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1、【精品文檔】如有侵權，請聯系網站刪除，僅供學習與交流 生物化學習題 2 .....精品文檔...... 第1部分 蛋白質 一、填空題 1.除半胱氨酸和胱氨酸外，含硫的氨基酸還有________，除蘇氨酸和酪氨酸外，含羥基的氨基酸還有_________，在蛋白質中常見的20種氨基酸中，_________是一種亞氨基酸，_________不含手性碳原子。 2.氨基酸在等電點時，主要以__________離子形式存在，在pH＞pI的溶液中，大部分以________離子形式存在，在pH＜pI的溶液中，大部分以________離子形式存在。 3.組氨酸的

2、pK1(α-COOH)值是1.82，pK2 (咪唑基)值是6.00， pK3(α-NH3+)值是9.17，其等電點是________。 4.Asp的pK1=2.09，pK2= 3.86，pK3=9.82，其pI等于________。 5.在近紫外區(qū)能吸收紫外光的氨基酸有_______、_______和_______。其中______的摩爾吸光系數最大。 6 .蛋白質分子中氮的平均含量為_______，故樣品中的蛋白質含量常以所測氮量乘以_______。 7.蛋白質的氨基酸殘基是由_______鍵連接成鏈狀結構的，其氨基酸殘基的______稱蛋白質的一級結構。 8.在螺旋中C=O和N—

3、H之間形成的氫鍵與_______基本平行，每圈螺旋包含_____個氨基酸殘基，高度為_______，每個氨基酸殘基使螺旋軸上升______，并沿軸旋轉______度。 9.β-折疊片結構的維持主要依靠兩條肽鍵之間的肽鍵形成________來維持。 10.用凝膠過濾法分離蛋白質，相對分子質量較小的蛋白質在柱中滯留的時間較_______，因此最先流出凝膠柱的蛋白質，其相對分子質量最_______。 11.血紅蛋白的輔基是________，當其中的1個亞基與氧結合后，其余亞基與氧的親合力______，這種現象稱________。當CO2或H+濃度增高時，血紅蛋白與氧的親合力_______，這種

4、現象稱_________。 12.穩(wěn)定蛋白質膠體溶液的因素是________和________。 13 .一般說來，球狀蛋白質在其分子內部含有________性氨基酸殘基，而在分子外表面含________性氨基酸殘基。 14蛋白質變性時空間結構________，而一級結構_________。變性后，蛋白質的溶解度一般會_________，生物學功能________。 15.胰蛋白酶專一性地切斷________和________的羧基端肽鍵。 二、選擇題（在備選答案中選出1個正確答案） 1.一個生物樣品的含氮量為5%，它的蛋白質含量為 A .12.50% B.

5、 16.00% C. 38.00% D. 31.25% 2.下列蛋白質組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸收？ A. 色氨酸的吲哚環(huán) B. 酪氨酸的酚環(huán) C. 苯丙氨酸的苯環(huán) D. 半胱氨酸的硫原子 3.關于氨基酸的敘述哪一項是錯誤的？ A. 酪氨酸和絲氨酸含羥基 B.酪氨酸和苯丙氨酸含苯環(huán) C. 谷氨酸和天冬氨酸含兩個氨基 D.賴氨酸和精氨酸是堿性氨基酸 4.在pH7時，其R基帶有電荷的氨基酸是 A. 纈氨酸 B. 甘氨酸

6、 C. 半胱氨酸 D. 賴氨酸 5.用6mol/L HCl水解某種蛋白質時能檢出的氨基酸種類是 A. 20種 B. 19種 C. 18種 D. 17種或更少 6.每個蛋白質分子必定具有的結構是什么 A. α-螺旋 B. β-折疊 C. 三級結構 D. 四級結構 7.下列哪一種氨基酸側鏈基團的pKa值最接近于生理pH值？ A. 半胱氨酸 B. 谷氨酸 C. 谷氨酰胺 D. 組氨

7、酸 8. Arg的pK1=2.17，pK2=9.04， pK3=12.48 其pI等于 A .5.613 B. 7.332 C. 7.903 D. 10.76 9.典型的螺旋是 A. 2.610 B. 310 C. 3.613 D. 4.416 10.維持蛋白質分子中的α螺旋主要靠 A. 鹽鍵 B. 范德華鍵 C

8、. 共價鍵 D. 氫鍵 11.維系蛋白質三級結構穩(wěn)定的最重要的鍵或作用力是 A．鹽鍵 B.二硫鍵 C.氫鍵 D.疏水作用力 12.血紅蛋白質的氧合曲線是 A.雙曲線 B.拋物線 C. S形曲線 D.鐘罩形 13.維持蛋白質二級結構的主要化學鍵是 A.肽鍵 B.二硫鍵 C.氫鍵 D.疏水鍵 14.關于蛋白質三級結構的描述錯誤的是 A.有三級結構的蛋白質均

9、有酶活性 B.球蛋白均有三級結構 C.三級結構的穩(wěn)定性由多種次級鍵維系 D.親水基團多分布在三級結構的表面 15.某蛋白質的等電點為7.5，在pH6.0的條件下進行電泳，它的泳動方向是 A.在原點不動 B.向正極移動 C.向負極移動 D.無法預測 16.用凝膠過濾層析柱分離蛋白質時，下列哪項是正確的 A.分子體積最大的蛋白質最先洗脫下來 B.分子體積最小的蛋白質最先洗脫下來 C.不帶電荷的蛋白質最先洗脫來來 D.帶電荷的蛋白質最先洗脫來來 17.有一蛋白質水解產物在pH6用陽離子交換

10、柱層析時，第一個被洗脫下來的氨基酸是 A. Val（pI為5.96） B. Lys（pI為9.74） C. Asp（pI為2.77） D. Arg （pI為10.76） 18.為獲得不變性的蛋白質，常用的方法有 A. A.用三氯醋酸沉淀 B.用苦味酸沉淀 C.用重金屬鹽沉淀 D.低溫鹽析 19.SDS凝膠電泳分離蛋白質是根據各種蛋白質 A.pI的差異 B.分子大小的差異 C.分子極性的差異 D.溶解度的差異 20.如果要測定一個小肽的氨基酸順序，下列試劑中你認為最合適使用哪一個

