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球蟲概述和球蟲病 球蟲病是艾美耳Eimeria球蟲寄各種畜禽引起的寄生蟲病 各種畜禽一般都有多種球蟲 有宿主特異性 動物之間不能互相感染 球蟲病可以導致家禽肉和蛋生產出現(xiàn)嚴重損失 寄生蟲在小腸內成倍增殖導致組織損傷 降低采食量和飼料中養(yǎng)分的吸收率 脫水和血液損失 球蟲病對養(yǎng)殖業(yè)造成的經濟損失是驚人的 僅雞球蟲病所造成的直接和間接經濟損失全世界每年約有8億美元 英國每年約有3800萬英鎊 美國每年約有4000萬美元 Shirleyetal 2005 MCDONALDandSHIRLEY 2009 SHARMANetal 2010 我國尚無此類統(tǒng)計資料 但據(jù)山東省農科院畜牧研究所內部資料 僅供參考 山東省2010年約養(yǎng)殖13億只雞 按雞球蟲病經濟損失世界平均值計算 0 02美元 只雞 我國僅山東一省每年由雞球蟲病造成的經濟損失約有2000萬美元 一 病原體艾美球蟲在分類上屬于原生動物門 孢子蟲綱 球蟲目 艾美科 艾美耳屬 我國全國各地常見球蟲有13種 孢子化卵囊含4個孢子囊 2個子孢子 艾美球蟲孢子囊模式圖1 極帽2 卵膜孔3 極粒4 孢子囊余體5 卵囊余體6 屈光小體 艾美耳球蟲超微結構1 極帽2 小線體3 棒狀體4 脂團5 食泡6 高爾基復合體7 蛋白體8 細胞核9 內質網10 線粒體 E exigua微小艾美耳球蟲E perforans穿孔艾美耳球蟲E piriformis梨型艾美耳球蟲E magna大型艾美耳球蟲E irresidua無殘艾美耳球蟲E intestinalis腸艾美耳球蟲E coecicola盲腸艾美耳球蟲E media中型艾美耳球蟲E stiedae兔肝艾美耳球蟲 E exigua微小艾美耳球蟲 E perforans穿孔艾美耳球蟲E piriformis梨型艾美耳球蟲 E magna大型艾美耳球蟲E irresidua無殘艾美耳球蟲 E intestinalis腸艾美耳球蟲E coecicola盲腸艾美耳球蟲 E media中型艾美耳球蟲E stiedae兔肝艾美耳球蟲 E flavescens黃艾美耳球蟲 艾美球蟲發(fā)育史各階段形態(tài) 子孢子 裂殖體 配子 裂殖子 艾美球蟲發(fā)育史各階段形態(tài) 未孢子化卵囊 孢子化卵囊 孢子化卵囊 二 生活史寄生部位 肝膽管上皮細胞 斯氏艾美耳球蟲致病力最強 能引起嚴重的肝球蟲病 其余13種寄生在腸粘膜上皮細胞 經裂體生殖 配子生殖和孢子生殖三個階段 前兩個階段在肝膽管上皮細胞或腸上皮細胞內進行 最后形成卵囊隨糞便排出體外 后一發(fā)育階段在外界環(huán)境中進行 合子 小配子體 小配子 大配子體 大配子 未孢子化卵囊 孢子化卵囊 子孢子 裂殖體 裂殖子 配子生殖 裂殖生殖 孢子生殖 形態(tài) 不同的發(fā)育期有不同的形態(tài) 未孢子化卵囊孢子化卵囊裂殖體裂殖子配子體配子子合子 孢子化卵囊 球蟲卵囊 Eimeriatenellaunsporulatedoocyst 球蟲裂殖體和裂殖子 Eimeriatenellamerozoitesinschizonts Eimeriatenellamerozoites 球蟲配子體 Eimeriatenellamicrogametocytesandmacrogametocyte 球蟲卵囊的鑒別要點 大小size內生性發(fā)育時間形狀shapeendogenousdevelopingtime顏色color孢子化時間極帽micropylecapsporulationtime卵膜孔micropyle宿主內外殘體residuum寄生部位栓體Stiedabody致病性囊壁oocystwall 球蟲的宿主特異性 球蟲對宿主有嚴格的選擇性 不同種的家畜有不同種的球蟲 互不交叉感染 不同種的球蟲又各有其固定的寄生部位 如雞的柔嫩艾美耳球蟲E tenella寄生于盲腸 毒害艾美耳球蟲E necatrix寄生于小腸的中1 3段 依球蟲的孢子化卵囊中有無孢子囊 孢子囊數(shù)目和每個孢子囊內所含子孢子的數(shù)目 可將球蟲分為不同的屬 泰澤屬 Tyxzzeria 卵囊內含8個子孢子 無孢子囊 主要寄生于鴨和鵝 其中毀滅泰澤球蟲 T perniciosa 對家鴨有嚴重致病性 溫揚屬 Wenyonella 1個卵囊內含4個孢子囊 每個孢子囊內含4個子孢子 主要寄生于鴨 其中菲萊氏溫揚球蟲 W philiplevinei 對家鴨有中等致病性 艾美耳屬 Eimeria 1個卵囊內含4個孢子囊 每個孢子囊內含2個子孢子 寄生于各種畜禽 牛以邱氏艾美耳球蟲E zurnii和牛艾美耳球蟲E bovis為最常見 致病性也最強 綿羊和山羊以阿氏艾美耳球蟲E arloigni和浮氏美耳球蟲E faurei為最普遍 兔以寄生于膽管上皮細胞內的斯氏艾美耳球蟲E stiedai為最普遍 危害最重 雞以柔嫩艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲致病性最強 常在雞群中引起爆發(fā)型球蟲病 致病性比較緩和的是堆型艾美耳球蟲 E acervulina 和巨型艾美耳球蟲E maxima 鵝以寄生于腎小管上皮細胞的截形艾美耳球蟲E truncata最有害 等孢屬Isospora 1個卵囊內含2個孢子囊 每個孢子囊內含4個子孢子 主要寄生于貓和犬 雞球蟲 世界各國已經記載的雞球蟲種類共有13種之多 我國已發(fā)現(xiàn)9種 不同種的球蟲 在雞腸道內寄生部位不一樣 其致病力也不相同 柔嫩艾美耳球蟲 Eimeriatenella 寄生于盲腸 致病力最強 毒害艾美耳球蟲 E necatrix 寄生于小腸中三分之一段 致病力強 巨型艾美耳球蟲 E maxima 寄生于小腸 以中段為主 致病力強 堆型艾美耳球蟲 E acervulina 寄生于十二指腸及小腸前段 布氏艾美耳球蟲 E brunetti 