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2019-2020年高中生物 實驗10 泡菜的腌制和亞硝酸的測定教案 浙科版選修1 一、實驗原理 亞硝酸鹽可以與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，這一產(chǎn)物再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物，可用光電比色法定量。 二、實驗?zāi)康? 1、進(jìn)行泡菜的腌制； 2、進(jìn)行亞硝酸鹽的測定。 三、實驗用具及材料 泡菜罐、蔬菜、三角瓶、量筒、燒杯、試管及試管架、pH試紙、容量瓶、研磨過濾器或研缽、微量可調(diào)移液器、分光光度計、亞硝酸鹽含量的測定試劑盒。 三、試劑配制 硫酸鋅溶液：稱取18g ZnSO47H2O固體加水溶解，稀釋至150mL?；靹蚝髠溆?。 氫氧化鈉溶液：稱取20g NaOH固體，加水至250mL，備用。 N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：向含有0.08g N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽固體的離心管中加入1mL60%乙酸充分溶解，然后將以上溶解液加入到79mL60%乙酸中再溶解，混勻后，在冰箱中4℃避光保存，1周內(nèi)穩(wěn)定。 對氨基苯磺酸溶液：稱取0.8g對氨基苯磺酸固體溶于56mL蒸餾水和24mL冰乙酸中，棕色瓶室溫保存，使用時取上清液。 顯色液：將N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液與對氨基苯磺酸溶液(上清液)等體積混合。 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲液：向含有0.025g亞硝酸鈉固體的離心管中加入1mL蒸餾水充分溶解，然后將以上溶解液轉(zhuǎn)移到100mL燒杯中，向燒杯內(nèi)加入19mL蒸餾水和10mL NH4Cl緩沖液混合，再移至50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至50mL，冰箱中避光保存。 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(測定時用)：取1mL亞硝酸鈉儲液，移至100mL容量瓶中，加蒸餾定容，即制得5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液。 四、實驗步驟 1、泡菜腌制 （1）各種菜（蘿卜、白菜等）洗凈并切成3～4cm長的小塊。 （2）按照清水與鹽的質(zhì)量比4:1的比例配制鹽水，將鹽水煮沸冷卻。 （3）將經(jīng)過預(yù)處理的新鮮蔬菜混合均勻，裝入泡菜壇內(nèi)，加入鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。 （4）將壇口用水封好，防止外界空氣進(jìn)入。 （5）泡菜發(fā)酵。 2、亞硝酸鹽的定量測定 （1）樣品處理：腌制的泡菜5g及少量泡菜湯，加入研磨過濾器中，將研磨液轉(zhuǎn)移至100mL燒杯中，接著用20mL水洗滌研磨過濾器，合并濾液，用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)至8.0，再加入5mL硫酸鋅溶液，混勻，如不產(chǎn)生白色沉淀，再加入氫氧化鈉溶液至產(chǎn)生白色沉淀為止。在水浴中加熱至60℃，10min后，冷卻至室溫，用濾紙過濾，用少量水淋洗沉淀2－3次，將濾液和洗滌液在100mL容量瓶中定容。 （2）測定：取2mL樣品溶液，置于有刻線試管中，加入900μL NH4Cl緩沖液，500μL60%乙酸和1mL顯色液，加水定容至5mL，混合混勻，暗處靜止25min；用光程1cm的比色杯在550nm處測定光密度值。以2mL水為空白對照。 （3）標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取0，100，200，600，1000μL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于有刻線試管中，各加入900μL NH4Cl緩沖液，500μL60%乙酸和1mL顯色液，加水定容至5mL，混合混勻，暗處靜止25min；用光程1cm的比色杯在550nm處分別測定吸光度值。以亞硝酸鈉質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （4）計算：X1=（m21000V1）/（m1V2 1000） 式中：X1為樣品中亞硝酸鈉含量，單位mg /Kg；m1為樣品質(zhì)量，單位g； m2為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位μg；V1為樣品處理液總體積；V2為測定用樣品液體積。若按照以上實驗步驟，則m1 =5、V1=100、V2=2。 五、實驗結(jié)果與分析 1、標(biāo)準(zhǔn)顯色液 不同濃度亞硝酸鈉溶液與顯色液反應(yīng)后的顏色梯度見下圖：