DBS61 0012-2016 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 蜂蜜中16種激素殘留的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法.docx
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DBS61 陜西省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) DBS61/0012—2016 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 蜂蜜中16種激素殘留的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布 2016-07-01實(shí)施 2016-06-01發(fā)布 DBS61/0012—2016 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:張璐,李瑩,何強(qiáng),王菡,孔祥虹,鄒陽(yáng),付騁宇。 本標(biāo)準(zhǔn)屬首次發(fā)布。 13 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 蜂蜜中16種激素殘留的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜂蜜中16種激素殘留的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)的檢測(cè)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂蜜中糖皮質(zhì)激素(曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松)、雄性激素(甲睪酮、睪酮)、孕激素(孕酮)、腎上腺皮質(zhì)激素(羥基醋酸去皮質(zhì)酮)16種激素殘留定性和定量測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。 GB/T 1.1 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 試樣經(jīng)酶解,用乙腈提取目標(biāo)化合物后,經(jīng)固相萃取富集凈化,液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。 4 試劑與材料 除非另有說(shuō)明,在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 乙腈:色譜純。 4.2 甲醇:色譜純。 4.3 甲酸:色譜純。 4.4 二氯甲烷。 4.5 乙酸銨。 4.6 乙酸。 4.7 b-葡萄糖醛苷酶/芳香基硫酸酯酶(b-glucuronidase/arylsufastase):含有b-葡萄糖醛苷酶134600 U/mL,芳基硫酸酯酶5200 U/mL。 4.8 無(wú)水硫酸鈉:650 ℃灼燒4 h,在干燥器中冷卻至室溫,貯于密封瓶中備用。 4.9 乙酸銨溶液(0.2 mol/L):稱取15.4 g乙酸銨,加入1000 mL水溶解,用乙酸調(diào)節(jié)pH到5.2。 4.10 二氯甲烷-甲醇(6+4,體積比):60 mL二氯己烷和40 mL甲醇混合。 4.11 0.1 %甲酸水溶液:準(zhǔn)確量取1 mL甲酸加水稀釋至1000 mL。 4.12 乙腈-水溶液(1+9,體積比):10 mL乙腈和90 mL水混合。 4.13 標(biāo)準(zhǔn)品:曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松龍、甲睪酮、睪酮、孕酮、醋酸去氧皮質(zhì)酮,純度均大于97 %,物質(zhì)英文名稱及CAS號(hào)見(jiàn)附錄A。 4.14 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL):分別準(zhǔn)確稱10.0 mg各標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解,搖勻,-18 ℃避光保存,可保存12個(gè)月。 4.15 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1 mg/mL):分別準(zhǔn)確量取1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.025 mL,于25 mL容量瓶中,用水溶解,0 ℃~4 ℃避光保存,可保存6個(gè)月。 4.16 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液:根據(jù)需要,臨時(shí)吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(4.15)用水稀釋,配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0 ℃~4 ℃避光保存,可保存6個(gè)月。 4.17 HLB固相萃取柱(60 mg,3 mL):使用前依次用6 mL二氯甲烷-甲醇(4.10)、6 mL甲醇、6 mL水活化。 4.18 氨基固相萃取柱(60 mg,3 mL):使用前用6 mL二氯甲烷-甲醇(4.10)活化。 5 儀器與設(shè)備 5.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配電噴霧離子源。 5.2 分析天平:感量0.01 mg。 5.3 天平:感量0.01 g。 5.4 振蕩器 5.5 渦旋混勻器 5.6 高速離心機(jī) 5.7 固相萃取裝置 5.8 氮吹儀 5.9 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 5.10 離心管:50 mL。 5.11 有機(jī)系濾膜:0.22 mm。 6 試樣制備與保存 對(duì)無(wú)結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品,將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品,在封閉情況下,置于不超過(guò)60℃的水浴中溫?zé)?,震蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫,分出0.5 kg作為試樣,制備好的樣品置于樣品瓶中,密封,并做上標(biāo)記。 7 測(cè)定步驟 7.1 提取 準(zhǔn)確稱取試樣5 g(精確至0.01 g),于50 mL離心管中,加入20 mL 0.2 mol/L乙酸銨溶液(4.9),渦旋混合,再加入b-葡萄糖醛苷酶/芳香基硫酸酯酶100 mL,于37 ℃±1℃震蕩酶解12 h。取出冷卻至室溫,加入20 mL乙腈震蕩提取15 min,4500 r/min下離心5 min,取乙腈層過(guò)無(wú)水硫酸鈉漏斗。再加入15 mL乙腈,重復(fù)上述提取過(guò)程。合并乙腈層, 40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干,用10 mL 0.2 mol/L乙酸銨溶液(4.9)溶解,待凈化。 7.2 凈化 提取液(7.1)以1.5 mL/min的速度上樣于活化過(guò)的HLB固相萃取柱(4.17)。將小柱減壓抽干。再將活化過(guò)的氨基柱(4.18)串聯(lián)在HLB固相萃取柱下方。