寄生于小腸后段 盲腸根部 變位艾美耳球蟲 E mivati 寄生于小腸 直腸和盲腸 有一定的致病力 和緩艾美耳球蟲 E mitis 寄生在小腸前段 致病力較低 哈氏艾美耳球蟲 E hagani 寄生在小腸前段 致病力較低 早熟艾美耳球蟲 E praecox 寄生在小腸前段 致病力較低 雞球蟲 E acervulinacompletesitsentirecycleintheduodenum butmayspreadtotheileumduringsevereinfection E tenellaislocatedalmostexclusivelyinthecaeca Itmayextendtobothsidesofthejunctionofthecaecaduringsevereinfections E necatrixperformsitsschizogonyinthejejunum ileumanditsgamogonyinthecaeca E praecoxcolonisestheduodenumandthejejunum E mitiscolonisesmainlytheileum E maximainfectsthemiddleintestine jejunumandbeginningoftheileum oneithersideofMeckel sdiverticulum butmostoftenascendsintotheduodenum E brunettidescendsthelengthoftheintestineduringinfectionandislocatedpreferentiallyintherectumandcloaca Wheninfectionsaresevere itmayascendtothedistalpartoftheileumandtheproximalpartofthecaeca 9種雞球蟲鑒別 雞球蟲孢子化溫度25 28 有極粒 無極帽 外殘體不明顯 巨型艾美耳球蟲無內殘體 堆形艾美耳球蟲 變位艾美耳球蟲有卵膜孔 雞球蟲 兔球蟲 CoudertP DLicois FDrouet Viard FProv t 2000 in Enfermedadesdelconejo TomoII 219 34 兔球蟲 E stiedae兔肝艾美爾球蟲E exigua微小艾美爾球蟲E perforans穿孔艾美爾球蟲E piriformis梨型艾美爾球蟲E magna大型艾美爾球蟲E irresidua無殘艾美爾球蟲E intestinalis腸艾美爾球蟲E coecicola盲腸艾美爾球蟲E media中型艾美爾球蟲 兔球蟲 牛球蟲 牛球蟲 亞球形艾美耳球蟲E subspherica牛艾美耳球蟲E bovis柱狀艾美耳球蟲E cylindrica邱氏艾美耳球蟲E zuernii阿拉巴馬艾美耳球蟲E alabamensis橢圓艾美耳球蟲E ellips加拿大艾美耳球蟲E canadensis奧博艾美耳球蟲E auburnensis 牛球蟲 牛球蟲 牛球蟲 生活史 球蟲生活史可分為三個階段 無性生殖階段 在寄生部位的上皮細胞內 以裂殖生殖法增殖 裂殖體形成大量裂殖子 使上皮細胞遭到破裂 逸出裂殖子 重新進入其它上皮細胞 再進行裂殖 這樣反復幾代后 使大量上皮細胞遭到嚴重破壞 引起疾病突然發(fā)作 有性生殖階段 裂殖生殖2 3代后 形成大小配子體 以配子生殖皮 形成大配子 雌性 和小配子 雄性 雌雄配子結合形成合子 孢子生殖階段 合子迅速形成被膜后即為卵囊 隨糞便排出后 在溫度適宜情況下 在卵囊內發(fā)育形成孢子囊和子孢子 含有成熟的子孢子的卵囊為感染性卵囊 有性生殖和無性生殖都在體內進行 稱為內生性發(fā)育 孢子生殖在外界環(huán)境中完成 稱為外生性發(fā)育 生活史 雞球蟲感染階段為孢子化卵囊 經糞 口途經傳播 每個孢子化卵囊內含4個孢子囊 sporocysts 每個孢子化卵囊包含2個感染性子孢子 孢子化卵囊經污染食物及飲水進如雞胃腸系統(tǒng)后 釋放出感染性子孢子 子孢子侵入腸上皮細胞 經數(shù)代裂體生殖轉為配子生殖形成卵囊 卵囊落入腸腔隨糞便排入外界環(huán)境中 卵囊在潮濕的環(huán)境中 在適當溫暖和氧氣條件下 經孢子化成為具感染性的孢子化卵囊 流行病學 在適宜條件下 球蟲的增殖反傳播速度相當驚人 甚至有些病例在沒有任何明顯癥狀情況下 突然死亡 球蟲沒有中間宿主 可以直接發(fā)育 隨糞便排出的卵囊 在條件適宜的情況下 經2 3天發(fā)育 就成為感染性卵囊 被宿主吞食后 重新在其體內生殖 所以流行甚廣 很難將球蟲徹底清除 在宿主采食時 將球蟲感染性卵囊隨食物吞入胃腸內 囊壁在胃酸和機械作用下被破壞 孢子囊被釋放出來到十二指腸 子孢子被胰液和膽汁激活出囊 然后到寄生部位侵入上皮細胞發(fā)育增殖 當宿主免疫力因某些原因降低時 球蟲則乘機大肆增殖起來 引起球蟲病大發(fā)作 球蟲不但在畜禽舍環(huán)境中無處不有 而且對藥物產生耐藥性又特別快 因此同一種有效藥物 隨使用時間的延長 就會作用變小 藥量增大 直至最后無效 致病與危害 土壤 飼料或飲水中的感染性卵囊被畜禽吞入后 子孢子在消化道內脫囊逸出 進入上皮細胞吸取營養(yǎng) 長成第一代裂殖體 經分裂而成為第一代裂殖子 每個裂殖子進入一個新的上皮細胞 再發(fā)育為第二代裂殖體 并再分裂產生第二代裂殖子 重新進入新的上皮細胞內生長發(fā)育 如此不斷反復 可使上皮細胞遭受嚴重破壞 導致疾病發(fā)作 經兩個或多個世代后 一部分裂殖子發(fā)育為大配子母細胞 最后發(fā)育為大配子 另一部分發(fā)育為小配子母細胞 繼而生成許多帶有2根鞭毛的小配子 活動的小配子鉆入大配子體內 受精 成為合子 合子迅速由被膜包圍而成為卵囊 隨糞便排出體外 卵囊多呈卵圓形 橢圓形或近似球形 長度多為11 48微米 寬度為9 35微米 初排出的卵囊內含1個合子 在適宜的溫 濕度條件下完成孢子發(fā)育后便具有感染性 糞便檢查發(fā)現(xiàn)卵囊是診斷本病的一種重要方法 癥狀 雞球蟲病以柔嫩艾美耳球蟲的致病力最強 寄生于盲腸 俗稱盲腸球蟲病 21 50日齡雛雞多發(fā) 病初羽毛豎立 縮頸 呆立 以后由于腸上皮細胞的大量破壞和機體中毒 病情轉重 出現(xiàn)共濟失調 腹瀉帶血等癥狀 死亡率高 甚至全群覆沒 兔球蟲病以斷乳后到12周齡幼兔最多見 中國曾報道7種兔球蟲病原體 除斯氏艾美耳球蟲寄生于膽管上皮外 其余的均寄生于腸上皮細胞 病兔精神不振 伏臥不動 腹瀉和便秘交替 腹圍膨大 肝受損害時可發(fā)現(xiàn)肝腫大 可視粘膜輕度黃染 末期可出現(xiàn)神經癥狀 如痙攣 麻痹等 多數(shù)極度衰弱而死 死亡率有時可達80 以上 癥狀 癥狀 牛球蟲病潛伏期約為2 3周 犢牛一般為急性經過 病程為10 15天 當牛球蟲寄生在大腸內繁殖時 腸黏膜上皮大量破壞脫落 黏膜出血并形成潰瘍 這時在臨床上表現(xiàn)為出血性腸炎 腹痛 血便中常帶有粘膜碎片 約1周后 當腸黏膜破壞而造成細菌繼發(fā)感染時 則體溫可升高到40 41 前胃遲緩 腸蠕動增強 下痢 多因體液過度消耗而死亡 慢性病例 則表現(xiàn)為長期下痢 貧血 最終因極度消瘦而死亡 癥狀 犬球蟲病是由孢子蟲綱球蟲目艾美耳科中的等孢屬球蟲引起的 臨床上主要以血便 貧血 衰弱和食欲減遲為特征 本病的病原體是等孢屬球蟲 其特點是卵囊內的胚孢子形成兩個孢子囊 每個孢子囊內含有4個子孢子 此屬球蟲通常寄生于犬 還有人 貓及其他肉食動物 的小腸粘膜上皮細胞內 小的只有5 10 m 它以無性繁殖許多代 裂體生由 產生很多新的個體 裂體芽孢 經過若干裂體生殖后 代之以有性生殖 形成很多大孢子和小孢子 大 小孢子進入腸管內 并在此處發(fā)生結合 于受精后大孢子被覆以雙層膜變?yōu)槁涯?隨糞便排出體外 鵪鶉球蟲病由艾美科球蟲寄生于鵪鶉腸道引起的 多發(fā)生于1 2月齡鵪鶉 侵襲鵪鶉的球蟲有6種艾美耳屬球蟲和一種溫揚屬球蟲 其中致病力較強的有巴氏艾美球蟲 鵪鶉艾美球蟲和分散艾美球蟲 卵囊呈橢圓形 孢子化時間為24小時 潛在期5 6天 病鶉下痢 糞便呈黃褐色或灰黃色黏液性 混有血液 幼鶉發(fā)育不良 成年鶉產蛋停止 極度消瘦 扎堆 臥倒不起 最后因衰竭而死亡 病程7 20天 病變?yōu)樾∧c腫脹 漿膜面呈奶酪樣色澤 空腸 回腸呈彌漫性出血和充血 病理變化 兔腸球蟲病病變可見小腸及盲腸血管充血 粘膜充血出血 病程長者粘膜上有許多白色結節(jié) 內含卵囊 病理變化 病理變化 兔肝球蟲病可見肝表面及實質內有多量白色或淡黃色粟粒大至豌豆大病灶 內含各發(fā)育階段的球蟲 病理變化 病雞消瘦 雞冠與粘膜蒼白 內臟變化主要發(fā)生在腸管 病變部位和程度與球蟲的種別有關 柔嫩艾美耳球蟲主要侵害盲腸 兩支盲腸顯著腫大 可為正常的3 5倍 腸腔中充滿凝固的或新鮮的暗紅色血液 盲腸上皮變厚 有嚴重的糜爛 病理變化 巨型艾美耳球蟲損害小腸中段 可使腸管擴張 腸壁增厚 內容物粘稠 呈淡灰色 淡褐色或淡紅色 病理變化 堆型艾美耳球蟲多在上皮表層發(fā)育 并且同一發(fā)育階段的蟲體常聚集在一起 在被損害的腸段出現(xiàn)大量淡白色斑點 病理變化 毒害艾美耳球蟲損害小腸中段 使腸壁擴張 增厚 有嚴重的壞死 在裂殖體繁殖的部位 有明顯的淡白色斑點 粘膜上有許多小出血點 腸管中有凝固的血液或有葫蘿卜色膠凍狀的內容物 病理變化 哈氏艾美耳球蟲損害小腸前段 腸壁上出現(xiàn)大頭針頭大小的出血點 粘膜有嚴重的出血 若多種球蟲混合感染 則腸管粗大 腸粘膜上有大量的出血點 腸管中有大量的帶有脫落的腸上皮細胞的紫黑色血液 病理變化 牛球蟲主要寄生在小腸下段和整個大腸的上皮細胞內 在裂殖生殖階段使粘膜上皮遭受大量破壞 粘膜下層出現(xiàn)淋巴細胞浸潤 并發(fā)生潰瘍和出血 腸粘膜被大量破壞后 造成了有利于腸道腐敗細菌的生長繁殖的環(huán)境 其所產生的毒素和腸道中的其他有毒物質被機體吸收后 導致中樞神經系統(tǒng)和各個器官的機能失調 剖檢主要病變 小腸有出血性炎癥 淋巴濾泡腫大突出 有白色和灰色的小病灶 同時這些部們常常出現(xiàn)直徑4 15毫米的潰瘍 其表面覆有凝乳樣薄膜 腸內容物呈現(xiàn)褐色 帶惡臭 有纖維性薄膜和粘障碎片 腸系膜淋巴結腫大 診斷 發(fā)病季節(jié)臨床癥狀病理變化病原檢查 診斷 診斷 診斷 防治 球蟲病以預防為主 對雞球蟲病常用作飼料添加劑的預防藥物有氨丙啉 球痢靈和可愛丹等 抗生素類有莫能霉素 拉薩霉素和鹽霉素等 每天給雛雞吞服少量感染性卵囊 可使之獲得免疫力 對兔球蟲病可用磺胺類 如磺胺喹噁林 復方磺胺二甲氧嘧啶和磺胺噻唑等進行防治 不光是球蟲 其他疾病也一樣 最好以預防為主 因為家養(yǎng)寵物的抗病能力比較弱 加上有些針劑副作用很強 會對其身體造成二次傷害 得不償失 球蟲病發(fā)病很突然 急性發(fā)病后只能采取注射的方法急救 需要有一定的專業(yè)知識才能操作 防治 雞氯苯胍 預防按30 33mg kg濃度混飼 連用1 2個月 治療按60 66mg kg混飼3 7d 后改預防量預以控制 氯羥吡啶 可球粉 可愛丹 混飼預防濃度為125 150mg kg 治療量加倍 育雛期連續(xù)給藥 氨丙啉 可混飼或飲水給藥 混飼預防濃度為100 125mg kg 連用2 4周 治療濃度為250mg kg 連用1 2周 然后減半 連用2 4周 應用本藥期間 應控制每千克飼料中維生素B1的含量以不超過10mg為宜 以免降低藥效 用加強氨丙啉預防 按66 5 133mg kg濃度混飼 治療濃度加倍 強效氨丙啉和特強效氨丙啉的用法同加強氨丙啉 但產蛋雞限用 硝苯酰胺 球痢靈 混飼預防濃度為125mg kg 治療濃度為250 300mg kg 連用3 5d 呋喃唑酮 痢特靈 可混飼或飲水給藥 預防濃度為100 200mg kg 連用1周 停藥2 3d 如此重復使用 治療濃度為300 400mg kg 連用1周 再改用預防量 使用本藥必需注意與飼料或飲水混合均勻 