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1、12基因工程的基本操作程序專題專題1基因工程基因工程學習導航學習導航專題專題1基因工程基因工程一、基因工程的基本操作程序一、基因工程的基本操作程序目的基因的獲取目的基因的獲取_的構建的構建將將_導入受體細胞導入受體細胞目的基因的目的基因的_基因表達載體基因表達載體目的基因目的基因檢測與鑒定檢測與鑒定二、目的基因的獲取二、目的基因的獲取1目的基因：目的基因：主要是指主要是指_的基因，也可以是一的基因，也可以是一些具有調控作用的因子。些具有調控作用的因子。2目的基因的獲取方法目的基因的獲取方法(1)從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取基因文庫：將含有某種生物不同基因的許多基因文庫：將含有某種生物不同基

2、因的許多DNA片段，導片段，導入入_中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。同的基因，稱為基因文庫。編碼蛋白質編碼蛋白質受體菌的群體受體菌的群體提取依據(jù)：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色提取依據(jù)：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉錄產(chǎn)物體上的位置、基因的轉錄產(chǎn)物_，以及基因的表，以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質等特性。達產(chǎn)物蛋白質等特性。(2)利用利用PCR技術擴增目的基因技術擴增目的基因PCR的含義：是一項在生物的含義：是一項在生物_復制特定復制特定DNA片片段的核酸合成技術。段的核酸合成技術。目的：短時間

3、內大量擴增目的基因。目的：短時間內大量擴增目的基因。原理：原理：_?；蚪M基因組mRNA體外體外DNA雙鏈復制雙鏈復制過程：過程：第一步：加熱至第一步：加熱至9095 ，_；第二步：冷卻至第二步：冷卻至_，引物結合到互補，引物結合到互補DNA鏈；鏈；第三步：加熱至第三步：加熱至7075 ，熱穩(wěn)定，熱穩(wěn)定DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)從引從引物起始進行互補鏈的合成。物起始進行互補鏈的合成。如此重復循環(huán)多次。如此重復循環(huán)多次。特點：指數(shù)形式擴增。特點：指數(shù)形式擴增。(3)人工合成人工合成如果目的基因較小，核苷酸序列又已知，可通過如果目的基因較小，核苷酸序列又已知，可通過DNA合成儀合成儀用用_人

4、工合成。人工合成。DNA解旋解旋5560 化學方法化學方法三、基因表達載體的構建三、基因表達載體的構建1構建基因表達載體的目的：構建基因表達載體的目的：(1)使目的基因在使目的基因在_中穩(wěn)定存在，并且可以中穩(wěn)定存在，并且可以_給下一代。給下一代。(2)使目的基因能夠使目的基因能夠_和和_。受體細胞受體細胞遺傳遺傳表達表達發(fā)揮作用發(fā)揮作用2基因表達載體組成：基因表達載體組成：3基因表達載體的功能基因表達載體的功能：通過基因表達載體將：通過基因表達載體將_導入受體細胞。導入受體細胞。巧記巧記兩子啟動和終止；兩子啟動和終止；目的基因在中間；目的基因在中間；標記基因來篩選。標記基因來篩選。目的基因目的

5、基因四、將目的基因導入受體細胞四、將目的基因導入受體細胞1轉化的概念：轉化的概念：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內內_的過程。的過程。2將目的基因導入植物細胞將目的基因導入植物細胞(1)_法法:將目的基因導入雙子葉植物和裸子植物。將目的基因導入雙子葉植物和裸子植物。(2)基因槍法：將目的基因導入單子葉植物常用的方法?；驑尫ǎ簩⒛康幕驅雴巫尤~植物常用的方法。(3)_法：我國科學家獨創(chuàng)的一種方法。法：我國科學家獨創(chuàng)的一種方法。維持穩(wěn)定和表達維持穩(wěn)定和表達農(nóng)桿菌轉化農(nóng)桿菌轉化花粉管通道花粉管通道3將目的基因導入動物細胞將目的基因導入動物細胞(1)方

6、法：方法：_。(2)常用受體細胞：受精卵。常用受體細胞：受精卵。顯微注射法顯微注射法4將目的基因導入微生物細胞將目的基因導入微生物細胞(1)方法：方法：用用_處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中中DNA分子的生理狀態(tài)分子的生理狀態(tài)(這種細胞稱為這種細胞稱為_)。感受態(tài)細胞吸收感受態(tài)細胞吸收_。(2)受體細胞：原核細胞受體細胞：原核細胞(使用最廣泛的是大腸桿菌細胞使用最廣泛的是大腸桿菌細胞)。(3)原核生物的特點：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較原核生物的特點：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少等。少等。Ca2感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞重組表達載體重組表達