11、 A .茚三酮 B.CNBr C.胰蛋白酶 D.異硫氰酸苯酯 三、判斷題 1.當溶液的pH等于某一可解離基團的pKa時，該基團一半被解離。 2.氨基酸為氨基取代的羧酸，可直接用酸堿滴定法進行定量測定。 3.當溶液的pH小于某蛋白質的pI時，該蛋白質在電場中向陽極移動。 4.溴化氰可以斷裂甲硫氨酸的氨基參與形成的肽鍵。 5.在α-螺旋中，每3.6個氨基酸繞一圈，并形成1個氫鍵。 6.體內肽鏈合成方向是從N端向C端，而在體外固相肽的化學法合成時，通常是從C端向N端合成。 7.核磁共振可以研究溶液中的蛋白質三

12、維結構，并能提供有關的動態(tài)信息。 8.在水溶液中，蛋白質折疊形成疏水核心，會使水的熵增加。 9.球蛋白的三維折疊多采取親水側基在外，疏水側基藏于分子內部的結構模式。 10.膠原蛋白的原膠原分子是3股右手螺旋扭曲成的左手螺旋。 11.血紅蛋白與氧的結合能力隨pH降低而增高。 12.胎兒血紅蛋白與2，3-二磷酸甘油（2,3—DPG）的結合力較弱。 13.測定別構酶的相對分子質量可以用SDS-PAGE。 14.用凝膠過濾分離蛋白質，小分子蛋白由于所受的阻力小首先被洗脫出來。 15.若蛋白質與陰離子交換劑結合較牢，可用增加NaCI濃度或降低pH的方法將其從層析柱洗脫出來。 四、名詞解

13、釋 1.兼性離子（zwitterion）； 2.等電點（isoelectric point,pI）； 3.構象(conformation）； 4.鹽溶與鹽析(salting in and salting out）； 5.Edman 降解法； 6.超二級結構(super-secondary structure）； 7.結構域（domain）； 8.蛋白質的三級結構； 9.Bohr 效應（Bohr effect）； 10.蛋白質的變性作用 五、分析

14、和計算題 1.試述蛋白質二級結構的三種基本類型。 2.在下述pH條件下，下列蛋白質在電場中向哪個方向移動？人血清蛋白（pI=4.64）：pH5.5，pH3.5；血紅蛋白（pI=7.07）：pH7.07，pH9.0。 3.簡述蛋白質溶液的穩(wěn)定因素以及實驗室沉淀蛋白質的常用方法。 4.已知牛血清白蛋白含色氨酸0.58%（按質量計），色氨酸相對分子質量為204。（1）計算牛血清白蛋白的最低相對分子質量（2）用凝膠過濾測得牛血清白蛋白相對分子質量大約為7萬，問牛血清白蛋白分子中含幾個色氨酸殘基？ 5.簡要敘述蛋白質形成寡聚體的生物學意義。 6.蛋白質變性后，其性質有哪些變化？ 7.在體

15、外，用下列方法處理，對血紅蛋白與氧的親和力有何影響？（1）pH值從7.0增加到7.4；(2) CO2分壓從1000 Pa增加到4 000 Pa；(3) O2分壓從6000 Pa下降到2000 Pa； (4)2,3-二磷酸甘油酸的濃度從8×10-4mol/L下降到2×10-4mol/L；（5）α2β2解聚成單個亞基。 8.胎兒血紅蛋白（Hb F）在相當于成年人血紅蛋白（Hb A）鏈143殘基位置含有Ser，而成年人鏈的這個位置是具陽離子的His殘基。殘基143面向亞基之間的中央空隙。（1）為什么2,3-二磷酸甘油酸（2,3-BPG）同脫氧Hb A的結合比同脫氧Hb F更牢固？（2）Hb F對2

16、,3-BPG低親和力如何影響到Hb F對氧的親和力？這種差別對于氧從母體血液向胎兒血液的運輸有何意義。 9.凝膠過濾和SDS-PAGE均是利用凝膠，按照分子大小分離蛋白質的，為什么凝膠過濾時，蛋白質分子越小，洗脫速度越慢，而在SDS-PAGE中，蛋白質分子越小，遷移速度越快？ 參考答案 一、填空題 1. 甲硫氨酸，絲氨酸，脯氨酸，甘氨酸 2. 兩性，負，正 3. 7.59 4. 2.97 5. 苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，色氨酸 6. 16%，6.25 7. 肽，排列順序 8. 螺旋軸，3.6，0.54，0.15，100 9. 氫鍵 10. 長，大 11. 血紅

17、素，增加，正協(xié)同效應，下降，Bohr效應 12. 水化層，雙電層 13. 疏水，親水 14. 破壞，不變，下降，喪失 15. 賴氨酸，精氨酸 二、選擇題 1. (D) 2.（A） 3.（C） 4.（D） 5. (D) 6.（C） 7.（D） 8.（D） 9.（C） 10.（D） 11.（D） 12.（C） 13.（C） 14.（A） 15.（C） 16.（A） 17.（C)

18、 18.（D） 19.（B） 20. (D) 三、判斷題 1.對。 2.錯。不能用酸堿滴定法直接進行滴定，只能用甲醛滴定法滴定氨基。 3.錯。當溶液的pH小于某蛋白質的pI時，該蛋白質帶凈正電荷，向陰極移動。 4.錯。溴化氰斷裂甲硫氨酸的羧基參與形成的肽鍵。 5.錯。-螺旋每3.6個氨基酸繞一圈，但螺旋一端的4個-NH和另一端的4個-C=0不參與形成氫鍵。 6.對。 7.對。 8.對。 9.對。 10.錯。原膠原分子是由3股左手螺旋扭曲成的右手螺旋。 11.錯。隨著pH的降低，血紅蛋白與氧的結合力降

