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1、專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 【學(xué)習(xí)導(dǎo)航】 本專題包含三個(gè)方面的內(nèi)容：課題1.微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)；課題2.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)；課題3分解纖維素的微生物的分離。課題1介紹了最基本的微生物技術(shù)，是開展其他兩個(gè)課題的基礎(chǔ)。課題2和課題3要求分離某種特定的微生物，難度較大，探究性也更強(qiáng)。此外，本專題中所強(qiáng)調(diào)的無菌操作技術(shù)，將有助于“專題3植物組織培養(yǎng)技術(shù)”的順利完成。 學(xué)生通過本專題的學(xué)習(xí)，應(yīng)當(dāng)掌握培養(yǎng)基、消毒滅菌等有關(guān)微生物培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識(shí)，應(yīng)當(dāng)掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，并可以運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物計(jì)數(shù)、微生物分離與培養(yǎng)等實(shí)際問題。

2、課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 【導(dǎo)學(xué)誘思】 1．培養(yǎng)基的配制原則是 。培養(yǎng)基可以分為 和 。 2．培養(yǎng)基一般都含有 、 、 、 四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì) 、 以及 的要求。 思考：為什么大多數(shù)培養(yǎng)基都需要含有四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)？ 3．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 。 4．避免雜菌污

3、染的方法主要包括以下四個(gè)內(nèi)容：

4、 5．消毒是指 滅菌是指 思考：消毒與滅菌的相同點(diǎn)與區(qū)別分別是什么？ 6．實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法是 ，此外，人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用 、 等。常用的滅菌方

5、法有 、 、 ，此外，實(shí)驗(yàn)室里還用 或 進(jìn)行消毒。 7．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟是⑴ ，⑵ ，⑶ ，⑷ ，⑸ 。 思考： ⑴培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右，才能用來倒平板。你用什么方法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ ⑵為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ ⑶平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ ⑷在倒平板的過程中，如果不小心瘵

6、培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 8．微生物接種的方法中最常用的是 和 。平板劃線法是指 。稀釋涂布平板法是指

7、 。 9．平板劃線的操作步驟如下： ⑴ ⑵ ⑶ ⑷

8、 ⑸ ⑹ ⑺ 思考： ⑴為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接

9、種環(huán)嗎？為什么？ ⑵在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ ⑶在作第二次以及其后的劃線操作是赤什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 10．系列稀釋操作步驟： ⑴ ⑵ ⑶

10、 11．涂布平板操作步驟： ⑴ ⑵ ⑶ ⑷

11、 【疑難點(diǎn)撥】 1．生物的營(yíng)養(yǎng) 營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取、利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。 在人及動(dòng)物，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類；在植物，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類；在微生物，則有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。 2．培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1~2天后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 3．無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 無菌技術(shù)還能有效避免

12、操作者自身被微生物感染。 4．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 5．為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線

13、結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 【典例解析】 例1．關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是 A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.無機(jī)氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于A、B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為

14、自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHC O3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對(duì)于D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。 答案：D 例2．下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是 A.防止雜菌污染 B.消滅雜菌 C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能

15、只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。 答案：B 例3．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答： 編號(hào) 成分 含量 ① 粉狀硫 10g ② （NH4）2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml （1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型 是 。 （2）若不慎將過量NaC

16、l加入培養(yǎng)基中。 如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入 ， 用于培養(yǎng) 。 （3）若除去成分②，加入（CH2O），該培 養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。 （4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有 類。 （5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化 后分裝前，要進(jìn)行的是 。 （6）右表中各成分重量確定的原則是 。 （7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是

17、 。 解析：對(duì)于一個(gè)培養(yǎng)基，它能培養(yǎng)何種微生物，要看它的化學(xué)成分。當(dāng)然這只適用于合成培養(yǎng)基，如果是一個(gè)天然培養(yǎng)基就不能從培養(yǎng)基的成分上區(qū)分它是培養(yǎng)何種微生物的。分析化學(xué)成分要從營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的類型出發(fā)。右表中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、無機(jī)鹽、氮源三類，缺乏碳源和特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有的微生物是不需要的，但沒有微生物是不需要碳源的。該培養(yǎng)基中沒有碳源，說明培養(yǎng)的微生物是從空氣中獲得碳源的，即可培養(yǎng)的微生物就是自養(yǎng)型微生物了。該培養(yǎng)基中加入了過量食鹽，就可以成為金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基，但金黃色葡萄球菌是異養(yǎng)型微生物，這個(gè)培養(yǎng)基就還需要加入有機(jī)碳源。該培養(yǎng)基若加入（CH2O），