7、載體DNA分子分子五、目的基因的檢測與鑒定五、目的基因的檢測與鑒定1分子水平檢測分子水平檢測(1)檢測轉基因生物檢測轉基因生物DNA上是否插入了目的基因。上是否插入了目的基因。方法：方法：_技術。技術。(2)檢測目的基因是否轉錄出檢測目的基因是否轉錄出mRNA。方法：方法：_雜交技術。雜交技術。(3)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。方法：方法：_雜交技術。雜交技術。2個體生物學水平鑒定：個體生物學水平鑒定：抗蟲、抗病、抗逆性狀的有無及程抗蟲、抗病、抗逆性狀的有無及程度。度。DNA分子雜交分子雜交分子分子抗原抗原抗體抗體1判一判判一判(1)所有的目的基因都可從基因文庫

8、中直接獲得。所有的目的基因都可從基因文庫中直接獲得。( )(2)標記基因的作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因標記基因的作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細胞篩選出來。從而將含有目的基因的細胞篩選出來。( )(3)目的基因導入雙子葉植物一般采用農(nóng)桿菌轉化法。目的基因導入雙子葉植物一般采用農(nóng)桿菌轉化法。( )(4)基因工程常用的受體細胞都是動植物的體細胞。基因工程常用的受體細胞都是動植物的體細胞。( )(5)基因工程是否成功需進行個體生物學水平上的鑒定?；蚬こ淌欠癯晒π柽M行個體生物學水平上的鑒定。( )2連一連連一連將下列方法技術與其對應內容連線將下列方法技術與

9、其對應內容連線目的基因的獲取目的基因的獲取1基因文庫：基因組文庫和基因文庫：基因組文庫和cDNA文庫文庫(1)基因文庫的含義基因文庫的含義(如圖所示如圖所示)(2)cDNA文庫與基因組文庫的主要區(qū)別：文庫與基因組文庫的主要區(qū)別：文庫類型文庫類型cDNA文庫文庫基因組文庫基因組文庫文庫大小文庫大小基因中啟動子基因中啟動子基因中內含子基因中內含子基因多少基因多少物種間的基因交流物種間的基因交流小小大大無無有有無無有有某種生物的某種生物的部分基因部分基因某種生物的全某種生物的全部基因部基因可以可以部分基因可以部分基因可以2提取目的基因方法的比較提取目的基因方法的比較方法方法基因文庫的構建基因文庫的構

10、建PCR技術技術擴增擴增人工合成人工合成基因組文基因組文庫庫部分基因文部分基因文庫庫(如如cDNA文庫文庫)化學合化學合成法成法反轉錄反轉錄法法過程過程方法方法基因文庫的構建基因文庫的構建PCR技技術擴增術擴增人工合成人工合成基因組基因組文庫文庫部分基因文部分基因文庫庫(如如cDNA文庫文庫)化學合成化學合成法法反轉錄反轉錄法法優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點操作操作簡單簡單專一性強專一性強可在短可在短時間內時間內大量擴大量擴增目的增目的基因基因專一性強專一性強,可產(chǎn)生自可產(chǎn)生自然界中不然界中不存在的新存在的新基因基因工作量工作量大、盲大、盲目性大、目性大、專一性專一性差差操作過程較麻操作過程較麻煩，技術要求

11、煩，技術要求過高過高需要嚴需要嚴格控制格控制溫度、溫度、技術要技術要求高求高適用范圍適用范圍小小3PCR技術與生物體內技術與生物體內DNA復制的比較復制的比較項目項目PCR技術技術DNA復制復制不同不同點點解旋方式解旋方式DNA在高溫下在高溫下變性解旋變性解旋解旋酶催化解旋酶催化場所場所體外復制體外復制主要在細胞核內主要在細胞核內酶酶熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶聚合酶細胞內含有的細胞內含有的DNA聚合酶聚合酶溫度條件溫度條件需控制溫度，在較需控制溫度，在較高溫度下進行高溫度下進行細胞內溫和條件細胞內溫和條件結果結果在短時間內形成大在短時間內形成大量的量的DNA片段片段形成整個形成整個DNA分子