19、低，這有利于血紅蛋白在CO2含量較高的組織釋放氧。 12.對。 13.錯。別構酶一般由多個亞基構成，SDS-PAGE只能測定亞基的相對分子質量。 14.錯。用凝膠過濾法分離蛋白質時，相對分子質量大的蛋白質先流出層析柱。 15.對。 四、名詞解釋 1．氨基酸、蛋白質等分子在某一pH水溶液中，酸性基團脫去質子帶負電荷，堿性基團結合質子帶正電荷，這種既帶負電荷，又帶正電荷的離子稱兼性離子或兩性離子。 2.調節(jié)兩性離子溶液的pH，使該兩性離子所帶的凈電荷為零，在電場中既不向正極、也不向負極移動，此時，溶液的pH稱該兩性離子的等電點（pI）。不同結構的兩性離子有不同的pI值。

20、 3.具有相同構型的分子在空間里可能的多種形態(tài)，構象形態(tài)間的改變不涉及共價鍵的破裂。一個給定的蛋白質理論上可采取多種構象，但在生理條件下，只有一種或很少幾種在能量上是有利的。 4.低濃度的中性鹽可以增加蛋白質的溶解度，這種現象稱為鹽溶。鹽溶作用是由于蛋白質分子吸附某種鹽類離子后，帶電層使蛋白質分子彼此排斥，因而溶解度增高。當離子強度增加到足夠高時，蛋白質從溶液中沉淀出來，這種現象稱為鹽析。鹽析作用是由于大量中性鹽的加入使水的活度降低，原來溶液中的大部分甚至全部的自由水轉變?yōu)辂}離子的結合水。 5.為肽鏈氨基酸測序的方法。苯異硫氰酸酯與肽段N-末端的游離-氨基作用，生成苯異硫氰酸酯衍生物，并

21、從肽鏈上脫落下來，用層析的方法可鑒定為何種氨基酸衍生物。殘留的肽鏈可繼續(xù)與苯異硫氰酸酯作用，逐個鑒定出氨基酸的排列順序。 6.在蛋白質中，若干相鄰的二級結構單元組合在一起，形成有規(guī)則、在空間上能辯認的二級結構組合體，充當三級結構的構件，稱為超二級結構。常見的超二級結構有，，-發(fā)夾，-曲折等。 7.在二級或超二級結構基礎上進一步盤旋、折疊，形成較為緊密的球狀實體，稱為結構域。 8.在二級結構、超二級結構或結構域（對分子較大，由多個結構域的蛋白質而言）基礎上形成的完整空間結構，一個三級結構單位通常由一條肽鏈組成，但也有一些三級結構單位是由二硫鍵連接的多條肽鏈組成的，如胰島素就是由兩條肽鏈折疊

22、成的1個三級結構單位。 9.H+和CO2濃度增加，會降低氧和血紅蛋白的親和力，使得血紅蛋白的氧合曲線向右移動，提高了O2從血紅蛋白的釋放量，這種作用稱作Bohy效應。 10.天然蛋白質因受物理或化學因素影響，其空間結構發(fā)生變化，致使蛋白質的理化性質和生物學性質都有所改變，但并不導致蛋白質一級結構的破壞，這種現象稱變性作用。 五、分析、計算題 1.（1）α-螺旋：多肽主鏈圍繞一中心軸形成的右手螺旋， 3.6個氨基酸殘基上升一圈，螺距0.54nm；一個氨基酸殘基的羰基氧與其后第四個氨基酸殘基的亞氨基形成氫鍵，氫鍵與螺旋軸基本平行，氫鍵封閉的原子為13個，稱作3.613。 （2）β-折疊：

23、兩條或以上幾乎完全伸展的多肽鏈平行或反平行排列而成，各肽鍵平面之間折疊成鋸齒狀，側鏈R基團交錯位于鋸齒狀結構的上下方；靠肽鍵羰基氧和亞氨基氫形成氫鍵維系。 (3）β-轉角：在球狀蛋白質分子中，多肽主鏈常常會出現180o回折，回折部分成為β轉角，在β轉角中第一個殘基的C=O與第四個殘基的N-H形成氫鍵，使β轉角成為比較穩(wěn)定的結構。 2.人血清蛋白的pI=4.64，在pH5.5的電場中帶負電荷，向陽極移動；在pH3.5的電場中帶正電荷，向負極移動。血紅蛋白的pI=7.07，在pH7.07不帶凈電荷，在電場中不移動；在pH9.0時帶負電荷，向陽極移動。 3.維持蛋白質溶液穩(wěn)定的因素有兩個：（1

24、）水化膜：蛋白質顆粒表面的親水基團吸引水分子，使表面形成水化膜，從而阻斷蛋白質顆粒的聚集，防止蛋白質沉淀。（2）同種電荷：在pH≠pI的溶液中，蛋白質帶有同種電荷。同種電荷相互排斥，阻止蛋白質顆粒相互聚集而發(fā)生沉淀。 常用的沉淀蛋白質方法有：（1）鹽析法：在蛋白質溶液中加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽，去除蛋白質的水化膜，中和蛋白質表面的電荷，使蛋白質顆粒相互聚集，發(fā)生沉淀。用不同濃度的鹽可以沉淀不同的蛋白質，稱分段鹽析。（2）有機溶劑沉淀法：使用丙酮沉淀時，必須在0～4℃低溫下進行，丙酮用量一般10倍于蛋白質溶液的體積，蛋白質被丙酮沉淀時，應立即分離，否則蛋白質會變性。除了丙酮以外

25、，也可用乙醇沉淀。此外，還可用重金屬鹽、某些有機酸等方法將樣品中的蛋白質變性沉淀。 4.（1）設最低相對分子質量為X，根據題意可列出： 或 （2）用凝膠過濾測得牛血清白蛋白相對分子質量大約為SDS-PAGE的兩倍，說明該蛋白質含有2個色氨酸殘基，若色氨酸百分含量的測定值準確，則牛血清蛋白較準確的相對分子質量為3517×2＝70344 5.（1）能提高蛋白質的穩(wěn)定性。亞基結合可以減少蛋白質的表面積/體積比，使蛋白質的穩(wěn)定性增高。（2）提高遺傳物質的經濟性和有效性。編碼一個能裝配成同聚體的單位所需的基因長度比編碼一個與同聚體相同相對分子質量的超長肽鏈所需的基因長度要小得多。