18、培養(yǎng)基中就有了碳源，但除去成分②，卻使培養(yǎng)基中沒有了氮源，這時(shí)就只能用于培養(yǎng)固氮微生物了。對(duì)于菌種鑒定，往往用的是固體培養(yǎng)基，而表中沒有凝固劑，需要加入常見的凝固劑——瓊脂。 答案：⑴自養(yǎng)型微生物 ⑵含碳有機(jī)物 金黃色葡萄球菌 ⑶固氮微生物 ⑷3 ⑸調(diào)整pH ⑹依微生物的生長(zhǎng)需要確定 ⑺瓊脂（或凝固劑） 【課堂演練】 一、選擇題 ﹙﹚ 1．有可能作為異養(yǎng)微生物碳源的是 A．牛肉膏 B．含碳有機(jī)物 C．石油 D．含碳無機(jī)物 2．根瘤菌能利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的組別是

19、 A．NH3，（CH2O），NaCl B．N2，（CH2O），CaCl2 C．銨鹽，CO2，NaCl D．NO2，CO2，CaCl2 3．配制培養(yǎng)基的敘述中正確的是 A．制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂 B．加入青霉素可得到放線菌 C．培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源 D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基 4．自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是 A．碳源 B．氮源 C．無機(jī)鹽 D．特殊營(yíng)養(yǎng)

20、物質(zhì) 5．下表是有關(guān)4種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的概述。其中正確的是(C) 生 物 硝化細(xì)菌 根瘤菌 酵母菌 谷氨酸棒狀桿菌 能 源 氧化NH3 N2的固定 分解糖類等有機(jī)物 光 能 碳 源 C02 糖類 糖類 糖類 氮 源 NH3 N2 NH4+、NO3- 尿 素 代謝類型 自養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)兼性厭氧型 自養(yǎng)需氧型 A．根瘤菌、谷氨酸棒狀桿菌 B．硝化細(xì)菌、酵母菌 C．酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌 D．硝化細(xì)菌、根瘤菌 6．甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、

21、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ種正常生長(zhǎng)繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長(zhǎng)繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長(zhǎng)繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是 （C ） 粉狀硫 10g K2HPO4 4g FeSO4 0.5g 蔗糖 10g （NH4）2SO4 0.4g H2O 100ml MgSO4 9.25g CaCl2 0.5g Ⅰ + + + + - + + + Ⅱ + + + - + + + + Ⅲ + + + + + + +

22、 + A、甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物 B、甲、乙、丙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物 D、甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物 7．微生物（除病毒外）需要從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并通過代謝來維持正常的生長(zhǎng)和繁殖。下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)的說法正確的是 A．乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的 B．微生物生長(zhǎng)中不可缺少的一些微量的無機(jī)物稱為生長(zhǎng)因子 C．培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對(duì)微生物的增殖越有利 D．生長(zhǎng)因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長(zhǎng)因子的能力往往不足。 8．某一種細(xì)菌株要從環(huán)境中提

23、取現(xiàn)成的亮氨酸（20種氨基酸中的一種）才能生長(zhǎng)，此菌株對(duì)鏈霉素敏感。實(shí)驗(yàn)者用誘變劑處理此菌株，想篩選出表中細(xì)菌菌株類型。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)昴康?，選用的培養(yǎng)基類型是（　?。? 　注：Ｌ—亮氨酸　　Ｓ—鏈霉素　　“＋”—加入　　“—”—不加入B 　如：Ｌ—：不加亮氨酸　?。樱杭尤腈溍顾? 選項(xiàng) 篩選出不需要亮氨酸的菌株 篩選出抗鏈霉素的菌株 篩選出不需要亮氨酸的抗鏈霉素的菌株 Ａ Ｌ＋　　Ｓ＋ Ｌ—　?。印? Ｌ＋　?。樱? Ｂ Ｌ－　?。印? Ｌ＋　?。樱? Ｌ—　?。樱? Ｃ Ｌ—　　Ｓ＋ Ｌ＋　?。樱? Ｌ—　　Ｓ— Ｄ Ｌ＋　　Ｓ— ｌ—　?。印? Ｌ＋　　Ｓ＋ 9．

24、要將從土壤中提取的自生固氮菌與其他的細(xì)菌分離出來，應(yīng)將它們接種在 A．加入氮源和殺菌劑的培養(yǎng)基上 B．不加入氮源和不加殺菌劑的培養(yǎng)基上 C．加入氮源，不加殺菌劑的培養(yǎng)基上 D．不含氮源和殺菌劑的培養(yǎng)基上 10．酵母菌培養(yǎng)液中常含有一定濃度的葡萄糖，但當(dāng)葡萄糖濃度過高時(shí)，反而抑制微生物的生長(zhǎng)，原因是 A．碳源供應(yīng)太充足 B．細(xì)胞會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離 C．改變了酵母菌的pH值 D．葡萄糖不是酵母菌的原料 11．含C、H、O、N的某大分子化合物可以作為 A.異養(yǎng)微生物的氮源、能源

25、 B.異養(yǎng)微生物的碳源、能源 C.自養(yǎng)微生物的碳源、氮源、能源 D.異養(yǎng)微生物的碳源、氮源、能源 二、非選擇題 12．培養(yǎng)蘑菇時(shí)常使用的原料為棉花殼、花生粉餅、朽木等，再噴灑適量的水，加入一定量的尿素等。請(qǐng)回答下列問題： （1）按化學(xué)成分分類，該培養(yǎng)基為 培養(yǎng)基，按物理性質(zhì)分類該培養(yǎng)基為 培養(yǎng)基。 （2）培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出了其他雜菌，經(jīng)鑒定為細(xì)菌，細(xì)菌與蘑菇的關(guān)系為 ，在培養(yǎng)基上施用適量的 即可抑制細(xì)菌

26、生長(zhǎng)。 （3）蘑菇的代謝類型為 在生態(tài)系統(tǒng)的成分中屬于 。 12．（1）天然 固體 （2）競(jìng)爭(zhēng) 青霉素 （3）異養(yǎng)需氧型 分解者 13．（22分）下表為一種培養(yǎng)液的配方。 成分 含量 NH4HCO3 0.5g KH2PO4 3.0g CaSO4 0.5g FeCl2 0.5g 維生素 少許 H2O 1000mL 請(qǐng)據(jù)表中內(nèi)容回答： （1）該配方若用于培養(yǎng)微生物，則該生物的同化作用類型是___________________； 若用該配方來培養(yǎng)圓褐

27、固氮菌，則應(yīng)加入___________和_____________，并可以除去的成分是_____________。在培養(yǎng)圓褐固氮菌之前需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，否則會(huì)有其他雜菌生長(zhǎng)，圓褐固氮菌與其他雜菌的關(guān)系為__________________。 （2）若從自然界分離得到的樣品中含有谷氨酸棒狀桿菌、圓褐固氮菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌等，現(xiàn)欲篩選出金黃色葡萄球菌，則簡(jiǎn)便的方案是_________________________。 （3）將大腸桿菌的質(zhì)粒取出，連接上人生長(zhǎng)激素的基因以后，重新置入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，然后，用這種帶有人生長(zhǎng)激素基因的工程菌進(jìn)行發(fā)酵，就能得到大量的人生長(zhǎng)激素。在大規(guī)模生產(chǎn)中

28、，需要將選育的工程菌菌種經(jīng)過多次擴(kuò)大培養(yǎng)，再進(jìn)行接種，擴(kuò)大培養(yǎng)選用_________期的細(xì)菌，并通入無菌空氣；若把大腸桿菌接種到葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基中，只有葡萄糖全被消耗后才合成半乳糖苷酶來利用乳糖。這一事實(shí)說明半乳糖苷酶屬于___________，該調(diào)節(jié)方式的意義是_________________________，增強(qiáng)了大腸桿菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力。 13. （共22分） （1） （每空2分，共10分）自養(yǎng)型 有機(jī)碳化合物（或碳源） 生長(zhǎng)因子 氮源（NH4HCO3） 競(jìng)爭(zhēng) （2）（4分）配制普遍培養(yǎng)基后加入高濃度食鹽 （3）對(duì)數(shù)期 誘導(dǎo)酶（各2分）既保證微生物代謝的需要，又不

29、浪費(fèi)物質(zhì)和能量（4分） 14．谷氨酸是生物體內(nèi)一種重要的有機(jī)小分子，谷氨酸鈉是它的鈉鹽，是味精等調(diào)味品的主要成分。目前利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)的氨基酸中，谷氨酸是產(chǎn)量最大的種類之一。 （1）谷氨酸的R基為—CH2—CH2－COOH，其結(jié)構(gòu)式為_____________。 （2）如果在蛋白質(zhì)合成過程中，攜帶谷氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)RNA為GAG，可知谷氨酸的密碼子為____________。 （3）我國(guó)微生物發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸常用的菌種有北京棒狀桿菌、谷氨酸棒狀桿菌和黃色短桿菌等，下列生物中與這些菌種在結(jié)構(gòu)上存在明顯區(qū)別的有_____________。 A． 噬菌體 B． 人類免疫缺陷病毒（HIV）

30、 C． 禽流感病毒 D．肺炎雙球菌 E．酵母菌 G． 硝化細(xì)菌 H． 乳酸菌 （4）谷氨酸發(fā)酵的培養(yǎng)基成分，主要有葡萄糖、氨水、磷酸鹽、生物素等，發(fā)酵裝置如圖所示。可以判斷谷氨酸棒狀桿菌的新陳代謝類型是_____________型。某廠用谷氨酸棒狀桿菌發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸，結(jié)果代謝產(chǎn)物中出現(xiàn)了大量的乳酸，其原因很可能是_______________________________________。 （5）谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)過程中，需要添加氨水，它不僅是細(xì)菌生長(zhǎng)所需的_____________，而且起到調(diào)節(jié)培養(yǎng)液_____________的作用，所以應(yīng)該分次加入。 （6）某廠的發(fā)酵液

31、曾不慎被噬菌體污染，菌群死亡殆盡，但人們卻僥幸從中獲得了少數(shù)可抵抗噬菌體的新菌種，細(xì)菌這種新性狀的產(chǎn)生來自于_____________。 （7）如圖所示連續(xù)培養(yǎng)的方法，以一定的速度不斷添加新的培養(yǎng)基，同時(shí)又以同樣的速度放出舊的培養(yǎng)基，此工藝流程可以大大提高生產(chǎn)效率，試闡述其原因_______________________。 14．（22分） （2分） （2）GAG（2分） （3）ABCE（2分） （4）異養(yǎng)、需氧 通氣量不足（4分） （5）氮源 pH（4分） （6）基因突變（或突變）（2分） （7）①保證微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求 ②排出部分代謝產(chǎn)物 ③使微生物保持較長(zhǎng)

32、時(shí)間的快速生長(zhǎng)。（6分） 課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 【導(dǎo)學(xué)誘思】 1．尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。 2．以土壤中能分解尿素的細(xì)菌為研究對(duì)象，要達(dá)到的兩個(gè)主要目的是： ⑴ ；⑵ 。 3．PCR（ ）是一種在體外將 。此項(xiàng)技術(shù)的自動(dòng)化，要求使用耐高溫的DNA聚合酶。 思考：怎樣找耐高溫的酶呢？

33、 4．實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理是：人為提供有利于 生長(zhǎng)的條件（包括 等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。 5．選擇培養(yǎng)基是指 。 6．常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是 。即當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的 。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進(jìn)行

34、計(jì)數(shù)。另外， 也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。 7．比較教材中兩位同學(xué)的操作方法，哪位同學(xué)的結(jié)果接近真實(shí)值？你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)呢？如需要，如何改進(jìn)？ 8．一般來說，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目 。這是因?yàn)? 。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用 而不是活菌數(shù)來表示。 9．設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是 ，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 10．對(duì)照實(shí)驗(yàn)是

35、 。 11．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括的內(nèi)容有： 、 、 和 ，具體的實(shí)驗(yàn)步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。 12．不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng) 和培養(yǎng) 。在實(shí)驗(yàn)過程中，一般每隔24小

36、時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以 。 13．無菌操作應(yīng)注意什么問題？ ⑴ ⑵ ⑶

37、 14．在進(jìn)行多組實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)注意做好標(biāo)記，其目的是 。 思考：應(yīng)標(biāo)記哪些內(nèi)容？怎樣操作更有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行？ 15．對(duì)所需的微生物進(jìn)行初步篩選，只是分離純化菌種的第一步，要對(duì)分離的菌種進(jìn)行一步的鑒定，還需要借助 的方法。 思考：有哪些方法可以對(duì)菌種進(jìn)行鑒定？ 【疑難點(diǎn)撥】 1．選擇培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基的含義是：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)需要的微生物的生長(zhǎng)。目的

38、是從眾多微生物中分離所需要的微生物。 在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)可以做到這一點(diǎn)，如加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在培養(yǎng)的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入的。 培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分的改變也可達(dá)到分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離能消除石油污染的微生物的目的。改變微生物的培養(yǎng)條件， 也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到

39、耐高溫的微生物。 2．如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？ 統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。 3．為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？ 這是因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量（單位：株/Kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧型細(xì)菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。 【典例解析】

40、 例1．對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是 A．在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B．至少接種一種細(xì)菌 C．接種一個(gè)細(xì)菌 D．及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 解析：細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定是人們?cè)谝欢l件下進(jìn)行的。這些條件是：一種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時(shí)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測(cè)定出細(xì)菌的生長(zhǎng)規(guī)律。測(cè)定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長(zhǎng)；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能通過樣品推測(cè)細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌，則會(huì)發(fā)生種間斗爭(zhēng)而不能測(cè)定一種微生物的生長(zhǎng)規(guī)律。在接種時(shí)，要保證

41、一定的接種量。 答案：A 例2．在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中，種內(nèi)斗爭(zhēng)最顯著最激烈的時(shí)期是 A．調(diào)整期 B．對(duì)數(shù)期 C．穩(wěn)定期 D．衰亡期 解析：種內(nèi)斗爭(zhēng)是一種生態(tài)因素。種內(nèi)斗爭(zhēng)反應(yīng)了種內(nèi)生物對(duì)生存空間和生活資源的爭(zhēng)奪。在生活空間充裕，營(yíng)養(yǎng)充足的時(shí)候，種內(nèi)斗爭(zhēng)的程度是比較低的。隨著微生物個(gè)體數(shù)目的增加，每個(gè)個(gè)體的生存空間越來越少，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，每個(gè)個(gè)體對(duì)生存空間和資源的爭(zhēng)奪也越來越激烈，種內(nèi)斗爭(zhēng)就越來越激烈。由此可知，在穩(wěn)定期的種內(nèi)斗爭(zhēng)最激烈。在衰亡期，微生物的數(shù)目已經(jīng)開始減少，pH已經(jīng)極度不適于微生物的生存，次級(jí)代謝產(chǎn)物積累到很高的程度，這時(shí)