莫能霉素 預防按80 125mg kg濃度混飼連用 與鹽霉素合用有累加作用 鹽霉素 球蟲粉 優(yōu)素精 預防按60 70mg kg濃度混飼連用 奈良菌素 預防按50 80mg kg濃度混飼連用 與尼卡巴嗪合用有協(xié)同作用 馬杜拉霉素 抗球王 杜球 加福 預防按5 6mg kg濃度混飼連用 防治 兔 磺胺喹惡啉 預防用2 萬濃度飲水 連用3 4周 治療用3 萬濃度飲水或混飼 磺胺氯吡嗪 三字球蟲粉 預防按2 萬濃度飲水 供斷奶仔兔飲用 連用30曰 藥液最好當曰配制 當曰用完 發(fā)病時治療量為3 千濃度 磺胺甲基異惡唑 新諾明 和三甲氧芐氨嘧啶 按5 1混合 治療量按4 萬濃度混料飼喂 連用7曰 必要時停3曰再用7曰 二硝苯酰胺 球痢靈 將此藥與3倍量磷酸鈣一同研細 配成25 的混合物 預防以1 25 萬濃度劑量拌料飼喂 治療以2 5 3 萬濃度混飼 連用3 5曰 莫能霉素預防按0 2 萬濃度混飼 治療按0 5 萬濃度混飼 對球蟲病的治療應注意以下幾點 其一 早期用藥 晚期效果不好 其二 輪換用藥 一般一種藥用3 6個月改換其它藥 但不能換同一類型的藥 如不能從一種磺胺藥換成另一種磺胺藥 其三 應注意對癥治療 采取輔助療法 如補液 補充維生素K 補充維生素A等 肝型球蟲病 肝腫大 表面有灰白色或淡黃色結節(jié) 腸出血 有白色小點 肝臟結節(jié)壓片 球蟲卵囊 防治 牛磺胺二甲嘧啶 SM2 每千克體重0 1克 內服 每天一次 連用3 7天 如配合使用酞?；前粪邕?PST 每千克體重0 18克內服 效果更好 氨丙啉 每千克體重25 50毫克 每天一次 連用5 6天 林可霉素 每天每頭牛1克 混入飲水中飲用 連用21天 除治療用藥外 貧血嚴重時 應考慮輸血 并結合應用止瀉 強心和補液等對癥療法 雞球蟲病防治現(xiàn)狀 以前主要是用化學藥物預防和控制雞球蟲病 然而 由于球蟲極易快速產生抗藥性 長期大量用藥導致了抗藥蟲株的出現(xiàn) 要求藥物的劑量和種類不斷增加 不僅造成生產成本的提高 還造成產品中的藥物殘留問題 抗藥蟲新藥物開發(fā)速度遠落后于球蟲產生抗藥性的速度 而且更重要的是 隨著消費者對雞蛋肉產品質量的不斷提高 一些抗藥蟲藥物已經或將被禁用 長期以來 科學工作者一直尋求替代藥物的方法來防治雞球蟲病 抗雞球蟲疫苗無疑是最好的選擇 經過科學工作者數(shù)十年的不懈努力 多種雞球蟲疫苗已被研制開發(fā)出來 經注冊的商業(yè)化雞球蟲疫苗已有十幾種之多 近年來 越來越多的雞球蟲疫苗用于養(yǎng)雞業(yè)生產中 取得了不錯的效果 雞球蟲病的疫苗 目前用于養(yǎng)雞業(yè)生產中的注冊的商業(yè)雞球蟲疫苗全部為活苗 分兩類 雞球蟲野株活苗和雞球蟲減毒活苗 雞球蟲野株活苗一般是由幾種主要雞球蟲 Eimeriatenella E necatrix E maxima E acervulina 野株卵囊混合物 利用雞自然感染雞球蟲后可產生免疫保護力抵抗同種球蟲的再感染的特性 多次低劑量接種雞 使其產生對雞球蟲免疫保護力 達到預防雞球蟲病的目的 減毒活苗是通過方法將雞球蟲的致病力減弱而又能保留其免疫原性 作為疫苗接種雞后 可引起雞輕度感染而不發(fā)病 同時又能有效的刺激宿主免疫系統(tǒng)產生免疫保護力 抵抗同種球蟲的再感染 近年來 越來越多地區(qū)和國家養(yǎng)雞業(yè)開始使用雞球蟲減毒活苗 或單獨使用或和抗藥蟲藥物配合使用 既大量降低了抗藥蟲藥物的用量 又提高了防治效果和產品質量 預示疫苗將成為防治雞球蟲病的主要手段 雞球蟲病的疫苗 現(xiàn)用于養(yǎng)雞業(yè)注冊的商業(yè)雞球蟲減毒活疫苗多是經雞或雞胚連續(xù)傳代后選育出的早熟蟲株 每一次傳代中最早熟蟲株被選出 多次連續(xù)傳代后減少了一到兩個裂體生殖世代 因此在雞體內的內生性發(fā)育時間大大縮短 因而其致病力減弱 此類減毒活苗保持了和野株活苗相當?shù)拿庖咴?而在安全性上大大優(yōu)于野株活苗 由于其致病力輕微 即使在使用時雞只接受到的劑量不均 也不會造成接受到大劑量的雞發(fā)病 現(xiàn)用于養(yǎng)雞業(yè)在生產中的此類減毒活苗有Paracoxs ScheringPlough UK Livacoxs Biopharm CzechRepublic Eimervax BiopropertiesPty Australia EimerivacPlus 廣東省農科院 盡管減毒活苗和野株活苗比已有很大的改善 但仍有很多局限性 其一明顯的缺點為儲存期過短 活苗必須在使用前保持活性才有效 一般情況下 疫苗從生產到使用 中間有消售 運輸 儲存等諸多環(huán)節(jié) 需一定的時間 如疫苗的儲存期過短 會造成生產上的不便 甚至可能會影響其效果 其最大的缺點為生產成本太高 因為此類減毒活苗必需用雞來生產 造成了其生產成本過高 從而限制了其在生產中的廣泛應用 另外 此類減毒活苗仍有一定的致病性 對接種雞的生產力有一定影響 現(xiàn)用雞球蟲活疫苗的及其缺點 約50多年前 第一個商業(yè)雞球蟲野株活苗 Coccivac Schering Plough USA 問世 并迅速在美國 加拿大等北美國家推廣 以后又有幾種同類改良疫苗如Immucox VetechLaboratories Canada ADVENT NovusInternational USA NobilisCOXATM Intervet Netherlands 等取得一定的成功 現(xiàn)在仍在使用 雖然這類活苗有成本低 免疫保護力強等優(yōu)點 但由于由野株強毒組成 接種雞都會有一定程度的雞球蟲感染 使其生產力輕微下降 另外 接種雞還會向外界環(huán)境中排泄球蟲卵囊 污染的環(huán)境有可能成為雞球蟲病暴發(fā)的感染源 這類活苗如使用管理不當 可引起雞球蟲病暴發(fā) 所以 這類活苗趨于被淘汰 雞球蟲基因 重組 亞單位疫苗的前景 盡管雞球蟲活疫苗已越來越廣泛地被應用于養(yǎng)雞業(yè)生產中 