26、（3）形成功能部位。不少寡聚蛋白的單體相互聚集可以形成新的功能部位。（4）形成協(xié)同效應。寡聚蛋白與配體相互作用時，有可能形成類似血紅蛋白或別構酶那樣的協(xié)同效應，使其功能更加完善。有些寡聚蛋白的不同亞基可以執(zhí)行不同的功能，如一些酶的亞基可分為催化亞基和調節(jié)亞基。 6.蛋白質變性后，氫鍵等次級鍵被破壞，蛋白質分子就從原來有秩序的緊密結構變?yōu)闊o秩序的松散伸展狀結構。即二、三級以上的高級結構發(fā)生改變或破壞，但一級結構沒有破壞。變性后，蛋白質的溶解度降低，是由于高級結構受到破壞，使分子表面結構發(fā)生變化，親水基團相對減少，容易引起分子間相互碰撞發(fā)生聚集沉淀，蛋白質的生物學功能喪失，由于一些化學鍵的外露，

27、使蛋白質的分解更加容易。 7.（1）pH值增加，Hb與氧的親和力增加。（2）CO2分壓增加，Hb與氧的親和力下降。（3）O2分壓下降，Hb與氧的親和力下降。（4）2,3-BPG濃度下降，Hb與氧的親和力增加。（5）α2β2解聚成單個亞基，Hb與氧的親和力增加。 8.（1）由于2,3-BPG是與脫氧Hb A中心空隙帶正電荷的側鏈結合，而脫氧Hb F缺少帶正電荷的側鏈（鏈143位的His殘基），因此2,3-BPG同脫氧Hb A的結合比同脫氧Hb F的結合更緊。（2）2,3-BPG穩(wěn)定血紅蛋白的脫氧形式，降低血紅蛋白的氧飽和度。由于Hb F與 2,3-BPG親和力比Hb A低，HbF受血液中2,

28、3-BPG影響小，因此Hb F在任何氧分壓下對氧的親和力都比Hb A大。親和力的這種差別允許氧從母親血向胎兒有效轉移。 9.凝膠過濾時，凝膠顆粒排阻Mr較大的蛋白質，僅允許Mr較小的蛋白質進入顆粒內部，所以Mr較大的蛋白質只能在凝膠顆粒之間的空隙中通過，可以先從層析柱中洗脫出來，而Mr小的蛋白質后從層析柱中洗脫出來。SDS- PAGE分離蛋白質時，所有的蛋白質均要從凝膠的網孔中穿過，蛋白質的相對分子質量越小，受到的阻力也越小，移動速度就越快。 第2部分 酶和輔酶 一、填空題 1.酶催化反應的實質在于降低反應的______，使底物分子在較低的能量狀態(tài)下達到______態(tài)，從而使反應速

29、度______。 2.對于符合米氏方程的酶，v-[S]曲線的雙倒數作圖得到的直線，在橫軸的截距為___________，縱軸上的截距為____________。 3.若同一種酶有n個底物就有________個Km值，其中Km值最________的底物，一般為該酶的最適底物。 4.當底物濃度等于0.25Km時，反應速率與最大反應速率的比值是_________。 5.別構酶除活性中心外還有___________。當以v對[S]作圖時，它表現出______型曲線，而不是典型的米氏酶所具有的_______曲線。 6.蛋白質磷酸化時，需要__________酶，而蛋白質去磷酸化需要______

30、______酶。 7.___________抑制劑不改變酶促反應Vmax，___________抑制劑不改變酶促反應Km。 8.含有腺苷酸的輔酶主要有 、 和 。 9.維生素A缺乏可引起 癥；兒童缺乏維生素D引起 ；成人缺乏維生素D引起 ；維生素C缺乏引起 ；維生素PP缺乏引起 ；腳氣病是由于缺乏 引起的；口角炎是由于缺乏 引起的；維生素B12缺乏引起 ；葉酸缺乏引起 。 10.維生素B1的活性形式是 ，維生素B

31、2的活性形式是 和 。維生素PP可形成 和 兩種輔酶。維生素B6是以 和 形式作為轉氨酶的輔酶。葉酸的活性形式是 。生物素在體內是 的輔酶。泛酸的活性形式有 和 。 二、選擇題（在備選答案中選出1個正確答案） 1.酶催化作用對能量的影響在于 A．增加產物能量水平 B．降低活化能 C．降低反應物能量水平 D．降低反應的自由能 2.米氏方程在推導過程中引入了哪項假設 A. 酶濃度為底物濃度一半

32、 B. 由于酶濃度很大，所以[E]基本不變 C. 由于P→0，所以不考慮反應E+P→ES的存在 D. 忽略反應ES→E+S的存在 3.酶原激活的實質是 A. 激活劑與酶結合使酶激活 B. 酶蛋白的變構效應 C. 酶原分子一級結構發(fā)生改變從而形成或暴露出酶的活性中心 D. 酶原分子的空間構象發(fā)生了變化而一級結構不變 4.乳酸脫氫酶是一個由兩種不同的亞基組成的四聚體。假定這些亞基隨機結合成四聚體，這種酶有多少種同工酶？ A. 六種 B. 三種 C. 四種 D. 五種 5.同工酶的特點是

33、 A. 催化相同的反應，但分子結構和理化性質不同的一類酶 B. 催化相同反應，分子組成相同，但輔酶不同的一類酶 C. 催化同一底物起不同反應的酶的總稱 D. 催化作用，分子組成及理化性質相同，但組織分布不同的酶 6.酶的比活力是指 A. 以某種酶的活力作為1來表示其他酶的相對活力 B. 每毫克蛋白的酶活力單位數 C. 任何純酶的活力與其粗酶的活力比 D. 一種酶與另一種酶的活力比 7.下列哪一項敘述是正確的? A.所有的輔酶都是維生素 B.所有的水溶性維生素都可作為輔酶或輔酶的前體 C.所有的輔酶都含有維生素

34、 D.前列腺素是由脂溶性維生素衍生而來 三、判斷題 1.當[S]>>Km時，v趨向于Vmax，此時只有通過增加[E]來增加v。 2.酶的最適溫度與酶的作用時間有關，作用時間愈長，則最適溫度愈高。 3.在酶的催化反應中，組氨酸殘基的咪唑基既可以起堿化作用，也可以起酸化作用。 4.別構酶的速度-底物關系曲線均呈S形曲線。 5.測定酶活力時，底物濃度不必大于酶濃度。 6.酶的過渡態(tài)底物類似物與底物類似物相比較，是更有效的競爭性抑制劑。 7.維生素對人體有益，所以攝入的越多越好。 8.攝入的維生素C越多，在體內儲存的維生素C就越多。 9.能催化蛋白質磷酸化反應的酶，稱為磷酸化酶。

35、 四、名詞解釋 1．米氏常數； 2．活性中心（active center）； 3. 酶活力（enzyme activity）； 4．別構酶（allosteric enzyme）； 5. 酶原的激活； 6．同工酶（isozyme）； 7. 抗體酶（abzyme）； 8. 不可逆抑制作用（irreversible inhibition）； 9. 可逆抑制作用； 10.競爭性抑制作用（competitive i

36、nhibition）； 11. 反競爭性抑制作用； 12. 共價修飾調節(jié)（covalent modification regulation） 五、分析和計算題 1.何謂酶的專一性？酶的專一性有哪幾類？如何解釋酶作用的專一性？ 2.影響酶反應效率的因素有哪些?它們是如何起作用的? 3.試述研究酶活性中心的方法。 4.稱取25mg蛋白酶配成25mL溶液，取2mL溶液測得含蛋白氮0.2mg，另取0.1mL溶液測酶活力，結果每小時可以水解酪蛋白產生1500μg酪氨酸，假定1個酶活力單位定義為每分鐘產生1μg酪氨酸的酶量，請計算：（1）酶溶液的蛋白濃度及比活。（

37、2）每克純酶制劑的總蛋白含量及總活力。 5.哪些因素影響酶的活性？酶制劑宜如何保存？ 參考答案 一、填空題 1. 活化能， 活化， 加快 2. -1/Km， 1/Vmax 3. n， 小 4. 1:5 5.別構中心， S， 直角雙 6. 蛋白激； 蛋白磷酸酯 7. 競爭性， 非競爭性 8. FAD， NAD+， NADP+ 9. 夜盲，佝僂病，軟骨病，壞血病，糙皮病，維生素B1，維生素B2，惡性貧血，巨幼紅細胞性貧血 10. TPP，FMN，FAD，NAD+，NADP+，磷酸吡哆醛，磷酸吡哆胺，四氫葉酸，羧化酶的輔酶，AC

38、P，CoA 二、選擇題 1.（B） 2.（C） 3.（C） 4.（D） 5.（A） 6.（B） 7.（B） 三、判斷題 1.對。 2.錯。酶最適溫度與酶的作用時間有關，作用時間越長，則最適溫度低。 3.對。 4.錯。別構酶的速度-底物關系曲線不一定均呈S形曲線，負協(xié)同效應為平坦的雙曲線形式。 5.錯。底物應該過量才能更準確的測定酶的活力。 6.對。 7.錯。 8.錯。 9.錯。能催化蛋白質磷酸化反應的酶稱為蛋白激酶。 四、名詞解釋 1.米氏常數（Km值）：是米氏酶的一個重要參數。

39、Ｋm值是酶反應速率（v）達到最大反應速率（Vmax）一半時底物的濃度。米氏常數是酶的特征常數，只與酶的性質有關，不受底物濃度和酶濃度的影響。 2.活性中心：酶分子中由若干個在一級結構上相距很遠，但在空間上彼此靠近的氨基酸殘基集中在一起形成的區(qū)域，可直接與底物結合，并催化底物發(fā)生反應。對于結合酶來說，輔酶或輔基往往是活性中心的組成成分。 3.酶活力：酶催化一定化學反應的能力，可用在一定條件下它所催化的某一化學反應的速率表示。單位：濃度/單位時間。 4.別構酶：或稱變別構酶，一般具有多個亞基，除具有活性中心外，還具有可結合調節(jié)物的別構中心，活性中心負責酶對底物的結合與催化，別構中心負責調節(jié)酶

40、反應速率。 5.酶原的激活：有些酶在細胞內合成和初分泌時，并不表現出催化活性，這種無活性的酶的前身物稱為酶原。在一定條件下，酶原分子的結構發(fā)生改變，無活性的酶原轉化成有活性的酶稱為酶原的激活。 6.同工酶：催化同一種化學反應，但其酶蛋白本身的分子結構、組成及理化性質卻不同的一組酶。 7.抗體酶：也叫催化性抗體，是抗體的高度選擇性和酶的催化能力相結合的產物，本質上是一類具有催化能力的免疫球蛋白，在其可變區(qū)賦予了酶的屬性。 8.不可逆抑制作用：某些抑制劑以共價鍵與酶蛋白中的必需基團結合從而使酶失活，且不能用透析、超濾等物理方法除去，由這種不可逆抑制劑引起的抑制作用稱不可逆抑制作用。 9.

41、可逆抑制作用：抑制劑以非共價鍵與酶蛋白中的必需基團結合，可用透析等物理方法除去抑制劑而使酶重新恢復活性。 10.競爭性抑制作用：競爭性抑制劑具有與底物相似的結構，通常與正常的底物或配體競爭酶的結合部位。這種抑制使Km增大，而Vmax不變。通過增加底物濃度可逆轉競爭性抑制。 11.反競爭性抑制作用：抑制劑與酶-底物復合物結合，而不與游離酶結合的一種抑制作用。這種抑制作用使得Vmax和Km都變小，但Vmax/Km比值不變。 12.共價修飾調節(jié)：可在其他酶的作用下對某種酶的結構通過共價修飾（如磷酸化、腺苷?；?，使該酶在活性形式與非活性形式之間相互轉變，這種調節(jié)稱為共價修飾調節(jié)。 五、分析和