12、分子原理原理DNA雙鏈復制雙鏈復制(堿基互補配對堿基互補配對)原料原料四種游離的脫氧核苷酸四種游離的脫氧核苷酸條件條件模板、模板、ATP、酶等、酶等特別提醒特別提醒獲取目的基因需在受體細胞中表達獲取目的基因需在受體細胞中表達(1)真核細胞的基因編碼區(qū)含有不能表達的區(qū)域，因此不能直真核細胞的基因編碼區(qū)含有不能表達的區(qū)域，因此不能直接用于基因的擴增和表達。獲得真核細胞中的目的基因時，接用于基因的擴增和表達。獲得真核細胞中的目的基因時，一般用人工合成的方法。一般用人工合成的方法。(2)基因工程操作中，只有使用受體生物自身基因的啟動子才基因工程操作中，只有使用受體生物自身基因的啟動子才比較有利于基因的

13、表達。比較有利于基因的表達。(3)通過通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導入受體細胞中無法轉錄。列導入受體細胞中無法轉錄。 下列獲取目的基因的方法中需要模板的是下列獲取目的基因的方法中需要模板的是()從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因利用利用PCR技術擴增目的基技術擴增目的基因因反轉錄法反轉錄法通過通過DNA合成儀利用化學方法人工合成合成儀利用化學方法人工合成DNAABC D解析解析PCR技術利用的是技術利用的是DNA雙鏈復制原理。即將雙鏈復制原理。即將DNA雙雙鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈DNA

14、，作為聚合反應的模板。，作為聚合反應的模板。反轉錄法是以目的基因轉錄成的信使反轉錄法是以目的基因轉錄成的信使RNA為模板，在反轉錄為模板，在反轉錄酶的作用下，先反轉錄形成互補的單鏈酶的作用下，先反轉錄形成互補的單鏈DNA，再合成雙鏈，再合成雙鏈DNA。則均不需要模板。則均不需要模板。D(2014甘肅蘭州一中高二檢測甘肅蘭州一中高二檢測)獲取目的基因的方法有多種獲取目的基因的方法有多種，下列不屬于目的基因獲取方法的是，下列不屬于目的基因獲取方法的是()A從基因組文庫中獲取從基因組文庫中獲取B從從cDNA文庫中獲取文庫中獲取C直接從受體細胞中獲取目的基因直接從受體細胞中獲取目的基因D利用利用PCR

15、技術獲取技術獲取解析：應該直接從供體細胞中獲取目的基因。解析：應該直接從供體細胞中獲取目的基因。C基因表達載體的構建基因表達載體的構建2構建方法：構建方法：特別提醒特別提醒啟動子和終止子、起始密碼子與終止密碼子的區(qū)啟動子和終止子、起始密碼子與終止密碼子的區(qū)別別啟動子啟動子起始密碼起始密碼(子子)；終止子；終止子終止密碼終止密碼(子子)。(1)啟動子和終止子都在啟動子和終止子都在DNA上，在遺傳信息轉錄時起作用上，在遺傳信息轉錄時起作用。啟動子是啟動轉錄的開始，終止子是。啟動子是啟動轉錄的開始，終止子是DNA分子上決定轉錄分子上決定轉錄停止的一段停止的一段DNA序列，其組成單位都是脫氧核苷酸。序

16、列，其組成單位都是脫氧核苷酸。(2)起始密碼子和終止密碼子都是起始密碼子和終止密碼子都是mRNA上三個相鄰堿基。起上三個相鄰堿基。起始密碼子決定翻譯的開始，終止密碼子決定翻譯的停止。始密碼子決定翻譯的開始，終止密碼子決定翻譯的停止。 (2014聊城高二檢測聊城高二檢測)下列關于基因表達載體的構建描下列關于基因表達載體的構建描述錯誤的是述錯誤的是()A基因表達載體的構建是基因工程的核心基因表達載體的構建是基因工程的核心B基因表達載體的構建包括目的基因、啟動子、終止子、標基因表達載體的構建包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因等部分記基因等部分C目的基因主要是指編碼蛋白質的基因目的基因主要是指編碼

