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。酵母菌酵母菌無機鹽無機鹽淀粉淀粉纖維素粉纖維素粉瓊脂瓊脂CR溶液溶液水水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙培養(yǎng)基乙答題送檢來自閱卷名師報告錯誤錯誤致錯原因致錯原因扣分扣分( (1)對葡萄糖苷酶的作用陌生對葡萄糖苷酶的作用陌生4( (2)對題意理解不透，纖維素消失則紅色消失，形成透明圈對題意理解不透，纖維素消失則紅色消失，形成透明圈2( (3)對固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基的用途不明，語言表達不清楚、對固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基的用途不明，語言表達不清楚、不完整不完整4 解析 (1)纖維素是一種由

25、葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是自然界中含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用。(2)剛果紅與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)生物能適應一定環(huán)境，環(huán)境對生物具有選擇作用，只有在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分解菌才會發(fā)揮作用。纖維素分解菌富集培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維素分解菌鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；要分離和鑒別纖維素分解菌，需要以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙不具有選擇的作用。 規(guī)范答題 (除注明外，每空2分)(1)纖維二糖葡萄糖 (2)紅(1分

26、)透明圈 (3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 1當今世界，能源和資源日趨危機，人們希望能借助纖維素酶將地球上最豐富(占全球總生物量80%)、最廉價的可再生資源纖維素轉(zhuǎn)化為能直接利用的能源和資源。纖維素酶可以從能分解纖維素的細菌培養(yǎng)液中提取。某同學設計了如下分離土壤中纖維素分解菌的實驗流程： 土壤取樣選擇培養(yǎng)()鑒別培養(yǎng) (1)請補充實驗流程：_；找不到合適的取樣環(huán)境，可采取的辦法是_。梯度稀釋梯度稀釋將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中 (2)選擇培養(yǎng)的目的是_；研究人員用化合

27、物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，該培養(yǎng)基為_(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基，其中加入的化合物A是_，為微生物的生長提供_。 (3)為了鑒別纖維素分解菌和進一步純化菌種，可以在鑒別培養(yǎng)基上加入_染液，將篩選獲得的菌液稀釋后用_法接種到鑒別培養(yǎng)基上，然后挑選產(chǎn)生_的菌落作為菌種進行擴大培養(yǎng)。 解析(1)經(jīng)選擇培養(yǎng)后，需經(jīng)梯度稀釋后才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。(2)可用含纖維素的液體培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)來增加纖維素分解菌的濃度。(3)剛果紅是一種染料，可與纖維素反應形成紅色復合物；培養(yǎng)基中有分解纖維素微生物存在的區(qū)域，纖維素會被分解，出現(xiàn)透明圈。增加纖維素分解菌的濃度增加纖維素分解菌的濃度液體液體纖維素纖維素碳源碳源剛果紅剛果紅稀釋涂布平板稀釋涂布平板透明圈透明圈