42、的微生物的生存斗爭(zhēng)主要是與無機(jī)環(huán)境的斗爭(zhēng)。 答案：C 例3．（2005年江蘇）抗生素作為治療細(xì)菌感染的藥物，其高效性和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值使抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用具有劃時(shí)代的意義。 ⑴青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類型是 ，青霉素是青霉菌的 代謝產(chǎn)物。 ⑵在生產(chǎn)和科研中，常選用處于 期的青霉菌作為菌種或研究材料，因?yàn)榇藭r(shí)的青霉菌代謝旺盛， 和 比較穩(wěn)定。 ⑶對(duì)青霉菌菌體生長(zhǎng)情況的測(cè)定：取一定體積的發(fā)酵液，經(jīng)離心分離、反復(fù)洗滌后， ，再計(jì)算發(fā)酵罐中菌體的總重量。

43、 解析：青霉菌屬于真菌，其代謝類型應(yīng)為異養(yǎng)需氧型，而青霉素作為它的代謝產(chǎn)物，并不是它生長(zhǎng)、繁殖所必需的，所以青霉素應(yīng)屬于次級(jí)代謝產(chǎn)物。在測(cè)定培養(yǎng)基上青霉菌菌體的生長(zhǎng)情況時(shí)，常用的方法有兩種：一種是測(cè)量青霉菌的細(xì)胞數(shù)目，另一種是測(cè)重量，取一定體積的發(fā)酵液，經(jīng)離心分離、反復(fù)洗滌后，稱菌體的濕重，或烘干后稱干重，再由此計(jì)算出其中的細(xì)胞總重量。在細(xì)菌生長(zhǎng)的四個(gè)主要時(shí)期中，因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)期的細(xì)菌代謝旺盛，個(gè)體的形態(tài)和生理特性比較穩(wěn)定，常作為生產(chǎn)用的菌種和科研的材料。 答案：⑴異養(yǎng)需氧型 次級(jí) ⑵對(duì)數(shù) 個(gè)體的形態(tài)生理特性 ⑶稱菌體的濕重（稱烘干后的重量） 【課堂演練】 一、 選擇

44、題 1．在一個(gè)“淀粉—瓊脂”培養(yǎng)基的5個(gè)圓點(diǎn)位置，分別用不同方法處理，將此實(shí)驗(yàn)裝置放在37℃恒溫箱中，保溫處理24h后，將碘液滴在培養(yǎng)基的5個(gè)圓點(diǎn)上，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于下表：（C） 淀粉圓點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)處理方法 碘液處理后的顏色反應(yīng) ① 新鮮唾液與鹽酸混合 藍(lán)黑色 ② 經(jīng)過煮沸的新鮮唾液 藍(lán)黑色 ③ 接種面包霉 棕黃色 ④ 只有新鮮的唾液 ？ ⑤ 只有一定濃度的蔗糖溶液 ？ 請(qǐng)指出④和⑤所發(fā)生的顏色反應(yīng)，以及③接種的面包霉的分泌物分別是 A．棕黃色、棕黃色、淀粉酶 B.藍(lán)黑色、棕黃色、麥芽糖酶 C．棕黃色、藍(lán)黑色、淀粉酶 D.棕黃色、藍(lán)黑色、麥芽

45、糖酶 2．實(shí)驗(yàn)測(cè)定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂塊平板上畫3條等長(zhǎng)的平行線（3條線均與下圖中的鏈霉素帶接觸），將平板置于37℃條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析以下敘述，不正確的是 （D） A．鏈霉素能阻止結(jié)核菌的生長(zhǎng) B．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)霍亂菌更有效 C．鏈霉素對(duì)結(jié)核菌比對(duì)傷寒菌更有效 D．鏈霉素可以用于治療傷寒病人 3.利用生物工程生產(chǎn)啤酒、味精、胰島素、酸奶的常用菌種分別是 A．酵母菌、枯草桿菌、大腸桿

46、菌、乳酸菌 B．酵母菌、大腸桿菌、青霉菌、乳酸菌 C．酵母菌、谷氨酸棒狀桿菌、大腸桿菌、乳酸菌 D．黃色短桿菌、酵母菌、大腸桿菌、乳酸菌 4．下列操作不屬于微生物的分離步驟的是 A． 稀釋 B．劃線或涂布 C．接斜面 D．培養(yǎng) 5．影響微生物生長(zhǎng)的主要環(huán)境因素是 A．陽光、溫度、水分 B．溫度、水分、PH C．水分、PH、氧 D．溫度、PH、氧 6.下列微生物的產(chǎn)物中沒有菌種特異性的一組是 A．氨基酸、核苷酸、多糖、色素 B. 多糖、脂類、維生素、抗生素、氨基酸 C．