17、蛋白質的基因D構建的基因表達載體都是相同的構建的基因表達載體都是相同的解析解析基因表達載體的構建是基因工程的第二步，也是基基因表達載體的構建是基因工程的第二步，也是基因工程的核心；一個基因表達載體的組成除目的基因外還必因工程的核心；一個基因表達載體的組成除目的基因外還必須具有啟動子、終止子、標記基因等部分；目的基因主要是須具有啟動子、終止子、標記基因等部分；目的基因主要是指編碼蛋白質的基因；由于受體細胞不同，基因表達載體的指編碼蛋白質的基因；由于受體細胞不同，基因表達載體的構建也會有差別，不可能都是相同的。構建也會有差別，不可能都是相同的。D由于受體細胞有植物、動物、微生物之分，加上目的基因導

18、由于受體細胞有植物、動物、微生物之分，加上目的基因導入受體細胞的方法不同，因此，基因表達載體的構建也會有入受體細胞的方法不同，因此，基因表達載體的構建也會有差別，不可能千篇一律。差別，不可能千篇一律。(2014安徽屯溪一中高二質檢安徽屯溪一中高二質檢)人們常選用的細菌質粒分子人們常選用的細菌質粒分子往往帶有一個抗生素抗性基因，該抗性基因的主要作用是往往帶有一個抗生素抗性基因，該抗性基因的主要作用是()A提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性B有利于對目的基因是否導入進行檢測有利于對目的基因是否導入進行檢測C增加質粒分子的分子量增加質粒分子的分子量D便于與外源基因連接便

19、于與外源基因連接解析：抗生素抗性基因為標記基因，便于對目的基因是否導解析：抗生素抗性基因為標記基因，便于對目的基因是否導入進行檢測。入進行檢測。B1目的基因導入受體細胞的過程：目的基因導入受體細胞的過程：目的基因導入受體細胞目的基因導入受體細胞2不同受體細胞的常用導入方法不同受體細胞的常用導入方法生物生物種類種類植物細胞植物細胞動物細胞動物細胞微生物細胞微生物細胞常用常用方法方法農(nóng)桿菌轉化法農(nóng)桿菌轉化法受體受體細胞細胞轉化轉化過程過程顯微注射法顯微注射法Ca2處理法處理法體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞原核細胞目的基因插入目的基因插入Ti質粒的質粒的T-DNA上上導入植物細胞導入植物細胞整合到

20、受體細整合到受體細胞的胞的DNA中中表達表達目的基因表達載目的基因表達載體提純體提純取卵取卵(受精卵受精卵)顯微顯微注射注射受精卵發(fā)受精卵發(fā)育育獲得具有新獲得具有新性狀的動物性狀的動物Ca2處理細胞處理細胞感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞表達載體與感受表達載體與感受態(tài)細胞混合態(tài)細胞混合感感受態(tài)細胞吸收受態(tài)細胞吸收DNA分子分子特別提醒特別提醒目的基因能否穩(wěn)定遺傳的判斷目的基因能否穩(wěn)定遺傳的判斷目的基因能否在受體細胞內穩(wěn)定保存并表達的關鍵是目的基目的基因能否在受體細胞內穩(wěn)定保存并表達的關鍵是目的基因是否插入到受體細胞染色體上的因是否插入到受體細胞染色體上的DNA分子中。圖中過程分子中。圖中過程b與過程與過程

21、a相比，相比，b會使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表會使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達，而達，而a細胞分裂時，細胞質是不均分的，子細胞不一定含細胞分裂時，細胞質是不均分的，子細胞不一定含有目的基因。有目的基因。 (2014山東濟南高二檢測山東濟南高二檢測)農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染植物，因而在植物基因工程的微生物，能在自然條件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了廣泛的運用。如圖為農(nóng)桿菌轉化法的示意圖，試回中得到了廣泛的運用。如圖為農(nóng)桿菌轉化法的示意圖，試回答下列問題：答下列問題：(1)一般情況下農(nóng)桿菌不能感染的植物是一般情況下農(nóng)桿菌不

22、能感染的植物是_，利用，利用農(nóng)桿菌自然條件下感染植物的特點，能實現(xiàn)農(nóng)桿菌自然條件下感染植物的特點，能實現(xiàn)_。具體原理是在農(nóng)桿菌的。具體原理是在農(nóng)桿菌的Ti質粒質粒上存在上存在T-DNA片段，它具有可轉移至受體細胞并整合到受體片段，它具有可轉移至受體細胞并整合到受體細胞細胞_上的特點，因此只要將攜帶外源基因上的特點，因此只要將攜帶外源基因的的DNA片段插入到片段插入到_(部位部位)即可。即可。單子葉植物單子葉植物目的基因導入植物細胞目的基因導入植物細胞染色體的染色體的DNAT-DNA片段片段(內部內部)(2)根據(jù)根據(jù)T-DNA這一轉移特點，推測該這一轉移特點，推測該DNA片段上可能含有控片段上可