但由于其自身特性造成的不可克服的缺點 極大的限制了其普及應用 遠遠不能滿足養(yǎng)雞業(yè)需求 科學工作者一直尋求效果更好 制備更簡單 成本更低廉 應用更安全的雞球蟲疫苗 隨著現(xiàn)代生物技術的不斷提高 雞球蟲基因 DNA疫苗 重組疫苗及亞單位疫苗的研究越來越引起人們的重視 此類疫苗在應用安全 制備簡單 成本低廉方面比活疫苗有不可比擬的優(yōu)勢 從長遠的觀點看 基因 重組 亞單位疫苗必將取代活疫苗成為新一代球蟲疫苗 我國在雞球蟲基因 重組疫苗的研究領域位于世界前列 2004年Wu等 Wuetal 2004 將柔嫩艾美耳球蟲的TA4基因克隆進表達載體pcDNA3 1內 作為基因疫苗注射到雞肌肉內 轉染到肌細胞后載體表達TA4抗原 產生了一定程度的 免疫保護力 最近 南京農大獸醫(yī)學院李湘瑞實驗室對MZ5 7 cSZ 2 IL 2 IFN r等基因疫苗的作用效果等進行了一系列研究 結果令人鼓舞 在重組疫苗的研究中 中國農大的丁軍等 浙江大學的杜愛芳等 以及吉林大學的張西辰實驗室也得到了可喜的成果 盡管如此 此類疫苗距有效防治雞球蟲病的要求相差依然甚遠 究其主要原因 關鍵還是現(xiàn)用于制備疫苗球蟲蛋白質的免疫原性過低 只能誘導宿主產生部分免疫保護力 最近許多研究采用多種方法來試圖提高此類疫苗的免疫保護效果 如應用細胞因子 淋巴因子及干擾素作為佐劑 利用基因疫苗或微生物表達的重組疫苗改善疫苗輸送途徑 利用益生菌誘導宿主產生非特異性免疫力等 但這些措施不能從根本上提高改善疫苗的免疫原性 所以從生產的角度講效果有限 基因致變優(yōu)化疫苗的原理 根據(jù)達爾文的生物進化理論 生命的多樣性是在基因隨機突變和自然選擇下產生的 也就是說 基因在自然條件下可以發(fā)生隨機突變 然后利于生物生存的基因被選擇延續(xù)下來 根據(jù)這一理論 科學家門利用現(xiàn)代分子生物學技術 在實驗室條件下將這一過程大大加快和縮短 建立了多種體外人工誘導基因致變基因的方法 并成功的應用于多個領域 如改善酶功能 提高癌細胞抗體的活性 改善提高病毒蛋白質的抗原性等 最簡單常用又證明可靠有效的是易錯PCR ErrorpronePCR epPCR 產生的隨機致變 該方法利用一些聚合酶缺乏校對功能而易導致擴充錯誤的特性 對DNA進行隨機致變 基因致變優(yōu)化疫苗 針對現(xiàn)有雞球蟲蛋白質抗原免疫原性弱 宿主特異性強 以及一定的地區(qū)性差異的缺點 擬采用基因定點致變結合隨機致變技術 對編碼蛋白質抗原的基因進行人工誘導變異進化 誘變的基因則引起相應蛋白質的氨基酸序列的度的改變 有些還可能會引起蛋白質構型的輕微改變而造成抗原表位 epitope 差異 從而引起蛋白質免疫原性的改變 然后篩選出理想的蛋白質制備疫苗 基因致變優(yōu)化疫苗的優(yōu)點 和活疫苗及以誘變前蛋白質為基礎制備的各種疫苗相比 用人工誘變的蛋白質制備的疫苗有以下優(yōu)點 1 抗原性強 按設計被誘變蛋白質的免疫原性可提高幾到幾十甚至幾百倍 且宿主特異性及地區(qū)性異差異消失或減弱 可望使免疫雞 產生完全或大部免疫保護力 抵抗多種雞球蟲的感染 且無地區(qū)性差異 2 抗原性穩(wěn)定 蛋白質抗原在真菌內表達 自然條件下變異的速度極慢 真菌和球蟲同為單細胞真核生物 蛋白質表達后的處理機制相似 由真菌表達球蟲蛋白質最接近其自然狀態(tài) 3 安全 不會引起宿主的感染發(fā)病和副作用 且不會污染環(huán)境 無公害 4 成本低 蛋白質由真菌表達 不需用雞來生產 成本極低 5 制備簡單快速 本研究使用的模型真菌可長期保存 生長周期短 培養(yǎng)簡單 一旦需要 可于極短時間內起動生產 便于應急 6 使用方便 可用于制備多種形式的疫苗 如由宿主表達的DNA疫苗 由微生物表達攜帶的重組疫苗及亞單位疫苗等 球蟲病研究面臨的挑戰(zhàn) Aboutatleast10yearsbehindotherApicomplexanparasites e g Toxoplasma Plasmodium etc FewstudiesonEimeriatransfectionSofar nocompletegeneknockoutreported nohomologousmutantcreatedyetUnabletobeculturedcontinueouslyinvitro transfectedparasitesmusttobescreenedinvivoSingleinfectionrout 病理變化判定 Score0 4Score0 Nomacroscopiclesion Thewallisthinandpresentscharacteristiclongitudinalgroovesandmucousalfolds Thecontentsarehomogeneousandcreamyanddonotcontainanyparticles Thecolourischestnut 病理變化判定 Score1 Somepetechiaearescatteredonthecaecalwall Thecaecalcontentsarenormal Thepetechiaearemorevisibleontheserousmembranethanonthemucousalside 病理變化判定 Score1 Somepetechiaearescatteredonthecaecalwall Thecaecalcontentsarenormal Thepetechiaearemorevisibleontheserousmembranethanonthemucousalside 病理變化判定 Score2 Thelesionsaremorenumerousandthereisbloodinthecaecalcontents Thecaecalwallisslightlythickened Normalcaecalcontentsarepresent 