用8 mL二氯甲烷-甲醇(4.10)洗脫并收集洗脫液,取下HLB小柱,再用2 mL二氯甲烷-甲醇(4.10)洗氨基柱,合并洗脫液,于40℃氮?dú)獯蹈?,? mL乙腈-水(4.12)溶解殘?jiān)瑴u旋混勻,濾膜(5.11)過(guò)濾,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。 7.4 測(cè)定 7.4.1 液相色譜條件 色譜柱:Hypersil GOLD aQ (2.1×100 mm,3.0 mm), 或相當(dāng)者; 柱溫:40℃; 流速:0.3 mL/min; 進(jìn)樣量:10.0 mL; 流動(dòng)相:乙腈-0.1 %甲酸水,梯度洗脫,洗脫條件參見(jiàn)附錄B; 7.4.2 糖皮質(zhì)激素質(zhì)譜條件 a)電離源:電噴霧離子源; b)離子化方式:負(fù)離子模式; c)檢測(cè)模式:選擇離子反應(yīng)監(jiān)測(cè); d)噴霧電壓:2500 V; e)氣化溫度:300 ℃; f)鞘氣(N2):0.525 L/min; g)輔助氣(N2): 4.5 L/min; h)離子傳輸管溫度:300 ℃; i)去簇電壓:2.0 V; j)碰撞氣(Ar):199.9 Mpa。 k)特征離子參見(jiàn)附錄C.1。 7.4.3 雄性激素、孕激素、腎上腺皮質(zhì)激素質(zhì)譜條件 a)電離源:電噴霧離子源; b)離子化方式:正離子模式; c)檢測(cè)模式:選擇離子反應(yīng)監(jiān)測(cè); d)噴霧電壓:3300 V; e)氣化溫度:300 ℃; f)鞘氣(N2):0.525 L/min; g)輔助氣(N2): 4.5 L/min; h)離子傳輸管溫度:300 ℃; i)去簇電壓:2.0 V; j)碰撞氣(Ar):199.9 Mpa k)特征離子參數(shù)見(jiàn)附錄C. 2。 7.4.4 測(cè)定法 7.4.4.1 定性測(cè)定 通過(guò)試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與響應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子相對(duì)照定性,試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于5 %;試樣特征離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致,相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表1的規(guī)定,則可判斷試樣中存在相應(yīng)的被測(cè)物。 表1 試樣溶液中離子相對(duì)豐度的允許偏差范圍 相對(duì)豐度(%) >50 > 20~50 >10~20 ≤10 允許偏差(%) ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.4.2 定量測(cè)定 根據(jù)試樣中被測(cè)樣液的含量情況,按外標(biāo)法,以峰面積定量。選取待測(cè)物的響應(yīng)值在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)的濃度進(jìn)行測(cè)定,如果超出儀器線性響應(yīng)范圍應(yīng)進(jìn)行稀釋。在上述條件下,標(biāo)準(zhǔn)溶液中各目標(biāo)化合物的特征離子流色譜圖見(jiàn)附錄D。 7.5 平行試驗(yàn) 按照7.1至7.4所述的測(cè)定條件和步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。 7.6 空白試驗(yàn) 除不稱取試樣外,均按7.1至7.4所述的測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。 8 結(jié)果計(jì)算和表達(dá) 試樣中各目標(biāo)化合物殘留量(mg/kg):按式(1)計(jì)算: ………………………………(1) 式中: X—供試試樣中各目標(biāo)化合物殘留量,單位為微克每千克(mg/kg); A—試樣溶液中各目標(biāo)化合物的峰面積; Cs—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各目標(biāo)化合物的濃度,單位為微克每升(mg/L); V—樣液最終定容體積,單位為毫升(mL); As—標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各目標(biāo)化合物的濃度,單位為微克每升(mg/L); m—試樣質(zhì)量,單位為克(g)。 注:計(jì)算結(jié)果需扣除空白值,測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示,保留兩位有效數(shù)字。 9 定量限、回收率和精密度 9.1 檢出限 本方法曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、甲睪酮、睪酮、孕酮、醋酸去氧皮質(zhì)酮檢出限均為1.0 mg /kg,醋酸潑尼松檢出限為2.0 mg /kg。 9.2 回收率 蜂蜜中各種激素的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附錄E,在1.0~5.0 mg/kg添加水平上的回收率范圍為68.2 %~102.2 %。 9.3 精密度 本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤15 %。 附 錄 A (規(guī)范性附錄) 16種激素物質(zhì)的CAS號(hào)、分子式、分子量及英文名稱 A.1 16種激素物質(zhì)的CAS號(hào)、分子式、分子量及英文名稱 應(yīng)符合表A.1的規(guī)定。 表 A.1 化合物 CAS號(hào) 分子式 分子量 醋酸潑尼松龍Prednisolone Acetate 52-21-1 C23H30O6 402.48 醋酸可的松Cortisone Acetate 50-04-4 C23H30O6 402.48 潑尼松龍Prednisolone 50-24-8 C21H28O5 360.44 氫化可的松Hydrocortisone 50-23-7 C21H30O5 362.47 甲基潑尼松龍Methylprednisolone 83-43-2 C22H30O5? 374.47 醋酸地塞米松Dexamethasone Acetate 55812-90-3 C24H31FO7 434.5 地塞米松Dexamethasone 50-02-2 C22H29FO5 392.46 曲安西龍Triamcinolone 124-94-7 C21H27FO6 394.44 氟米松Flumethasone 2135-17-3 C22H28F2O5 410.45 氟氫可的松Fludrocortisone 127-31-1? C21H29FO5 380.45 曲安奈德Triamcinolone Acetonide 76-25-5 C24H31FO6 434.49 醋酸氟氫松Fluocinolone Acetonide 67-73-2 ?C24H30F2O6 452.49 睪酮Testosterone 58-22-0 C19H28O2 288.42 甲睪酮Methyltestosterone 58-18-4 C20H30O2 302.45 孕酮Progesterone 57-83-0 C21H30O2 314.46 醋酸去氧皮質(zhì)酮21-Hydroxyprogesterone-21-acetate 56-47-3 C23H32O4 372.- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來(lái)的問(wèn)題本站不予受理。
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