23、能含有控制制_(酶酶)合成的基因。合成的基因。(3)圖中圖中c過程中，能促進農(nóng)桿菌向植物細胞轉移的物質是過程中，能促進農(nóng)桿菌向植物細胞轉移的物質是_類化合物。類化合物。(4)植物基因工程中除了農(nóng)桿菌轉化法之外，還可采取植物基因工程中除了農(nóng)桿菌轉化法之外，還可采取_。(至少寫出兩種至少寫出兩種)DNA連接酶、限制酶連接酶、限制酶酚酚基因槍法、花粉管通道法基因槍法、花粉管通道法解析解析(1)一般農(nóng)桿菌不能感染的植物是單子葉植物，可感一般農(nóng)桿菌不能感染的植物是單子葉植物，可感染雙子葉植物和裸子植物。利用其感染性，可實現(xiàn)目的基因染雙子葉植物和裸子植物。利用其感染性，可實現(xiàn)目的基因導入植物細胞。真正可轉

24、移至受體細胞并整合到受體細胞染導入植物細胞。真正可轉移至受體細胞并整合到受體細胞染色體的色體的DNA上的是農(nóng)桿菌上的是農(nóng)桿菌T-DNA片段，因此目的基因必須插片段，因此目的基因必須插入到該部位才能成功。入到該部位才能成功。(2)根據(jù)根據(jù)T-DNA這一轉移特點，可以推這一轉移特點，可以推測該測該DNA片段能控制合成片段能控制合成DNA連接酶、限制酶以實現(xiàn)與雙子連接酶、限制酶以實現(xiàn)與雙子葉植物細胞染色體葉植物細胞染色體DNA的整合。的整合。(3)植物細胞受傷后可產(chǎn)生植物細胞受傷后可產(chǎn)生酚類物質，促進農(nóng)桿菌向植物細胞轉移。酚類物質，促進農(nóng)桿菌向植物細胞轉移。(4)植物基因工程中植物基因工程中除了農(nóng)桿

25、菌轉化法之外，還有基因槍法和花粉管通道法等。除了農(nóng)桿菌轉化法之外，還有基因槍法和花粉管通道法等。(1)能促進含目的基因的重組能促進含目的基因的重組Ti質粒轉入農(nóng)桿菌中的常用方法質粒轉入農(nóng)桿菌中的常用方法是什么？是什么？(2)怎樣操作可促進單子葉植物受農(nóng)桿菌的感染？怎樣操作可促進單子葉植物受農(nóng)桿菌的感染？提示提示：(1)用用Ca2(或或CaCl2溶液溶液)處理可增加農(nóng)桿菌細胞壁的處理可增加農(nóng)桿菌細胞壁的通透性而達到促進含目的基因的重組通透性而達到促進含目的基因的重組Ti質粒轉入農(nóng)桿菌中的質粒轉入農(nóng)桿菌中的目的。目的。(2)可在單子葉植物受損處加涂酚類物質來吸引更多的農(nóng)桿菌可在單子葉植物受損處加涂

26、酚類物質來吸引更多的農(nóng)桿菌感染。感染。下列關于目的基因導入受體細胞的描述不正確的是下列關于目的基因導入受體細胞的描述不正確的是()A基因槍法導入植物體細胞的方法比較經(jīng)濟有效基因槍法導入植物體細胞的方法比較經(jīng)濟有效B顯微注射技術是轉基因動物中采用最多的方法顯微注射技術是轉基因動物中采用最多的方法C.大腸桿菌最常用的轉化方法是使細胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變大腸桿菌最常用的轉化方法是使細胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變D農(nóng)桿菌轉化法是將目的基因導入植物細胞最常用的方法農(nóng)桿菌轉化法是將目的基因導入植物細胞最常用的方法解析：不同生物目的基因導入的方法不同，每種方法都有利解析：不同生物目的基因導入的方法不同，每種方法都有利