47、核苷酸、多糖、維生素、毒素、抗生素 D．核苷酸、維生素、多糖、脂類、氨基酸 7．微生物代謝的人工控制是指 A.改變微生物的遺傳特性 B.控制發(fā)酵時(shí)的溫度 C.調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的pH，氧氣通入量 D.包括A、B、C三項(xiàng) 8．在微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定中，不可能發(fā)生的是 A.繁殖 B.生存斗爭(zhēng) C.種間斗爭(zhēng) D.種內(nèi)斗爭(zhēng) 9．與調(diào)整期長(zhǎng)短有關(guān)的因素中，可縮短調(diào)整期的一組是 ①用與菌種相同的培養(yǎng)基 ②營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基 ③穩(wěn)定期獲得的菌種 ④對(duì)數(shù)期獲得的菌

48、種 ⑤接種時(shí)間提前 ⑥接種量加大 ⑦接種量減小 ⑧接種種類加大 A、①③⑤⑦ B、②③⑤⑦ C、①④⑥ D、②④⑤⑥⑧ 10．微生物群體生長(zhǎng)善的測(cè)定方法可以是 ①測(cè)定樣品的細(xì)胞數(shù)目 ②測(cè)定次級(jí)代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量 ③測(cè)定培養(yǎng)基中細(xì)菌的體積 ④測(cè)定樣品的細(xì)胞重量 ⑤測(cè)定初級(jí)代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量 A.②④ B.①④ C.①③⑤ D.②③④ 二、非選擇題 11．下圖示酵母菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)模式和生長(zhǎng)曲線圖，據(jù)圖回答： (1)從細(xì)胞核的構(gòu)造看

49、，酵母菌屬于 生物，如果發(fā)現(xiàn)一種酵母菌細(xì)胞核中17條染色體，該酵母菌是 倍體。 (2)圖中(1)的結(jié)構(gòu)名稱為 。 (3)酵母菌細(xì)胞分裂的意義是( ) A. 產(chǎn)生新個(gè)體 B. 增加生產(chǎn)力 C. 增加變異性 D. 改變遺傳性 (4)用酵母菌制啤酒時(shí)，為保證發(fā)酵罐中有較多的酵母菌，必須先通入氧氣，達(dá)到一定數(shù)量后，則應(yīng)該密閉，以獲得大量的酒精，這充分說明酵母菌的異化作用類型是 。 (5)研究發(fā)酵罐中酵母菌的生長(zhǎng)狀況，常用取樣統(tǒng)計(jì)分析，判斷取樣先后順序的最簡(jiǎn)單的方

50、法是測(cè)定發(fā)酵罐中的 。 A. 氧氣量 B. 葡萄糖量 C. 酒精量 D. pH值 (6)欲收獲酵母菌或其代謝產(chǎn)物，應(yīng)選擇曲線中的 段。 (7)自然環(huán)境中的酵母菌屬于生態(tài)系統(tǒng)中的 成分。 12． (15分)(1)在錐形瓶?jī)?nèi)裝入一定量液體培養(yǎng)基，接人N0個(gè)乳酸菌之后密封，放在250C溫箱中連續(xù)培養(yǎng)若干小時(shí)，其間每30min測(cè)定一次菌數(shù)，測(cè)得數(shù)量變化曲線如下圖所示。請(qǐng)分析并回答問題： ①乳酸菌以 方式生殖，這代表 類

51、生物普遍具有的生殖方式。 ②用N表示總菌數(shù)，N0表示初始菌數(shù)，t表示增殖世代數(shù)，乳酸菌數(shù)量增長(zhǎng)的數(shù)學(xué)表達(dá)式為N=N02t(假設(shè)生長(zhǎng)條件理想穩(wěn)定)。當(dāng)在理想條件下乳酸菌每30min繁殖一代，按上式計(jì)算，當(dāng)N0=1000時(shí)，連續(xù)培養(yǎng)5h，總菌數(shù)可達(dá) 個(gè)。 ③在實(shí)際培養(yǎng)條件下，乳酸菌增長(zhǎng)速度與理想條件下乳酸菌增長(zhǎng)速度不同，如果5h前的總菌數(shù)等于活菌數(shù)，請(qǐng)?jiān)谏厦娴膱D中將5h后活菌數(shù)的變化趨勢(shì)用曲線表示出來。造成菌群密度變化的外界因素是 。 ④培養(yǎng)基中不斷產(chǎn)生的乳酸來自乳酸菌的 作用。 ⑤實(shí)驗(yàn)過

52、程中，為什么要在25℃的條件下進(jìn)行? 。 (2)某同學(xué)進(jìn)行了溫度對(duì)酶活性影響的研究，設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)： 實(shí)驗(yàn)步驟： ①取三支試管，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的可溶性淀粉溶液。 ②將試管分別放人25℃、60℃的水中和冰塊中，在三支試管中分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的淀粉酶溶液，兩支試管中的pH=6.8，第三支試管中的pH=4，搖勻后維持各自溫度5min。 ③在三支試管中各滴1滴碘液，并搖勻。觀察并記錄：(略) 結(jié)論：溫度過高或過低都影響酶的活性。 請(qǐng)回答： [1]該實(shí)驗(yàn)?zāi)芊竦贸錾鲜鰧?shí)驗(yàn)結(jié)論?