病理變化判定 Score2 Thelesionsaremorenumerousandthereisbloodinthecaecalcontents Thecaecalwallisslightlythickened Normalcaecalcontentsarepresent 病理變化判定 Score3 Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent Thecaecalwallsaregreatlythickened Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared 病理變化判定 Score3 Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent Thecaecalwallsaregreatlythickened Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared 病理變化判定 Score3 Alargequantityofbloodorcaecalplugsispresent Thecaecalwallsaregreatlythickened Thefaecalcontentshavepracticallydisappeared 病理變化判定 Score4 Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs Faecaldebrisisnolongervisible itisenclosedinthecaseousplugs Score4isassignedtodeadfowl 病理變化判定 Score4 Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs Faecaldebrisisnolongervisible itisenclosedinthecaseousplugs Score4isassignedtodeadfowl 病理變化判定 Score4 Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs Faecaldebrisisnolongervisible itisenclosedinthecaseousplugs Score4isassignedtodeadfowl 病理變化判定 Score4 Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs Faecaldebrisisnolongervisible itisenclosedinthecaseousplugs Score4isassignedtodeadfowl 病理變化判定 Score4 Thecaecalwallisverydistendedwithbloodorlargecaseousplugs Faecaldebrisisnolongervisible itisenclosedinthecaseousplugs Score4isassignedtodeadfowl 病理變化判定 Score1 Thewhitepatchesarescatteredandconfinedtotheduodenum Theycontainoocystsintheprocessofformation Theselesionsareelongated transversalandata90degreeangletothemainaxisoftheintestineliketherungsofaladder Theselesionsmaybeseenontheserousmembraneandmucousmembraneoftheduodenum Theremaybeamaximumofupto5lesionspercm2 Aninfectionscored1hasnoimpactonzootechnicalperformancebutcausesslightdiscolorationoftheserousmembraneanddepigmentationoftheskininyellowchickens 病理變化判定 Score1 Thewhitepatchesarescatteredandconfinedtotheduodenum Theycontainoocystsintheprocessofformation Theselesionsareelongated transversalandata90degreeangletothemainaxisoftheintestineliketherungsofaladder Theselesionsmaybeseenontheserousmembraneandmucousmembraneoftheduodenum Theremaybeamaximumofupto5lesionspercm2 Aninfectionscored1hasnoimpactonzootechnicalperformancebutcausesslightdiscolorationoftheserousmembraneanddepigmentationoftheskininyellowchickens 病理變化判定 Score2 Thelesionsaremuchclosertogetherbutnotcoalescent theymayextendto20cmbelowtheduodenumin3 week oldchicks Theintestinalwallsarenotthickened Thecontentsofthedigestivetractarenormal Aslightreductioninweightgainmaybeobserved 病理變化判定 Score2 