27、有弊。目的基因導入植物細胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉化法，有弊。目的基因導入植物細胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉化法，該方法比較經(jīng)濟有效，基因槍法成本較高；目的基因導入動該方法比較經(jīng)濟有效，基因槍法成本較高；目的基因導入動物細胞常用的方法是顯微注射法；大腸桿菌細胞最常用的轉物細胞常用的方法是顯微注射法；大腸桿菌細胞最常用的轉化方法就是用鈣離子處理細胞，使細胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變化方法就是用鈣離子處理細胞，使細胞的生理狀態(tài)發(fā)生改變,完成轉化過程。完成轉化過程。A目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定類型類型步驟步驟檢測內容檢測內容方法方法結果顯示結果顯示分子分子水平水平檢測檢測第一步第一步第二步第二步第三步第

28、三步目的基因是目的基因是否進入受體否進入受體細胞細胞DNA分子雜交分子雜交技術技術(DNA和和DNA之間之間)目的基因是目的基因是否轉錄出否轉錄出mRNA分子雜交技術分子雜交技術(DNA和和mRNA之間之間)目的基因是目的基因是否翻譯出蛋否翻譯出蛋白質白質抗原抗原抗體雜抗體雜交技術交技術是否成功顯是否成功顯示出雜交帶示出雜交帶類型類型步驟步驟檢測內容檢測內容方法方法結果顯示結果顯示個體生個體生物學水物學水平鑒定平鑒定包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否有抗包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功

29、能是否相同的活性比較，以確定功能是否相同特別提醒特別提醒在在DNA分子、分子、mRNA分子上檢測目的基因是否插分子上檢測目的基因是否插入、目的基因是否轉錄時，所用的探針都是用放射性同位素入、目的基因是否轉錄時，所用的探針都是用放射性同位素等標記的含有目的基因的單鏈等標記的含有目的基因的單鏈DNA片段。片段。 回答有關基因工程的問題：回答有關基因工程的問題：(1)構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生_末端。若要在末端。若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應

30、選擇限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產(chǎn)生能使二者產(chǎn)生_(相同、不同相同、不同)黏性末端的限制酶。黏性末端的限制酶。平平相同相同(2)利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構建的表達載體含有人胰利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是_。在用表達載體轉化大腸桿。在用表達載體轉化大腸桿菌時菌時,常用常用_處理大腸桿菌，以利于表達載體進入處理大腸桿菌，以利于表達載體進入;為了檢測胰島素基因是否轉錄出了為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的胰島，可用標記的胰島素基因片段作探針與素基因

31、片段作探針與mRNA雜交雜交,該雜交技術稱為該雜交技術稱為_。為了檢測胰島素基因轉錄的。為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻是否翻譯成譯成_,常用抗原常用抗原抗體雜交技術。抗體雜交技術。RNA聚合酶識別和結合的部位聚合酶識別和結合的部位Ca2分子雜交技術分子雜交技術蛋白質蛋白質解析解析(1)限制酶切割產(chǎn)生兩種末端；黏性末端和平末端；限制酶切割產(chǎn)生兩種末端；黏性末端和平末端；若用若用DNA連接酶連接兩個末端，兩個末端必須是相同的。連接酶連接兩個末端，兩個末端必須是相同的。(2)基因工程檢測的方法：檢測目的基因是否導入，使用基因工程檢測的方法：檢測目的基因是否導入，使用DNA分子雜交技術；檢測目

32、的基因是否轉錄，使用分子雜交技術分子雜交技術；檢測目的基因是否轉錄，使用分子雜交技術;檢測是否形成蛋白質，使用抗原檢測是否形成蛋白質，使用抗原抗體雜交技術。抗體雜交技術。(2014陜西西安高二檢測陜西西安高二檢測)下列哪項表述說明了目的基因表下列哪項表述說明了目的基因表達成功達成功()A用用DNA探針檢測目的基因出現(xiàn)雜交帶探針檢測目的基因出現(xiàn)雜交帶B用用DNA探針檢測探針檢測mRNA出現(xiàn)雜交帶出現(xiàn)雜交帶C用抗原用抗原抗體雜交檢測蛋白質出現(xiàn)雜交帶抗體雜交檢測蛋白質出現(xiàn)雜交帶D以上都不能說明以上都不能說明解析：由于基因工程產(chǎn)生與天然產(chǎn)品的功能不一定相同，往解析：由于基因工程產(chǎn)生與天然產(chǎn)品的功能不一定相同，往往需要進行活性的比較，才能確定功能程度，最終說明目的往需要進行活性的比較，才能確定功能程度，最終說明目的基因是否表達成功?；蚴欠癖磉_成功。D