53、 。 [2]指出步驟中不正確之處并在此基礎(chǔ)上加以糾正或補(bǔ)充相應(yīng)的內(nèi)容。 。 13．下面是發(fā)現(xiàn)和研究青霉素的過程： 問題：在培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)青霉菌，在其周圍沒有細(xì)菌生

54、長(zhǎng)。沒有青霉菌的培養(yǎng)基內(nèi)布滿了細(xì)菌。 假設(shè)： 實(shí)驗(yàn)：把青霉菌放入培養(yǎng)液內(nèi)培養(yǎng)，一段時(shí)間后除去青霉菌，并用這種培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)菌，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。 結(jié)果：這種培養(yǎng)液阻止了細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。 結(jié)論：青霉菌可產(chǎn)生一種阻止細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)。 請(qǐng)回答： ⑴該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是 。 ⑵以上實(shí)驗(yàn)還不足以論證以上結(jié)論，請(qǐng)?jiān)谝陨蠈?shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，補(bǔ)充相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法。 答案： 1—5 CDCCD 6—10 DDCCB 11．(1)真核；單 (2)芽體 (3

55、)A (4)兼性厭氧型 (5)D (6)EF (7)分解者 12．(1)分裂生殖(或無性生殖) 原核(或單細(xì)胞) ②1024000 ③如下圖 (會(huì)繪曲線呈下降趨勢(shì)給分) 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少 ④無氧呼吸(或乳酸發(fā)酵) ⑤25℃時(shí)有利于酶的催化功能(或25oC 時(shí)酶的催化效率高) (2)[1]按此實(shí)驗(yàn)步驟不能得出以上實(shí)驗(yàn)結(jié)論 [2] ①試管上沒有做標(biāo)記，應(yīng)用字母(或數(shù)字)標(biāo)記，如三支試管分別標(biāo)A、B、C ②步驟①、②中加入試管中的兩種溶液應(yīng)有量的描述，如步驟①應(yīng)補(bǔ)充3％的可溶性淀粉溶液2mL． ③實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組未

56、遵循單一變量原則，兩組中存在酸堿度和溫度兩個(gè)變量，應(yīng)只有溫度一個(gè)變量，酸堿度應(yīng)一致pH都為6.8。 13．⑴青霉菌可能阻止了其他細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。 ⑵增加對(duì)照實(shí)驗(yàn)。具體方法為：將另一組相同的細(xì)菌放在未培養(yǎng)過青霉菌的，其他成分完成相同的培養(yǎng)液中，在完全相同的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察其生長(zhǎng)繁殖情況。 課題3 分解纖維素的微生物的分離 【導(dǎo)學(xué)誘思】 1．纖維素是 類物質(zhì)， 是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。 2．纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即 、 和

57、 ，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成 。正是在這三種酶的協(xié)同作用下，纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，同樣，也可以為人類所利用。 3．在做纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)過程中，如果沒有搖床，可以采用何種方法代替？ 4．篩選纖維素分解菌可以用 法，這種方法能夠通過 直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。 5．在土壤中取樣的方法有：① ；② 。 5．剛

58、果紅是一種 ，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。 思考： ①怎樣利用剛果紅的這一特點(diǎn)來篩選纖維素分解菌？ ②利用剛果紅染色的方法有幾種？各自的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ 6．分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程圖如下： → →梯度稀釋→ → 。 思考：⑴此流程圖與樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)流程圖有何異同？ ⑵為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？ ⑶將

59、濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 【疑難點(diǎn)撥】 1．分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程與稀釋液的取樣培養(yǎng)流程圖有何異同？ 它們的區(qū)別是：稀釋液的取樣流程圖是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本相同。 2．將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌的生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。 3．兩種

60、剛果紅染色法的比較 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過20年的歷史，在本課題中我們給出了兩種方法。方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜的問題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素

61、分解菌不易區(qū)分。 4．為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？ 在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。 【典例解析】 例1．有關(guān)谷氨酸發(fā)酵的敘述中正確的是 A．發(fā)酵中要不斷通入空氣 B．培養(yǎng)條件不當(dāng)將不能得到產(chǎn)品 C．?dāng)嚢璧奈ㄒ荒康氖鞘箍諝獬蔀樾∨? D．冷卻水可使酶活性下降 解析：進(jìn)行谷氨酸發(fā)酵的菌種是異養(yǎng)需氧型微生物，所以要在培養(yǎng)過程中不斷通入空氣，但是必須通入的是無菌空氣，普通空氣是不行的，容易造成雜菌污染。攪拌不但使空氣成為小氣