42、計算題 1.酶的專一性是指酶選擇性地催化一種或一類物質發(fā)生某種類型的化學反應。 根據對底物的選擇性，酶的專一性可以分為結構專一性和立體異構專一性。結構專一性指酶對底物的化學鍵或功能團等有選擇，例如肽酶只能水解肽鍵， 酯酶只作用酯鍵。立體異構專一性指酶對底物的構型有選擇。例如只作用于L構型或只作用于順式構型。 根據過渡態(tài)互補假說，酶的專一性實質上是酶與底物分子在結構上互補。 2. 影響酶催化效率的有關因素包括： （1）鄰近效應與定向效應。鄰近效應是指酶與底物結合后，使底物和底物之間、酶的催化基團與底物之間相互靠近而使有效濃度得以升高，從而使反應速率加快的一種效應；定向效應是指反應物的反

43、應基團之間、酶的催化基團與底物的反應基團之間的正確取向產生的效應。 （2）底物形變和誘導契合。當酶遇到底物時，可以使底物分子內敏感鍵中的某些基團的電子云密度增高或降低，產生“電子張力”，使底物分子發(fā)生形變比較接近它的過渡態(tài)，降低了反應活化能，使反應易于發(fā)生。 （3）酸堿催化。酸堿催化是通過瞬時向反應物提供質子或從反應物接受質子以穩(wěn)定過渡態(tài)，加速反應的一類催化機制。 （4）共價催化。在催化時，親核催化劑或親電子催化劑能分別放出電子或接受電子并作用于底物的缺電子中心或負電中心，迅速形成不穩(wěn)定的共價中間復合物，降低反應活化能，使反應加速。 （5）微環(huán)境的作用。酶的活性部位形成的微環(huán)境通常是疏

44、水的，由于介電常數較低，可以加強有關基團之間的靜電相互作用，加快酶促反應的速率。在同一個酶促反應中，通常會有上述的3個左右的因素同時起作用，稱作多元催化。 3.酶的活力中心通常包括兩部分：與底物結合的部位稱為結合中心，決定酶的專一性；促進底物發(fā)生化學反應的部位稱為催化中心，它決定酶所催化反應的性質以及催化的效率。有些酶的結合中心與催化中心是同一部分。對ES和EI的X-射線晶體分析、NMR分析、對特定基團的化學修飾、使用特異性的抑制劑和對酶作用的動力學研究等方法可用于研究酶的活性中心。 4.（1）蛋白濃度=0.2×6.25mg/2mL=0.625mg/mL； （2）比活力=（1500/60

45、×1ml/0.1mL）÷0.625mg/mL=400U/mg； （3）總蛋白=0.625mg/mL×1000mL=625mg； （4）總活力=625mg×400U/mg=2.5×105U。 5.底物濃度、酶含量、溫度、pH、產物等均影響酶的活性，激活劑或抑制劑也會強烈影響酶的活性。酶在細胞或組織中是受到細胞調控的。細胞對酶活性的控制主要是通過代謝反饋、可逆的共價修飾、細胞區(qū)室化和酶原激活等控制。 制備酶制劑時，要盡量避免高溫、極端pH、抑制劑等的影響，酶制劑應盡可能制成固體，并在低溫下保存。無法制成固體的酶，可在液態(tài)低溫保存，但要注意某些液態(tài)酶在冰凍時會失去活性。 第3部分 核酸

46、 一、填空題 1．核酸完全的水解產物是________、_________和含氮堿。其中含氮堿又可分為________堿和__________堿。 2．mRNA在細胞內的種類多，但只占RNA總量的____，它是以_____為模板合成的，又是_______合成的模板。 3．嘌呤環(huán)上的第________位氮原子與戊糖的第________位碳原子相連形成________鍵，通過這種鍵相連而成的化合物叫_________。 4．體內兩種主要的環(huán)核苷酸是_________和_________。 5．寫出下列核苷酸符號的中文名稱：ATP__________，dCDP________。 6．核

47、酸的基本結構單位是_____。 7．tRNA的三葉草型結構中有________環(huán)，________環(huán)，________環(huán)及________環(huán)，還有________。 8．tRNA的三葉草型結構中，其中氨基酸臂的功能是_________，反密碼環(huán)的功能是___________。 9．真核細胞的mRNA帽子由___組成，其尾部由___組成，他們的功能分別是______，_______。 10．DNA熱變性之后，如果將溶液迅速冷卻，則DNA保持____狀態(tài)；若使溶液緩慢冷卻，則DNA重新形成___。 11．脫氧核糖核酸在糖環(huán)______位置不帶羥基。 12．核酸分子中的糖苷鍵均為____

48、_型糖苷鍵。糖環(huán)與堿基之間的連鍵為_____鍵。核苷與核苷之間通過_____鍵連接成多聚體。?? 13．核酸的特征元素____。 14．堿基與戊糖間是C-C連接的是______核苷。? 15．tRNA的二級結構呈___形，三級結構呈___形，其3＇末端有一共同堿基序列___其功能是___。? 16．常見的環(huán)化核苷酸有___和___。其作用是___，他們核糖上的___位與___位磷酸-OH環(huán)化。 17．給動物食用3H標記的_______，可使DNA帶有放射性，而RNA不帶放射性。 18．B型DNA雙螺旋的螺距為___，每匝螺旋有___對堿基，每對堿基的轉角是___。 19．一般來說

49、DNA中G-C含量高時，比重___，Tm（熔解溫度）___，分子比較穩(wěn)定。 20．在___條件下，互補的單股核苷酸序列將締結成雙鏈分子。 21．____RNA指導蛋白質合成，_____RNA用作蛋白質合成中活化氨基酸的載體。 22．維持DNA雙螺旋結構穩(wěn)定的主要因素是_____，其次，大量存在于DNA分子中的弱作用力如_____，______和_____也起一定作用。? 23．DNA變性后，紫外吸收___，粘度下降、浮力密度升高，生物活性將___。 24．DNA樣品的均一性愈高，其熔解過程的溫度范圍愈______。 25．變性DNA 的復性與許多因素有關，包括樣品的均一度，____