Thelesionsaremuchclosertogetherbutnotcoalescent theymayextendto20cmbelowtheduodenumin3 week oldchicks Theintestinalwallsarenotthickened Thecontentsofthedigestivetractarenormal Aslightreductioninweightgainmaybeobserved 病理變化判定 Score3 Thelesionsaremorenumerous andsmall Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckel sdiverticulum Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption hencetheappearanceofdiarrhoea thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance 病理變化判定 Score3 Thelesionsaremorenumerous andsmall Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckel sdiverticulum Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption hencetheappearanceofdiarrhoea thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance 病理變化判定 Score3 Thelesionsaremorenumerous andsmall Theybecomecoalescentandthemucousmembraneappearstobecoveredwithacoating Theintestinalwallisthickenedandthecontentsareliquid ThelesionsmayextendtothediverticulumoftheyolksacorMeckel sdiverticulum Thechangesintheintestinalwallresultindisordersofabsorption hencetheappearanceofdiarrhoea thelossofcolourintheserousmembraneandconsequencesforzootechnicalperformance 病理變化判定 Score4 Themucousmembraneisgreyish Thelesionsformcompletelycoalescentcolonies Congestionmaybeconfinedtolittlepetechiaeor duringverysevereinfections theentiremucousmembranemaybebrightred Theindividuallesionsintheupperpartoftheintestinecannolongerbedistinguished Thetypicalladderrunglesionsappearinthemiddlepartoftheintestine Theintestinalwallsaregreatlythickened andtheintestineisfilledwithacreamyexudatewhichcontainsalargenumberofoocysts Score4isassignedtochickswhichdieofcoccidiosis 病理變化判定 Score4 Themucousmembraneisgreyish Thelesionsformcompletelycoalescentcolonies Congestionmaybeconfinedtolittlepetechiaeor duringverysevereinfections theentiremucousmembranemaybebrightred Theindividuallesionsintheupperpartoftheintestinecannolongerbedistinguished Thetypicalladderrunglesionsappearinthemiddlepartoftheintestine Theintestinalwallsaregreatlythickened andtheintestineisfilledwithacreamyexudatewhichcontainsalargenumberofoocysts Score4isassignedtochickswhichdieofcoccidiosis 病理變化判定 Score1 Smallredpetechiaemayappearontheserousmembraneofthemiddleintestine Thereisnodistensionorthickeningoftheintestine althoughsmallquantitiesoforangemucousmayappear 病理變化判定 Score1 Smallredpetechiaemayappearontheserousmembraneofthemiddleintestine Thereisnodistensionorthickeningoftheintestine althoughsmallquantitiesoforangemucousmayappear 病理變化判定 Score2 Theserousmembranemaybepunctuatedbynumerousredpetechiae