62、泡以增加培養(yǎng)基中的溶氧量，還能使培養(yǎng)基與菌種充分接觸，提高原料的利用率。在培養(yǎng)過程中，由于微生物的代謝產(chǎn)熱和機(jī)械磨擦生熱，會(huì)使培養(yǎng)基的溫度升高，高到一定程度，就會(huì)使酶的結(jié)構(gòu)和核酸的結(jié)構(gòu)遭到破壞，培養(yǎng)會(huì)因此而受到影響。降低溫度，是保證酶正?；钚缘臈l件之一而不會(huì)使酶的活性下降。當(dāng)培養(yǎng)條件不恰當(dāng)時(shí)，不能得到谷氨酸。如pH降低時(shí)將得到乙酰谷氨酰胺，溶氧低時(shí)將得到乳酸或琥珀酸。 答案：B 例2．溫度對(duì)發(fā)酵過程的影響，不正確的是 A．溫度過高，發(fā)酵周期縮短，產(chǎn)量降低 B．溫度不影響生物合成的途徑 C．溫度能影響菌種對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收 D．菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成所需的最適溫

63、度不一定相同 解析：解答此題需要從以下幾方面入手分析：第一，發(fā)酵過程需要適宜的溫度，如果溫度過高，酶很快失活，菌體衰老，發(fā)酵周期就會(huì)縮短，產(chǎn)量也會(huì)降低；第二，溫度能影響生物合成的途徑，這是因?yàn)樯锖铣蛇^程需要酶，酶的活性與溫度高低有關(guān)；第三，菌種吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一部分是通過主動(dòng)運(yùn)輸來完成的，需呼吸作用提供能量，這與溫度有關(guān)；第四，菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成需體內(nèi)旺盛的代謝作基礎(chǔ)，而用于生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物生成的酶不同，因此所需的最適宜的溫度也不一定相同。 答案：B 例3．（2005年北京卷）某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A，研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培

64、養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如下圖所示。請(qǐng)分析回答問題： ⑴培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是篩選 ，這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。 ⑵“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的 ，實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，由此推測(cè)“目的菌”的代謝類型是 。 ⑶培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量 的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使“目的菌”的數(shù)量 。 ⑷轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用 的方法接種，獲

65、得單菌落后繼續(xù)篩選。 ⑸若研究“目的菌”的生長(zhǎng)規(guī)律，將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，可采用 的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以 為縱坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。 ⑹實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行 處理后，才能倒掉。 解析：題干中首先說明了A是有機(jī)物，后來在培養(yǎng)基中雙增加了磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素，通過比較各培養(yǎng)瓶中A的多少，選出“目的菌”，由此還可推斷出“目的菌”所需碳源和氮源來自A，是異養(yǎng)型。獲得“目的菌”種后，選進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中及培養(yǎng)結(jié)束后注意滅菌。 答案： ⑴目的菌 選擇 ⑵化合物A 異養(yǎng)需氧

66、型 ⑶減少 增加 ⑷劃線 ⑸定期取樣“目的菌”數(shù)目的對(duì)數(shù) ⑹滅菌 【課堂演練】 1．下面是弗來明對(duì)青霉素的早期研究過程： 發(fā)現(xiàn)問題：在培養(yǎng)細(xì)菌的器具中發(fā)現(xiàn)一種青霉菌，在這種青霉菌的周圍有沒有其它細(xì)菌生存?為什么會(huì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象? 提出假設(shè)： 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：在液體中培養(yǎng)青霉菌后，考察這種液體對(duì)細(xì)菌增殖的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：培養(yǎng)液使細(xì)菌的增殖停止。 結(jié)論：下面幾項(xiàng)最適合作為該實(shí)驗(yàn)假設(shè)的是 A．青霉菌與細(xì)菌之間是共生關(guān)系 B．青霉菌污染了細(xì)菌生存的環(huán)境 C．青霉菌產(chǎn)生了對(duì)人體有益的物質(zhì) D．青霉菌能產(chǎn)生抑制細(xì)菌增殖的物質(zhì) 2．培養(yǎng)流感病毒時(shí)，應(yīng)選用 A．固體培養(yǎng)基 B．含有多種無機(jī)鹽的培養(yǎng)液 C．活的雞胚 D．無菌的牛肉湯 3．以下關(guān)于微生物對(duì)氧的需求的敘述中正確的是 A．產(chǎn)甲烷桿菌屬厭氧呼吸，但氧的存在不影響其生存 B．鏈球菌進(jìn)行厭氧呼吸，不能接觸空氣 C．黃色短桿菌在氧氣充足時(shí)才能產(chǎn)生谷氨酸 D．谷氨酸棒培育桿