50、，____，溫度的影響，溶液離子強度等。 二、選擇題 1．自然界游離核苷酸中，磷酸最常見是位于： A．戊糖的C-5′上 B．戊糖的C-2′上 C．戊糖的C-3′上 D．戊糖的C-2′和C-3′上 2．可用于測量生物樣品中核酸含量的元素是： A．碳 B．氫 C．氧 D．磷 3．下列哪種堿基只存在于RNA而不存在于DNA： A．尿嘧啶 B．腺嘌呤 C．胞嘧啶 D．胸腺嘧啶 4．核酸中核苷酸之間的連接方式是： A．2′，3′磷酸二酯鍵 B．糖苷鍵 C．2′，5′磷酸二酯鍵 D．3′，5

51、′磷酸二酯鍵 5．核酸對紫外線的最大吸收峰在哪一波長附近？ A．280nm B．260nm C．200nm D．340nm 6．有關RNA的描寫哪項是錯誤的： A．mRNA分子中含有遺傳密碼 B．tRNA是分子量最小的一種RNA C．胞漿中只有mRNA D．組成核糖體的主要是rRNA 7．大部分真核細胞mRNA的3′-末端都具有： A．多聚A B．多聚U C．多聚T D．多聚C 8．DNA變性是指： A．分子中磷酸二酯鍵斷裂 B．多核苷酸鏈解聚 C．DNA分子中堿基丟失

52、 D．互補堿基之間氫鍵斷裂 9．DNA Tm值較高是由于下列哪組核苷酸含量較高所致？ A．G+A B．C+G C．A+T D．C+T 10．某DNA分子中腺嘌呤的含量為15%，則胞嘧啶的含量應為： A．15% B．30% C．40% D．35% 11．下列對于環(huán)核苷酸的敘述，哪一項是錯誤的？ A．cAMP與cGMP的生物學作用相反?? B． 重要的環(huán)核苷酸有cAMP與cGMP C．cAMP是一種第二信使? D．cAMP分子內有環(huán)化的磷酸二酯鍵 12．hnRNA是下列哪種RNA的前體？ A．

53、tRNA? ???B．rRNA? ? C．mRNA ? ? D．snRNA 13．決定tRNA攜帶氨基酸特異性的關鍵部位是： A．–XCCA3`末端? ?? ? ??B．TψC環(huán) C．DHU環(huán)? ?? ?? ???D．反密碼子環(huán) 14．根據Watson-Crick模型，求得每一微米DNA雙螺旋含核苷酸對的平均數為： A．25400　? ?B．2540? ? ??C．29411? ? D．2941? 15．真核生物mRNA的帽子結構中，m7G與多核苷酸鏈通過三個磷酸基連接，連接方式是： A．2′-5′? ?B．3′-5′

54、 ? ?C．3′-3′? ?D．5′-5′? 16．與片段TAGAp互補的片段為： A．AGATp? ?? ?B．ATCTp? ???C．TCTAp? ? D．UAUAp 17．含有稀有堿基比例較多的核酸是： A．胞核DNA? ? B．線粒體DNA? ?C．tRNA? ?D． mRNA 18．反密碼子GψA，所識別的密碼子是： A．CAU? ? B．UGC? ? C．CGU? ? D．UAC? 19．??DNA變性后理化性質有下述改變： A．對260nm紫外吸收減少? ???B．溶液粘度下降 C．

55、磷酸二酯鍵斷裂? ?? ?? ???D．核苷酸斷裂 20．雙鏈DNA的Tm較高是由于下列哪組核苷酸含量較高所致： A．A+G? ? B．C+T? ? C．A+T? ? D．G+C? 三、判斷題 1．DNA是生物遺傳物質，RNA則不是。 2．脫氧核糖核苷中的糖環(huán)3’位沒有羥基。 3．核酸中的修飾成分（也叫稀有成分）大部分是在tRNA中發(fā)現的。 4．用堿水解核酸時，可以得到2’和3’-核苷酸的混合物。 5．核酸的紫外吸收與溶液的pH值無關。 6．DNA的Tm值和AT含量有關，AT含量高則Tm高。 7．DNA的Tm值隨（A+T）/（G+C）比值的增加而減少。

56、 8．DNA復性（退火）一般在低于其Tm值約20℃的溫度下進行的。 9．真核生物成熟mRNA的兩端均帶有游離的3’-OH。 10．真核生物mRNA的5`端有一個多聚A的結構。 11．生物體內，天然存在的DNA分子多為負超螺旋。 12．mRNA是細胞內種類最多、含量最豐富的RNA。 13．tRNA的二級結構中的額外環(huán)是tRNA分類的重要指標。 14．對于提純的DNA樣品，測得OD260/OD280<1.8，則說明樣品中含有RNA。 15．毫無例外，從結構基因中DNA序列可以推出相應的蛋白質序列。 四、名詞解釋 1.?堿基互補規(guī)律； 2.?DNA的熔解

57、溫度（Tm）； 3.?增色效應； 4.?減色效應； 5.?核酸的變性； 6.?核酸的復性； 7.?退火（annealing）； 8.?分子雜交（molecular hybridization）； 9.?反密碼子（anticodon）； 10.?順反子（cistron） 五、問答題及計算題 1．用1mol/L的KOH溶液水解核酸，兩類核酸（DNA及RNA）的水解有何不同？ 2．如何將分子量相同的單鏈DNA與單鏈RNA分開？ 3．在穩(wěn)定的DNA雙螺旋中，哪兩種力在維系分子立體結構方面起

58、主要作用？ 4．DNA分子二級結構有哪些特點？ 5．簡述tRNA二級結構的組成特點及其每一部分的功能。 6．計算：（1）編碼88個核苷酸的tRNA的基因有多長？ （2）相對分子質量為130×106的病毒DNA分子，每微米的質量是多少？ （3）編碼細胞色素C（104個氨基酸）的基因有多長（不考慮起始和終止序列）？ （4）編碼相對分子質量為9.6萬的蛋白質的mRNA，相對分子質量為多少（設每個氨基酸的平均相對分子量為120）？ 7．如果人體有1014個細胞，每個體細胞的DNA量為6.4×109個堿基對。試計算人體DNA的總長度是多少？是太陽-地球之間距離（2.2×109km）的多少倍

