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DBS 53 云南省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) DBS 53/ 014—2013 食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類的測(cè)定 高效液相色譜法 2013 - 10 - 20發(fā)布 2014 - 04 - 20實(shí)施 云南省衛(wèi)生廳發(fā)布 DB53/ 014—2013 前言 本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。 3 食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類的測(cè)定 高效液相色譜法 1　 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于醬油、醋、果醬、糕點(diǎn)、腌制品、果酒及飲料等食品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯。 本標(biāo)準(zhǔn)檢出限：對(duì)羥基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；對(duì)羥基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；對(duì)羥基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；對(duì)羥基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。 2　 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3　 原理 試樣用乙醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜法分離，二極管或紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 4　 試劑和材料 除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 4.1　 甲醇（色譜純）。 4.2　 乙酸銨（分析純）。 4.3　 20 mmol/L乙酸銨溶液：準(zhǔn)確稱取1.54 g乙酸銨（4.2）用水定容至1000 ml，過0.45μm濾膜。 4.4　 無水乙醇（分析純）。 4.5　 對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯：99 %以上。 4.6　 對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀釋至刻度，該溶液每毫升相當(dāng)于1 mg的對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯。 4.7　 對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇（4.1）依次稀釋成1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用前配制。 4.8　 微孔針式濾膜：有機(jī)相，0.22 μm。 5　 儀器和設(shè)備 5.1　 高效液相色譜儀：帶可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。 5.2　 超聲波清洗器。 6　 分析步驟 6.1　 提取 稱取5.0 g（精確至0.01 g）試樣于50 ml比色管中，加入15 ml乙醇（4.4），混勻，超聲波清洗器提取10 min，冷卻至室溫后用乙醇（4.4）定容至50 ml刻度線，搖勻、靜置、取上層液體經(jīng)微孔濾膜（4.8）過濾后待測(cè)。 6.2　 色譜條件 a) 色譜柱：C18柱，150×4.6 mm（i.d），5 μm，或性能相當(dāng)者； b) 流動(dòng)相：甲醇B（4.1）：20 mmol/L 乙酸銨溶液A（4.3）= 40 + 60（體積比）； c) 洗脫梯度見表1； 表1　 對(duì)羥基苯甲酸酯類的洗脫程序 時(shí)間/min 2.00 4.00 12.00 12.01 15.00 B% 40 60 60 40 stop d) 流速：1 ml/min； e) 柱溫：35 ℃； f) 進(jìn)樣體積：10 μl； g) 檢測(cè)波長(zhǎng)：256 nm。 6.3　 測(cè)定步驟 在相同實(shí)驗(yàn)條件下，樣液中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間，與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的保留時(shí)間偏差在±2 %之內(nèi)；則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。 將標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.7）按照濃度由低到高的順序進(jìn)樣測(cè)定，以各組分峰面積對(duì)其濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣進(jìn)樣后，以各組分在256 nm波長(zhǎng)下對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。 6.4　 計(jì)算 按照下式計(jì)算試樣中各組分的含量： (1) 式中： ——試樣中某組分的含量，單位為mg/kg； c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣中某組分的濃度，單位為μg/ml； V——試樣溶液的體積，單位為ml； m——試樣質(zhì)量，單位為g。 7　 精密度 在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過算術(shù)平均值的10 %。 A A 附　錄　A （資料性附錄） 4種對(duì)羥基苯甲酸酯類的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖 注： 出峰順序依次為：對(duì)羥基苯甲酸甲酯；對(duì)羥基苯甲酸乙酯；對(duì)羥基苯甲酸丙酯；對(duì)羥基苯甲酸丁酯 圖A.1　 4種對(duì)羥基苯甲酸酯類的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖 _________________________________