《SNT 0647-2013出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《SNT 0647-2013出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法（27頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、SNT 0647-2013出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法 入 唱bd SN/T 0647-2013 代替 SN 0647-1997 由印刷曹嚕蒂固回 dHHqdw 酣翻《勾勾曲亂 也V且啕 Bd Determination of maleic hydrazide residues i阻四日ts and 踐阻t products for export-HPLC method 2013圃-03-01 發(fā)布 2013-09皿 16 實(shí)施 在是2 一昔4 家庭貢 人員共和出發(fā)布 監(jiān)督棱驗(yàn)栓痊總局

2、 SN/T 0647-2013 目。高 本標(biāo)準(zhǔn)按照 GB/T 1. 1-2009 給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)代替 SN 0647-1997(( 出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量檢驗(yàn)方法 分光光度法》。本標(biāo) 準(zhǔn)與 SN 0647…1997 相比，除編輯性修改外主要技術(shù)變化如下: 一一標(biāo)準(zhǔn)名稱改為《出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量的測定 高效液相色譜法>> ; …一方法適用范圍中增加了板栗及其制品 一一樣品前處理方法出蒸館法改為提取凈化法; 一一測定方法由分光光度法改為高效液相色譜法。 本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)

3、起草單位:中華人民共和國山東出入境檢驗(yàn)檢疫局。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:叢偉紅、徐成鋼、楊麗君、王靜、時(shí)文春、胡巧茹、劉玉敏、崔風(fēng)杰、侯建全、叢超。 本標(biāo)準(zhǔn)所替代標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為: 一一-SN 0647-1997 0 I 1 范圍 出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量的 測定 高效液相色譜法 SN/T 0647-2013 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中抑芽丹殘留量檢測的制樣和高效液相色譜測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于核桃及制品、板栗及制品中抑芽丹殘留最的測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的

4、引用文件，僅注目期的文件適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本〈包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 方法提要 試樣經(jīng)正己燒脫脂后，用申靜提取，再經(jīng) C18 柱凈化后，高效液相色譜一紫外檢測器檢測，外標(biāo)法 定量。 4 試劑和材料 除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為 GB/丁 6682 中規(guī)定的一級水。 4. 1 甲醇:色譜純。 4.2 正己炕:色譜純。 4.3 乙酸錢。 4.4 氮氧化銷。 4.5 乙酸鍍?nèi)芤?(0. 02 mol/L): 稱取1. 54 g 乙酸餒，加水定容至 1 0

5、00 mL，用前經(jīng) 0.45μm 濾膜 過濾。 4.6 氫氧化納溶液(0. 01 mol/ L):稱取 0.40 g 氮氧化納，加水定容至 1 000 mL。 4. 7 抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(Maleic hydrazide , C4 比N2 02 ,CAS No:123一33…1):純度大于 99.9% 。 4.8 抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取適量抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)品，用 0.01 mol/L 氮氧化鍋溶液(4.6)溶解并稀 釋成濃度為 1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。 4.9 抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:吸取1. 0 mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(4. 的，用 0.01 mol/L 氮氧化鍋溶液(4.

6、6) 稀釋 定容至 100 mL，配制成濃度為 10 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 4.10 微孔濾膜 :0.45μm ，有機(jī)相。 4. 11 固相萃取柱 :C18小柱 ， 3 mL , 500 mg，或相當(dāng)者。依次用 4 mL 甲醇和 4 mL O. 01 mol/L 氫氧化 鈾溶液(4.6) 活化后備用。 5 儀器和設(shè)備 5. 1 高效液相色譜儀:配有紫外或二極管陣列檢測器。 SN/T 0647-2013 5.2 電子天平:感量為 0.000 1 g 和 0.01 g 。 5.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 5.4 均質(zhì)機(jī):轉(zhuǎn)速不低于 10 000 r

7、/mino 5.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于 6 000 r/mino 5.6 渦旋混合器。 5. 7 樣品粉碎機(jī) o 5.8 篩子 :2.0 mm 困孔篩。 5.9 分樣板。 6 試樣的制備與保存 6. 1 一般要求 6.2 試樣制備 將原始樣品的可食部分用四 粒。充分混勻，均分成兩份，裝入J 6.3 試樣保存 將試樣于一 5 oc 以下避光保存。 7 測定步驟 7. 1 去脂肪 稱取 2.5 g 試樣(精確至 o. 己燒均質(zhì) 1 min，以 6 000 r/min 次，棄去正己炕層。 7.2 提取 20 mm

8、 困孔篩的顆 30 min，加 20 mL 正 正己燒按上述步驟重新脫脂一 向離心管中加 20 mL 甲醇，均質(zhì) 1 min ，以 6 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心 5 min，將甲酶層小心取出過濾 到 100 mL 雞心瓶中;殘留物再用 20 mL 甲醇重復(fù)提取一次。合并提取液于上述雞心瓶中， 40 oc旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)至約 8 mL，用氮?dú)獯抵良s 2 mL，加 3 mL 0.01 mol/L 氫氧化鍋溶液(4.6)混勻待凈化。 7.3 凈化 將上述混勻的溶液全部過 C18小柱 (4.1 1)，用 4 mL 0.01 mol/L 氮氧化納溶液(4. 6)洗脫并定容至

9、 10 mL , O. 45μm 濾膜 (4. 10)過濾，備用 o 7.4 高效液相色譜條件 高效液相色譜條件如下: a) 波長 :330 nm; b) 色譜柱:硅膠柱， 3.5μm ， 4.6 mmX 150 mm，或柏當(dāng)者; c) 柱溫 :40 oc 。 2 SN/T 0647-2013 d) 流動(dòng)相 :0.02 mol/L 乙酸鍍?nèi)芤?4.5) ; e) 流動(dòng)相流速 :0.60 mL/min; f) 進(jìn)樣最 :20μL 。 7.5 空白試驗(yàn) 除不加樣品外，均按上述步驟進(jìn)行。 7.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 根據(jù)樣

10、品中抑芽丹含量情況，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣中抑芽丹響 應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性范圍內(nèi)。將系捅磊落王磊磊展玩最主運(yùn)面語系磊衛(wèi)機(jī)測定，記錄色譜峰回積。以 峰頂積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪錦標(biāo)準(zhǔn)由線。 7.7 測定 根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法 條件下，抑芽丹的保留時(shí)間約為 3. /巧。 1 / 8 結(jié)果計(jì)算與表述 i 二 →一一…一「 按式(1)計(jì)算樣品中抑芽丹殘留建: 式中: X 一一樣品中抑芽丹 標(biāo)準(zhǔn)曲線上 V 一一一最終定容體積 m …一所稱取試樣質(zhì) 9 測定低眼和四收率 9. 1 定量限 lQ

11、 /二號 m 子/∞〔 本方法抑芽丹的定量限為 0.2 mg/kg o 9.2 囡收率 樣品的添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表 1 。 表 1 添加濃度及回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 樣品名稱 添加濃度 mg/kg 0.2 核桃 0.4 2.0 …( 1 ) 回收率 % 82. 5~95. 5 81. 2~94. 8 90. 2~100. 2 3 SN/T 0647-2013 表 1 (續(xù)) 樣品名稱 添加濃度 回收率 mg/kg % 0.2 83

12、. 5~96. 5 蜂蜜核桃 0.4 80. 2~ 101. 2 2.0 91. O~ 104.9 0.2 80. 5~94. 0 板栗 0.4 83. 4~97. 8 2.0 90. 2~100. 6 0.2 81. 5~99. 5 糖炒板栗 0.4 84. 2~97. 8 2.0 90. 2~102. 6 4 SN/T 0647一2013 附錄 (資料性附錄) 抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)晶譜圖 A 的。。.的 mAU 6 5 4 z?? 1 1叫 1\