Theintestinemaybefulloforangemucousandmayormaynotbedistended Theintestinalwallisthickened 病理變化判定 Score2 Theserousmembranemaybepunctuatedbynumerousredpetechiae Theintestinemaybefulloforangemucousandmayormaynotbedistended Theintestinalwallisthickened 病理變化判定 Score3 Theintestineisdistendedandthewallisthickened Themucousmembraneisroughandtheintestinalcontentscontainpinpointclotsandmucous 病理變化判定 Score3 Theintestineisdistendedandthewallisthickened Themucousmembraneisroughandtheintestinalcontentscontainpinpointclotsandmucous 病理變化判定 Score4 Theintestinalwallmaybedistendedthroughoutalmostitsentirelength Theintestinescontainnumerousbloodclotsanddigestedredbloodcellswhichgivethemacharacteristiccolourandputridodour thewallisgreatlythickened Score4isgiventodeadchickens 病理變化判定 Score4 Theintestinalwallmaybedistendedthroughoutalmostitsentirelength Theintestinescontainnumerousbloodclotsanddigestedredbloodcellswhichgivethemacharacteristiccolourandputridodour thewallisgreatlythickened Score4isgiventodeadchickens 病理變化判定 Score4 Theintestinalwallmaybedistendedthroughoutalmostitsentirelength Theintestinescontainnumerousbloodclotsanddigestedredbloodcellswhichgivethemacharacteristiccolourandputridodour thewallisgreatlythickened Score4isgiventodeadchickens 病理變化判定 E brunettiScore0 Nomacroscopiclesions Score1 Nomacroscopiclesions Intheabsenceofdistinctlesions theparasitesareidentifiedbymucosalscrapings proximalpartofthecaecaandrectum andmicroscopicexamination 病理變化判定 Score2 Theintestinalwallmayappeargreyincolour Theinferiorpartmaybethickenedandsmallparticlesofsalmon colouredmaterialdetachfromtheintestine Touchingmorethanlookingrevealsthesedesquamatingparticles 病理變化判定 Score2 Theintestinalwallmayappeargreyincolour Theinferiorpartmaybethickenedandsmallparticlesofsalmon colouredmaterialdetachfromtheintestine Touchingmorethanlookingrevealsthesedesquamatingparticles 病理變化判定 Score2 Theintestinalwallmayappeargreyincolour Theinferiorpartmaybethickenedandsmallparticlesofsalmon colouredmaterialdetachfromtheintestine Touchingmorethanlookingrevealsthesedesquamatingparticles 病理變化判定 Score3 Theintestinalwallisdistendedandthickened Themucousmembraneisred theintestinalcontentsarefullofpunctiformbloodclotsandmucous 病理變化判定 Score3 Theintestinalwallisdistendedandthickened Themucousmembraneisred theintestinalcontentsarefullofpunctiformbloodclotsandmucous 病理變化判定 Score3 Theintestinalwallisdistendedandthickened Themucousmembraneisred theintestinalcontentsarefullofpunctiformbloodclotsandmucous 病理變化判定 Score3 Theintestinalwallisdistendedandthickened Themucousmembraneisred theintestinalcontentsarefullofpunctiformblo