59、？ 8．DNA熱變性有何特點？Tm值表示什么？ 9．在pH7.0，0.165mol/L NaCl條件下，測得某一DNA樣品的Tm為89.3℃。求出四種堿基的百分組成。 10．試述下列因素如何影響DNA的復性：（1）陽離子的存在；（2）低于Tm的溫度；（2）高濃度的DNA鏈。 參考答案 一、填空題 1．磷酸； 戊糖； 嘌呤； 嘧啶 2．5%； DNA； 蛋白質 3． 9； 1； 糖苷鍵； 嘌呤核苷 4． cAMP； cGMP 5．三磷酸腺苷； 脫氧二磷酸胞苷 6．核苷酸 7．二氫尿嘧啶； 反密碼； TφC；

60、 額外； 氨基酸臂 8．與氨基酸結合； 辨認密碼子 9． m7G； polyA； m7G識別起始信號的一部分； polyA對mRNA的穩(wěn)定性具有一定影響 10．單鏈； 雙鏈 11．?2’ 12．β； 糖苷； 磷酸二酯鍵 13．磷 14．假尿嘧啶 15．三葉草； 倒L型； CCA； 攜帶活化了的氨基酸 16． cAMP； cGMP； 第二信使； 3’； 5’ 17．胸腺嘧啶 18． 3.4nm； 10； 36° 19．大； 高 20

61、．退火 21．mRNA； tRNA 22．堿基堆積力；氫鍵； 離子鍵； 范德華力 23．增加； 喪失 24．窄 25． DNA的濃度；DNA片段大小 二、選擇題 1．（A） 2．（D） 3．（A） 4．（D） 5．（B） 6．（C） 7．（A） 8．（D） 9．（B） 10．（D） 11．（A） 12．（C） 13．（D） 14．（D） 1

62、5．（D） 16．（C） 17．（C） 18．（D） 19．（B）?? 20．（D） 三、判斷題 1．錯。2．錯。3．對。4．對。5．錯。6．錯。7．對。8．對。9．對。10．錯。11．對。12．錯。13．對。14．錯。 15．錯。 四、名詞解釋 1.?堿基互補規(guī)律：在形成雙螺旋的過程中，由于各種堿基的大小與結構不同，使堿基之間的配對只能在G…C（或C…G）和A…T（或T…A）之間進行，這種堿基配對的規(guī)律就稱為堿基互補規(guī)律。 2.?DNA的熔解溫度（Tm）：加熱使DNA雙螺旋結構失去一半時的溫度稱熔解溫度(Tm)

63、。 3.?增色效應：當DNA從雙螺旋結構變?yōu)閱捂湹臒o規(guī)則卷曲狀態(tài)時，它在260nm處的光吸收值增加，這叫“增色效應”。 4.?減色效應：變性的核酸復性后e(p)值又回復至原來水平的現象稱減色效應(或雙螺旋核酸在260nm處的吸光值比兩條單鏈或核苷酸吸光值之和小得多)。 5.?核酸的變性：當雙螺旋DNA溶液緩慢加熱時，其中的氫鍵斷開，雙鏈DNA解開為單鏈，叫做核酸的變性。 6.?核酸的復性：在適宜的溫度下，分散開的兩條DNA鏈可以重新結合成雙股螺旋。這個過程稱“復性”。 7.?退火（annealing）：當將雙股鏈呈分散狀態(tài)的DNA溶液緩慢冷卻時，它們可以發(fā)生不同程度的重新結合而形成雙

64、鏈螺旋結構，這現象稱為“退火”。 8.?分子雜交（molecular hybridization）：不同的DNA片段之間，DNA片段與RNA片段之間，如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以形成新的雙螺旋結構。這種按照互補堿基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。 9.?反密碼子（anticodon）：在tRNA鏈上有三個特定的堿基，組成一個密碼子，由這些反密碼子按堿基配對原則識別mRNA鏈上的密碼子。反密碼子與密碼子的方向相反。 10.?順反子（cistron）:基因功能的單位；一段染色體，它是一種多肽鏈的密碼；一種結構基因。 五、問答題及計算題 1．答：不同。R

65、NA可以被水解成單核苷酸，而DNA分子中的脫氧核糖2’-C碳原子上沒有羥基，所以DNA不能被堿水解。 2．答：（1）用專一性的RNA酶與DNA酶分別對兩者進行水解。 （2）用堿水解。RNA能夠被水解，而DNA不被水解。 （3）進行顏色反應。二苯胺試劑可以使DNA變成藍色；苔黑酚（地衣酚）試劑能使RNA變成綠色。 （4）用酸水解后，進行單核苷酸的分析（層析法或電泳法），含有U的是RNA，含有T的是DNA。 3．答：在穩(wěn)定的DNA雙螺旋中，堿基堆積力和堿基配對氫鍵在維系分子立體結構方面起主要作用。 4．答：DNA的結構特點有：兩條反向平行的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸互繞成右手螺旋；糖-磷

66、酸通過磷酸二酯鍵相連，形成核酸的骨架，位于螺旋的外側，糖環(huán)平面則與軸平行；堿基位于螺旋的內側，堿基平面與軸垂直。雙螺旋的直徑為2nm，10對堿基螺旋上升一圈，螺距3.4nm；堿基按A=T、G≡C互補配對，氫鍵相連。維持DNA結構穩(wěn)定的力量主要是堿基堆積力。? 5．答：tRNA的二級結構為三葉草結構。其特征為： （1）由四臂、四環(huán)組成。已配對的片斷稱為臂，未配對的片斷稱為環(huán)。 （2）葉柄是氨基酸臂。其上含有CCA-OH3’，此結構是接受氨基酸的位置。 （3）氨基酸臂對面是反密碼子環(huán)。在它的中部含有三個相鄰堿基組成的反密碼子，可與mRNA上的密碼子相互識別。 （4）左環(huán)是二氫尿嘧啶環(huán)（D環(huán)），它與氨基酰-tRNA合成酶的結合有關。 （5）右環(huán)是TψC環(huán)，它與核糖體的結合有關。 （6）在反密碼子與TψC環(huán)之間的是可變環(huán)，它的大小決定著tRNA分子大小。 6．答：（1）88 × 0.34 nm = 30nm =0.3μm （2）650/ 0.34 =1.9×106 μm （3）104 × 3 × 0.34 =106nm ≈ 0.11μm （4）(96000/120) ×