13、 忡……………………一一一__J\JL~一一_.....， .... _....-..-一~ 3 n m // ,,,. 5 4 3 抑芽丹標(biāo)準(zhǔn)品譜圖 (1.5 mg/L) 2 思 A.1 O 5 SN/T 0647-2013 For母word 丁his standard is drafted according to GB/丁 1. 1一2009. 丁his standard substitutes for SN 0647-1997<< Method for the Determinati

14、on of Maleic Hydrazide Residues in Nuts and Nut Procducts for Export… Spectrophotometry)). This standard was modified based on SN 0647-1997 : E盧一一一?？诒R叮 H…'&0>;-…，…M…u山…r口……-霍口…;叩……M…r 1l量 雹H…………n……山';比ιιι叫 山mc-methOd into HPLC method. Regulation Commission for Li

15、jun , Wang Ji噸， -SN 0647-1997. 6 SN/T 0647-2013 B前程rmination of m宿leic hγdrazid暗暗sidues in nuts and nut procducts for export-HPLC method 1 Scope by HPLC of maleic hydrazide residues in nuts and nut in walnut , chestnut and thei r products. 2 Normative referen

16、ces 丁he following referenced of this document. For dated 4 Reagents and mat時(shí)ials Unless otherwise specified , all of the reagents used should be analytical grade , ; water; is the fi rst grade water described by GB/丁 6682. 4. 1 Methanol: HPLC grade. 4.2 Hexane: HPLC grade. 4ω

17、3 Ammonium acetate. 7 SN/T 0647-2013 4.4 Sodium hydroxide. 4.5 Ammonium acetate solutionCO. 02 mol/U : 1. 54 9 Ammonium acetate is dissolved in water and diluted to 1 000 mL ,and filtered through 0.45μm filters before using. 4.6 Sodium hydroxide solution CO. 01 mol/L): 0.4 9

18、sodium hydroxide is dissolved in water and diluted to 1 000 mL… 4. 7 Maleic hydrazide standard: CAS No. 123-33-1 , C4比N2O2 ,Purity>99. 9%. 4. 8 Maleic hydrazide standard stock solution: Accurarely weigh an acequate amont of maleic hydrazide standard , dilute with O. 01 mol/L sodium hy

19、droxide sulutionC4. 6) to form a standard stock solution of 1 mg/mL. 4.9 Maleic hydrazide standard working solution:dilute 1.0 mL of the stock solutionC4. 8) with 0.01 mol/L sodium hydroxide solutionC4. 6) to 100 mL as the standard working solution , the concentration is 10 mg/L. 4.10 Me

20、mbrane filter:O. 45μmCorganic phase). 4. 11 C18 columns: Sep-Pak Cartridges , C18 columns , 3 mL , 500 mg , or equivalent. Each column was conditioned with 4 mL methanol followed by 4 mL O. 01 mol/L sodium hydroxideC4. 6). 5 Apparatus and equipment 5. 1 High唰 performance liquid chromat

21、ography , equipped with UV or DAD. 5.2 Electronic balance: accurate to 0.000 1 9 and O. 01 g. 5.3 Rotary vacuum evaporator. 5.4 Homogenizer: 二三 10 000 r/min. 5. 5 Centrifuge: 注6 000 r/min. 5.6 Vortex mixer. 5. 7 Sample pulverizer. 5.8 Sieve:2.0 mm round-hole sieve. 5.

22、 9 Quartering plate. 8 SN/τ0647-2013 6 Preparation and storage of test sample 6. 1 Requirement In the course of sample preparation , precaution must be taken to avoid contamination or anγfactors which maγcause the change of residue content. 6. 2 Reparation 200 9 sampl

23、e is divided from the edible parts of the original sample by the quartering method. 丁he Sample is pulverized into granules ,and pass through a 20 mm round-hole sieve with a pulverizer. Mix thoroughly and divide equally into two portions , place in clean sample containers as the test samples , s

24、eal and label. 6. 3 Storage of test sample 丁he test samples should be stored below - 5 oC and away from I ight. 7 Procedure 7. 1 Removal of fat A sample of 2. 5 g(accurate to O. 01 g)was weighed into a plastic centrifuge tube(50 ml) ,and mixed with 5 mL water. 了he mixture was s

25、wirled and allowed to soak for 30 min.20 mL hexane was added and the mixture was homogenized for 1 min. Centrifuge for 5 min at 6 000 r/min , and the hexane layer was discarded. Then repeating the operation of homogenate , and the hexane layer was discarded. 7. 2 Extraction 20 mL Methano

26、l was added to the Plastic centrifuge tube , and the mixture was homogenised for 1 min ,and centrifuged at 6 000 r/min for 5 min. 丁he solvent was decanted , and fi Itered into a concentrate bottle(100 mL). The sample was re-homogenised with methanol(20 mL). 丁he contents were filtered and colle

27、cted into the concentrate bottle. Evaporate the mixture to about 8 mL below 40 oC , and then to 2 mL on N-Evap. The extract was added 3 mL O. 01 mol/L sodium hydroxide sulution(4. 6)and mixed. 7.3 Purifi臼tion AII the extracts was purified using C18 columns and colleced (4. 1 日， eluted wit

28、h 4 mL O. 01 mol/L sodium hydroxide solution(4. 6). 丁he extract was quantitatively transferred to 10 mL , and filtered through 0.45μm membrane(4. 10)for HPLC analysis. 9 SN/τ0647一2013 7. 4 HPLC operating conditions: HPLC operating conditions in as following: a) Detector wa

29、velenth: 330 nm; b) HPLC column:Silica gel column ,3. 5μm ， 4.6 mm x 150 mm ,or equivalent; c) Column temperature:40 oc ; d) e) f) Injection volume:20μL. above HPLC operating conditions , the Maleic hydrazide retention time is about 3. 1 minutes. 8 Calculation and express

30、ion of the result Calculate the content of Maleic hydrazide residues in the test sample according to the followed formula(1) . 10 x = C x V x 1 000 m x 1 000 ???? C 1 ) SN/T 0647-2013 Where X -the residue content of Maleic hydrazide in the test sample , mg/kg; c -

31、the concentration of Maleic hydrazide according to the standard curve , mg/L; V -the final volume of the sample solution , mL; m -the mass of the test sample , g. 9 Detection limit and 附covery 9. 1 Limit of quantification τhe determination Limit of this method is O. 2 mg/kg. 9

32、. 2 Recovery The fortified content and recovery of this method is shown in table 1. Table 1一丁he range of fortification and recovery of this method Fortified content Recoverγrange Sample mg/kg % 0.2 82.5-95.5 walnut 0.4 81.2-94.8 2 90.2-100.2 0.2 83.5-96.5 honey

33、walnut 0.4 80.2-101.2 2 91.0-104.9 0.2 80.5-94.0 chestnut 0.4 83.4-97.8 2 90.2-100.6 0.2 81.5-99.5 suger fry chestnut 0.4 84.2-97.8 2 90.2-102.6 巳 ONih 叮ωO H\在 SN/T 0647-2013 Annex A (informative annex) Maleic hydrazide chromatogram of the standa

34、rd 的。。.的 mAU 6 6 一………一一---_......//'-\JL一一一 4 3 2 。 t/min 5 4 Figure A. 1-Maleic hydrazidechromatogram of the standardC1. 5 mg/L) 3 2 O SN_T 0647-2013_頁面_01.tif SN_T 0647-2013_頁面_02.tif SN_T 0647-2013_頁面_03.tif SN_T 0647-2013_頁面_04.tif

35、 SN_T 0647-2013_頁面_05.tif SN_T 0647-2013_頁面_06.tif SN_T 0647-2013_頁面_07.tif SN_T 0647-2013_頁面_08.tif SN_T 0647-2013_頁面_09.tif SN_T 0647-2013_頁面_10.tif SN_T 0647-2013_頁面_11.tif SN_T 0647-2013_頁面_12.tif SN_T 0647-2013_頁面_13.tif SN_T 0647-2013_頁面_14.tif SN_T 0647-2013_頁面_15.tif